UPLC-MS/MS 法检测黄鳝中氯霉素类药物残留探析

于芳

（新疆兽药饲料监察所 830063）

1 试验材料

1.1 样品选取

本次试验中选取的黄鳝样品来源于当地苏果超市，经过12d 的人工养殖，在养殖期间只投喂蚯蚓等饲料，养殖采用的水源经过阳光暴晒清除内部氯气，经过12d 后取出，将可以食用的部分肌肉粉碎，放入-20℃的冰箱中冷藏。

1.2 试剂制备

本次试验使用的对照品中氯霉素为K0350706，浓度为99.5%；甲砜霉素为K0241009，浓度为99.7%；氟苯尼考为C13665000，浓度为99.0%；在本次试验标准品中，d3-甲砜霉素为T344163，剂量为1mg；d3-氟苯尼考型号为F405751，剂量为1mg；标准液d5-氯霉素XA111200AC，剂量为100μg/ml；乙腈与甲醇均为色谱纯；无水硫酸钠为分析纯；氯霉素类药物的储备液均称取适量的氯霉素、氟苯尼考与甲砜霉素混合，经过甲醇溶解定容后配制出100μg/ml 的储备液，放置在-20℃下存储；氯霉素工作液的制备：采用100μg/ml 的氯霉素药物标准液，经过甲醇稀释后配制成标准工作液，放置在4℃温度下存储[1]。

1.3 仪器

本次试验主要采用高速冷冻离心机、超声波清洗器、涡旋混合仪、超高效液相色谱-串联质谱仪、氮吹机。

2 试验方法

2.1 液相条件

色谱柱采用尺寸为2.1mm×50mm，直径为1.7，型号为C18 柱；流速为0.4ml/min；柱体温度控制在40℃左右；进样量为10μL；其流动相条件如下：当时间为0 时，水含量为83%，乙腈含量为17%；当时间为3.0min 时，水含量为17%，乙腈含量为83%；当时间为4.0 时，水含量为17%，乙腈含量为83%；当时间为4.1 时，水含量为83%，乙腈含量为17%；当时间为5.0 时，水含量为83%，乙腈含量为17%。

2.2 质谱条件

离子源采用电喷雾类型；毛细管电压为2500V；监测模式采用多反应、负离子模式；锥孔电压为40V；离子源的温度在500℃左右，对不同分析物的锥孔电压、驻留时间、碰撞能量与离子对指标进行分析，结果如下：对氯霉素分析时母离子为321m/z、子离子为152m/z、驻留时间为0.034s、碰撞能量为18eV、锥孔电压为40V；对甲砜霉素进行分析时，母离子为354m/z、子离子为185m/z、驻留时间为0.034s、碰撞能量为23eV、锥孔电压为40V；对氟苯尼考分析时，母离子为356m/z、子离子为336m/z、驻留时间为0.034s、碰撞能量为9eV、锥孔电压为40V；对d3 甲砜霉素分析时，母离子为357m/z、子离子为188m/z、驻留时间为0.034s、碰撞能量为22eV、锥孔电压为40V。

2.3 稳定性

检测储备液时，取100μg/ml 氯霉素储备液，放置在-20℃下存储，分别存储0、3、6 月去除，将其稀释为浓度较低的工作液，即20μg/ml，将剂量为100μL 的内标工作液混合后进行监测，6 个月后检验其稳定性。

2.4 检测限与定量限

分别将3 种药剂添加到空白饵料中，每个浓度重复5 次；检测限为3 倍信噪比浓度；定量限为10 倍信噪比浓度[2]。

2.5 回收率与精密度

将高、中、低3 个浓度的混合溶液加入空白饵料中，通过加标回收试验的方式，每个浓度采用5 个相同的样品，连续测定3d，对回收率与精密度进行计算。

3 试验结果

3.1 稳定性

将氯霉素药物储备液分别放置0 月、3 月与6 月去除，从试验数据可知，该药物在-20℃环境下较为稳定，相对标准偏差RSD 数值低于20%。由此可见，此类药物在此温度下至少可存储6 个月。通过冻融稳定性试验可知，经反复冻融后，浓度稳定性较强，精密度RSD 的数值不超过15%，可见该样品可以冷冻存储，且不会对检测结果产生不良影响。

3.2 检测限与定量限

通过检测结果可知，甲砜霉素、氯霉素与氟苯尼考在黄鳝中的检测限为0.1μg/ml，定量限为0.3μg/ml。其中氯霉素检测限与欧盟标准相比较低，另外两种与规定相比均低于百倍以上，满足药物残留灵敏度的要求。

3.3 精密度与回收率

试验结果表明，黄鳝中氯霉素为0.3、0.45、0.6μg/kg 时，回收率为92.89%～111.26%；氟苯尼考的添加量为50、100、150μg/kg 时，回收率为86.76%～107.30%；甲砜霉素的添加量在25、50、75μg/kg 时，回收率为96.21%～104.14%。从整体来看，上述3 种药物的回收率均值处于86.76%～111.26%，日精密度在2.16%～13.66%。

4 结语

综上所述，UPLC-MS/MS 法的应用无需使用较多样品与溶剂，且步骤较为简便，检测周期较短，色谱与质谱中分离能力、离子化特性较为相似，可有效降低基质效应的影响，可见UPLC-MS/MS 法具有较强的可靠性。