3项指标在不同病理分级脑胶质瘤中的表达及临床意义

李 斌,李 娜

湖北省孝感市汉川市人民医院神经外科,湖北孝感 430000

脑胶质瘤是一种常见的成人颅内恶性肿瘤,国内资料统计结果显示,脑胶质瘤占颅内肿瘤的35.26%～60.96%[1],目前对其发生机制尚不十分清楚,侵袭性强是脑胶质瘤的重要临床特征之一,治疗效果及患者预后较差,致残、致死率高[2]。据统计,恶性脑胶质瘤5年病死率居全身肿瘤的第3位,仅次于胰腺癌和肺癌[3]。白细胞介素-17(IL-17)是一种具有促进炎症作用的细胞因子,有研究发现IL-17与肿瘤的发生、发展等一系列过程密切相关[4],但其在颅内肿瘤中的研究多集中于体外研究。血管内皮生长因子(VEGF)是促血管生成的主要因子,有研究证实VEGF可直接或间接参与血管形成的每一个过程,促进新生血管生长,加速肿瘤生长及转移[5]。胶质纤维酸性蛋白(GFAP)是确定颅内胶质瘤的标志蛋白[6]。目前，关于GFAP在脑恶性胶质瘤病理分级中的研究报道较多,但关于IL-17、VEGF的报道分析较少,本研究旨在分析IL-17、VEGF、GFAP在不同病理分级脑胶质瘤中的表达及临床意义,为进一步研究胶质瘤提供理论依据,现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2016年3月至2019年3月本院神经外科手术切除并经病理检查证实的脑胶质瘤患者62例纳入脑胶质瘤组,术前均未接受放疗、化疗及生物免疫等辅助治疗，其中男34例,女28例；年龄20～72岁,平均(43.18±8.45)岁。所有标本常规切片,经常规组织病理学检查,其中确诊星形细胞瘤34例,胶质母细胞瘤21例,少突星形细胞瘤4例,毛细胞形细胞瘤3例,并根据2016年WHO中枢神经系统肿瘤分类标准进行分类[7],其中Ⅰ级3例,Ⅱ级27例,Ⅲ级23例,Ⅳ级9例。另选择30例于本院神经外科因颅脑外伤接受去骨瓣减压手术的患者纳入对照组，其中男19例，女11例；年龄19～68岁，平均(42.38±11.32)岁。所有研究对象及家属均自愿参与本研究,并签订知情同意书,本研究获得本院医学伦理委员会批准。

1.2试剂 鼠抗人IL-17单克隆抗体、鼠抗人VEGF单克隆抗体、鼠抗人GFAP单克隆抗体、通用型SP广谱试剂盒、DAB显色剂、磷酸盐缓冲液(PBS)均购自上海亿新生物科技有限公司。

1.3方法 将所有脑组织标本经10%中性甲醛固定,常规石蜡包埋,4 μm连续切片,行HE染色及免疫组化SP染色,按试剂盒说明书进行操作,以PBS代替一抗做阴性对照,用已知阳性切片做阳性对照。

1.4判断标准 IL-17表达于细胞质,呈棕黄色或棕褐色颗粒；VEGF表达于细胞质,呈棕黄色颗粒；GFAP表达于细胞质和细胞膜,呈棕黄色颗粒。在高倍镜视野下(×400)随机取5个视野(每个视野计数100个肿瘤细胞),计算阳性细胞百分率,0分:<10%；1分:10%～<26%；2分:26%～<51%；3分:51%～75%；4分:>75%。并评价染色强度,0分:无色；1分:淡黄色；2分:棕黄色；3分:棕色或棕褐色。以二者计分乘积>4分定义为阳性。

1.5统计学处理 采用SPSS19.0统计软件进行数据处理及统计分析,计数资料以例数或百分率表示,多组间比较采用χ2检验，多组间中的两组比较采用Fisher确切概率法；采用Spearman等级相关分析IL-17、VEGF、GFAP的表达与脑胶质瘤分级的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1两组脑组织中3项指标的表达情况比较 IL-17、VEGF在对照组的正常脑组织中不表达,GFAP在脑胶质瘤组的脑胶质瘤组织中低表达。两组研究对象的IL-17、VEGF、GFAP阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组脑组织中3项指标的表达情况比较[n(%)]

2.2不同级别脑胶质瘤组织中3项指标的表达情况比较 IL-17、VEGF的表达阳性率随脑胶质瘤分级升高呈上升趋势,以Ⅳ级脑胶质瘤组织中表达最高,两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)；GFAP的表达阳性率随脑胶质瘤分级升高呈降低趋势,以Ⅳ级脑胶质瘤组织中表达最低,两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同级别脑胶质瘤组织中3项指标的表达情况比较 [n(%)]

2.3IL-17、VEGF、GFAP的表达与脑胶质瘤分级的相关性 Spearman等级相关分析显示,IL-17、VEGF的表达与脑胶质瘤分级呈显著正相关(r=0.408、0.528,P<0.05),GFAP的表达与脑胶质瘤分级呈显著负相关(r=-0.659,P<0.05)。

3 讨 论

目前,CT、MRI等影像学检查及活组织病理检查是临床诊断脑胶质瘤及判断预后的主要方法[8],虽然近年来影像学成像技术得到了大幅度的提高,但通过影像学诊断费用较高,且阅片者的主观因素对肿瘤影像学的评估结果影响较大,尤其是对于脑胶质瘤级别的判断较为模糊,从而会对治疗方案的确定及预后判定造成极大影响[9]。而病理检查虽然结果精准,但检查过程较为复杂,多为手术或活检等有创方式,因而限制了其临床应用[10]。

IL-17是由活化CD4+T辅助细胞产生的具有促炎症作用的细胞因子,在招募中性粒细胞、促进细胞增殖及促进炎性因子释放等过程中具有较强的生物学作用,与抑制排斥反应、哮喘、类风湿性关节炎等免疫性疾病密切相关[11]。且有研究发现,IL-17在卵巢癌、结肠癌等多种肿瘤组织中表达明显升高,推测其参与了肿瘤的发生、发展等一系列过程[12],但其在颅内肿瘤中的研究多集中于体外研究。VEGF属血小板源性生长因子超家族成员,是肿瘤形成过程中最重要的刺激因子,在血管发生及形成过程中均可起到重要的作用:一方面可通过其受体特异性结合刺激血管内皮细胞增殖,诱导产生蛋白水解酶、间质胶原酶及组织因子促血管生长；另一方面还可以提高血管通透性,导致血浆蛋白及纤维蛋白原外渗，引发肿瘤间质水肿,使细胞外基质改变,为肿瘤的浸润和转移提供重要前提条件[13]。本研究发现,IL-17、VEGF在正常脑组织中不表达,脑胶质瘤和正常脑组织中IL-17、VEGF的表达阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05),IL-17、VEGF的表达阳性率随脑胶质瘤分级升高呈上升趋势,Spearman等级相关分析显示IL-17、VEGF的表达与脑胶质瘤分级呈显著正相关,表明IL-17、VEGF在脑胶质瘤的发生、发展中具有重要作用,且与脑胶质瘤的恶性程度有关,IL-17、VEGF高表达提示脑胶质瘤的恶性程度越高、浸润越明显、预后越差。GFAP是胶质瘤的重要标志蛋白,临床病理研究中常用于鉴别脑肿瘤的分化方向[14]。本研究发现,GFAP在脑胶质瘤组织中低表达,脑胶质瘤和正常脑组织中GFAP的表达阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05),GFAP的表达阳性率随脑胶质瘤分级升高呈降低趋势,Spearman等级相关分析显示GFAP的表达与脑胶质瘤分级呈显著负相关,与陈梅花等[6]研究结论基本一致,认为可将GFAP作为反映脑胶质瘤恶性程度的重要生物学指标,但其具体的作用机制及潜在应用价值还有待进一步深入研究。

综上所述,IL-17、VEGF、GFAP在脑胶质瘤发生、发展中起重要调节作用,3项指标的表达可作为反映脑胶质瘤恶性程度的重要生物学指标,为患者的个性化诊治及预后判断提供重要依据。