临泉产穿心莲地上部分黄酮类化学成分研究△

韩婧，刘惠文，吴娟，许凤清，2，杨青山，2，王国凯，2，刘劲松，2*

1.安徽中医药大学 药学院，安徽 合肥 230012；2.安徽道地中药材品质提升协同创新中心，安徽 合肥 230012

穿心莲Andrographispaniculata(Burm.f.)Nees为爵床科穿心莲属植物，又名一见喜、苦草、斩蛇草、印度草等。原产地可能为南亚，其茎、叶极苦，具有清热解毒之功效[1]。因其抗病毒和广谱抗菌作用，被称为“天然抗生素”[2]。我国于20世纪50年代先在福建、广东地区引种了穿心莲，后于广西、湖南、四川及华北和西北地区相继栽培[3]。穿心莲属植物中富含黄酮类和二萜内酯类成分[4-5]。安徽临泉已有多年穿心莲引种历史，现已成为穿心莲的中药材生产质量管理规范(GAP)生产基地[6]。本实验对临泉GAP基地穿心莲地上部分进行化学成分系统研究，明确该产区穿心莲物质基础，为穿心莲引种种植研究进行有益的探索。

1 材料与方法

1.1 仪器

Bruker AV 400 MHz或AVANCE Ⅲ-600 MHz核磁共振仪(德国Bruker BioSpin GmbH公司)；Waters Xbridge C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；Waters Sunfire C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；HP1100 型高效液相色谱仪、UPLC-IT-TOF色谱质谱联用仪(美国Agilent公司)；中压液相色谱仪(瑞士BUCHI公司)；XRC-1型显微熔点仪(四川大学科仪厂生产)；KH-2100薄层色谱分析仪(上海科哲公司)。

1.2 试药

柱色谱硅胶(200～300目，青岛海洋化工厂)，薄层色谱硅胶板(青岛海洋硅胶试剂厂)；反相填充材料RP-18(20～45 μm，日本Fuji Silysia Chemical公司)；MCI填充材料MCI-gel CHP-20P(日本三菱公司)；Sephadex LH-20(瑞典Amershanm Biosciences公司)。

穿心莲药材于2017年6月采于安徽省阜阳市临泉县牛庄，经安徽中医药大学杨青山教授鉴定为爵床科穿心莲属植物穿心莲Andrographispaniculata(Burm.f.)Nees的地上部分。

1.3 提取与分离

将干燥的穿心莲地上部分32 kg，粉碎，用90%乙醇水回流提取3次，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯及正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取浸膏189 g，乙酸乙酯萃取浸膏403 g和正丁醇萃取浸膏106 g。

取乙酸乙酯部位萃取物200 g，吸附于350 g硅胶(100～200目)上，经硅胶柱色谱，薄层色谱(TLC)(石油醚-乙酸乙酯，10∶1～1∶100)检识，合并相同组分得8个亚组分Fr.1～Fr.8。

组分1经硅胶柱色谱，TLC(石油醚-乙酸乙酯，10∶1～1∶100)检识，合并相同组分得5个亚组分Fr.1-1～Fr.1-5。组分Fr.1-5经硅胶色谱(石油醚-乙酸乙酯，10∶1～100∶1)，得到3个亚组分Fr.1-5-1～Fr.1-5-3。Fr.1-5-2经凝胶柱色谱(三氯甲烷-甲醇，1∶1)纯化得到化合物3(5.4 mg)。组分2经硅胶柱色谱，TLC(石油醚-丙酮，10∶1～1∶100)检识，合并相同组分得9个亚组分Fr.2-1～Fr.2-9。组分Fr.2-1经硅胶色谱(石油醚-乙酸乙酯，10∶1～1∶100)，得到9个亚组分Fr.2-1-1～Fr.2-1-9。Fr.2-1-8经凝胶柱色谱(三氯甲烷-甲醇，1∶1)，经过纯化得到化合物4(5.6 mg)和5(3.6 mg)。Fr.2-1-5经MCI柱，甲醇-水(30∶70～100∶1)系统洗脱，可以得到7个组分。Fr.2-1-5-6经硅胶色谱柱(二氯甲烷-甲醇，10∶1～1∶100)，得到4个亚组分，对组分Fr.2-1-5-6-1及Fr.2-1-5-6-2分别进行正相硅胶柱梯度洗脱、纯化，得化合物6(5.8 mg)和7(6.4 mg)。Fr.2-7经硅胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇，12∶1～1∶100)，得到7个亚组分。将Fr.2-7-3经MCI柱(甲醇-水，35∶65～100∶1)系统洗脱，得10个亚组分，Fr.2-7-3-1经制备HPLC(乙腈-水，5∶95～15∶85)纯化得Fr.2-7-3-1-2；对Fr.2-7-3-10经制备HPLC(乙腈-水，38∶62～56∶44)纯化得化合物8(4.6 mg，30 min)、9(7.9 mg，41 min)和10(6.5 mg，50 min)；Fr.2-7-5-5经反相Rp18中压液相色谱(甲醇-水，10∶90～100∶0)分离划分为3个亚组分，Fr.2-7-5-5-1静置析出结晶，经反复重结晶得化合物11(6.7 mg)。组分3经硅胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇，100∶1～1∶100)，TLC检识，合并相同组分共得9个亚组分Fr.1-1～Fr.1-9；将Fr.3经MCI柱(甲醇-水，30∶70～100∶1)系统洗脱，得到10个亚组分，即Fr.3-1～Fr.3-10；Fr.3-10经凝胶柱(三氯甲烷-甲醇，1∶1)得到5个亚组分，对Fr.3-10-1经制备HPLC(乙腈-水，25∶75～35∶65)纯化得化合物12(6.3 mg，30 min)、13(4.7 mg，25 min)和14(4.3 mg，29 min)。Fr.3-4经反相Rp18中压液相色谱(甲醇-水，25∶75～100∶0)分离划分为5个亚组分，即Fr.3-4-1～Fr.3-4-5。Fr.3-4-3经prep-HPLC(乙腈-水，20∶80～30∶70)纯化得化合物2(4.7 mg，25 min)；Fr.3-4-5经制备HPLC(乙腈-水，15∶85～32∶68)纯化得化合物1(4.6 mg，30 min)。

2 结构鉴定

化合物1：分子式C16H14O5，淡黄色针状结晶，易溶于三氯甲烷；mp 203～206 ℃；ESI-MSm/z309[M+Na]+；1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：11.89(1H，s，5-OH)，7.44(5H，m，H-2′，-3′，-4′，-5′，-6′)，6.16(1H，s，H-6)，5.48(1H，dd，J=12.8，3.2 Hz，H-2)，3.88(3H，s，8-OCH3)，3.09(1H，dd，J=17.8，12.8Hz，H-3a)，2.87(1H，dd，J=17.2，3.2 Hz，H-3b)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：79.7(C-2)，43.5(C-3)，195.6(C-4)，158.0(C-5)，96.0(C-6)，159.9(C-7)，127.6(C-8)，152.8(C-9)，101.8(C-10)，138.7(C-1′)，126.0(C-2′，-6′)，128.5(C-3′，-4′，-5′)，61.6(8-OCH3)。以上数据与文献[7]数据基本一致，鉴定化合物1为双氢汉黄芩素。

化合物2：分子式C17H14O5，黄色结晶，易溶于三氯甲烷；mp 162～163 ℃；ESI-MSm/z321[M+Na]+；1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ： 12.57(1H，s，5-OH)，7.96(2H，m，H-2′，-6′)，7.55(3H，m，H-3′，-4′，-5′)，6.68(1H，s，H-8)，6.44(1H，s，H-3)，3.96(3H，s，6-OCH3)，3.95(3H，s，7-OCH3)。以上数据与文献[8]数据基本一致，鉴定化合物2为5-羟基-6，7-二甲氧基黄酮。

化合物3：分子式C18H18O5，黄色结晶，易溶于三氯甲烷；mp 138～139 ℃；ESI-MSm/z337[M+Na]+；1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：13.91(1H，s，2-OH)，7.86(1H，d，J=15.6 Hz，H-β)，7.81(1H，d，J=15.6 Hz，H-α)，7.62～7.60(2H，m，H-2′，-6′)，7.42～7.40(3H，m，H-3′，-4′，-5′)，6.02(1H，s，H-5)，3.97(3H，s，4-OMe)，3.97(3H，s，6-OMe)，3.78(3H，s，3-OMe)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：106.9(C-1)，158.5(C-2)，130.2(C-3)，158.7(C-4)，87.1(C-5)，159.4(C-6)，127.5(C-α)，135.5(C-β)，193.3(C=O)，142.7(C-1′)，128.9(C-2′，6′)，128.4(C-3′，5′)，130.9(C-4′)，60.8(3-OCH3)，56.0(4-OCH3)，56.1(6-OCH3)。以上数据与文献[9]数据基本一致，鉴定化合物3为2-羟基-3，4，6-三甲氧基查尔酮。

化合物4：分子式C17H14O5，淡黄色针状结晶，易溶于三氯甲烷；mp 183～184 ℃；ESI-MSm/z299[M+H]+；1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：12.57(1H，s，5-OH)，7.96(2H，dd，J=7.4，1.5 Hz，H-2′，-6′)，7.59～7.49(3H，m，H-3′，-4′，-5′)，6.68(1H，s，H-3)，6.45(1H，s，H-6)，3.96(3H，s，7-OCH3)，3.94(3H，s，8-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：164.0(C-2)，105.4(C-3)，182.8(C-4)，104.8(C-5)，158.8(C-6)，95.9(C-7)，157.6(C-8)，129.1(C-9)，157.6(C-10)，131.4(C-1′)，126.4(C-2′，6′)，129.2(C-3′，5′)，132.0(C-4′)，61.7(7-OCH3)，56.4(7-OCH3)。以上数据与文献[10]数据基本一致，鉴定化合物4为5-羟基-7，8-二甲氧基黄酮。

化合物5：分子式C18H15O7，淡黄色针状结晶，易溶于二甲基亚砜(DMSO)；mp 254～255 ℃；ESI-MSm/z343[M+H]+；1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：12.34(1H，s，5-OH)，7.78(1H，dd，J=8.0，1.6 Hz，H-6′)，7.44(1H，t，J=7.8 Hz，H-4′)，7.08(1H，br d，J=8.4 Hz，H-3′)，7.05(1H，t，J=7.6 Hz，H-5′)，7.02(1H，s，H-3)，6.47(1H，s，H-6)，3.97(3H，s，7-OCH3)，3.95(3H，s，8-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：164.0(C-2)，107.2(C-3)，183.1(C-4)，156.8(C-5)，96.3(C-6)，158.9(C-7)，128.9(C-8)，148.9(C-9)，104.7(C-10)，116.6(C-1′)，157.6(C-2′)，118.9(C-3′)，133.9(C-4′)，120.9(C-5′)，128.3(C-6′)，56.6(7-OCH3)，56.6(8-OCH3)。以上数据与文献[11]数据基本一致，鉴定化合物5为穿心莲素。

化合物6：分子式C18H16O7，淡黄色针状结晶，易溶于DMSO；mp 195～197 ℃；ESI-MSm/z358[M+H]+；1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：12.62(1H，s，5-OH)，7.44(1H，d，J=2.5 Hz，H-6′)，7.22(1H，dd，J=9.1，2.5 Hz，H-4′)，7.21(1H，s，H-3)，6.93(1H，d，J=9.1 Hz，H-3′)，6.62(1H，s，H-6)，3.93(3H，s，7-OCH3)，3.90(3H，s，8-OCH3)，3.82(3H，s，2′-OCH3)，3.80(3H，s，5′-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：161.2(C-2)，109.6(C-3)，182.3(C-4)，103.9(C-5)，156.7(C-6)，96.0(C-7)，158.6(C-8)，128.4(C-9)，149.0(C-10)，119.8(C-1′)，152.1(C-2′)，113.8(C-3′)，118.6(C-4′)，153.0(C-5′)，114.1(C-6′)，56.4(7-OCH3)，61.1(8-OCH3)，56.6(2′-OCH3)，55.6(5′-OCH3)。以上数据与文献[10]数据基本一致，鉴定化合物6为5-羟基-7，8，2′，5′-四甲氧基黄酮。

化合物7：分子式C18H18O5，淡黄色针状结晶，易溶于DMSO；mp 156～158 ℃；ESI-MSm/z315[M+H]+；1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ： 7.49～7.42(5H，m，H-2′，-3′，-4′，-5′，-6′)，6.14(1H，s，H-6)，5.47(1H，dd，J=12.4，3.0 Hz，H-2)，3.95(3H，s，7-OCH3)，3.93(3H，s，8-OCH3)，3.81(3H，s，5-OCH3)，3.02(1H，dd，J=17.0，12.4 Hz，H-3)，2.88(1H，dd，J=17.0，3.0 Hz，H-3)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ： 79.1(C-2)，45.7(C-3)，189.5(C-4)，106.3(C-5)，158.8(C-6)，89.3(C-7)，157.9(C-8)，156.3(C-9)，138.6(C-1′)，126.0(C-2′，6′)，128.8(C-3′，5′)，128.5(C-4′)，61.2(7-OCH3)，56.6(8-OCH3，5-OCH3)。以上数据与文献[10]数据基本一致，鉴定化合物7为5，7，8-三甲氧基二氢黄酮。

化合物8：分子式C19H18O6，淡黄色针状结晶，易溶于三氯甲烷；mp 76～78 ℃；ESI-MSm/z343[M+H]+；1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：7.98(1H，dd，J=7.6，1.8 Hz，H-6′)，7.47(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，7.11(1H，t，J=8.4 Hz，H-4′)，7.03(1H，d，J=8.4 Hz，H-3′)，6.44(1H，s，H-8)，3.99(3H，s，7-OCH3)，3.97(3H，s，8-OCH3)，3.94(3H，s，5-OCH3)，3.93(3H，s，2′-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：158.0(C-2)，111.6(C-3)，178.4(C-4)，130.7(C-5)，156.3(C-6)，92.3(C-7)，152.2(C-8)，156.3(C-9)，109.0(C-10)，120.5(C-1′)，158.1(C-2′)，113.5(C-3′)，132.1(C-4′)，129.1(C-5′)，120.8(C-6′)，61.6(8-OCH3)，56.6(7-OCH3)，56.3(5-OCH3)，55.6(2′-OCH3)。以上氢谱数据与文献[12]数据基本一致，鉴定化合物8为2′-甲氧基-5，6，7-三甲基黄芩素。

化合物9：分子式C18H16O5，淡黄色针状结晶，易溶于三氯甲烷；mp 158～160 ℃；ESI-MSm/z313[M+H]+；1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ： 7.80(2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，-6′)，6.99(2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，-5′)，6.58(1H，s，H-3)，6.54(1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.36(1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，3.96(3H，s，5-OCH3)，3.91(3H，s，7-OCH3)，3.87(3H，s，4′-OCH3)。以上数据与文献[13]数据基本一致，鉴定化合物9为5，7，4′-三甲氧基黄酮。

化合物10：分子式C16H12O6，淡黄色针状结晶，易溶于甲醇；mp 284～286 ℃；ESI-MSm/z301[M+H]+；1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.80(2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，-6′)，6.87(2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，-5′)，6.60(1H，s，H-8)，6.56(1H，s，H-3)，3.60(3H，s，6-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ： 165.4(C-2)，103.4(C-3)，185.0(C-4)，154.0(C-5)，133.0(C-6)，157.9(C-7)，95.4(C-8)，154.0(C-9)，105.0(C-10)，122.2(C-1′)，128.9(C-2′)，118.0(C-3′)，161.8(C-4′)，116.0(C-5′)，128.9(C-6′)，60.4(6-OCH3)。以上数据与文献[14]数据基本一致，鉴定化合物10为高车前素。

化合物11：分子式C25H28O12，淡黄色针状结晶，易溶于DMSO；mp 138 ℃；ESI-MSm/z521[M+H]+1；1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.43(1H，d，J=2.8 Hz，H-6′)，7.21(1H，d，J=8.8 Hz，H-3′)，7.18(1H，dd，J=8.8，2.8 Hz，H-4′)，7.16(1H，s，H-6)，6.86(1H，s，H-3)，4.73(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，3.14～3.73(6H，m，H-2″，-3″，-4″，-5″，-6″)，3.94(3H，s，7-OCH3)，3.89(3H，s，8-OCH3)，3.86(3H，s，2′-OCH3)，3.80(3H，s，5′-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：158.6(C-2)，109.2(C-3)，177.4(C-4)，104.5(C-5)，156.5(C-6)，101.2(C-7)，153.4(C-8)，132.2(C-9)，150.6(C-10)，118.2(C-1′)，152.0(C-2′)，112.3(C-3′)，118.2(C-4′)，153.0(C-5′)，113.6(C-6′)，61.1(8-OCH3)，56.4(7-OCH3)，56.3(2′-OCH3)，55.7(5′-OCH3)104.5(glc-1″)，73.6(glc-2″)，77.7(glc-3″)，70.2(glc-4″)，76.0(glc-5″)，61.1(glc-6″)。以上数据与文献[15]数据基本一致，鉴定化合物11为7，8，2′，5′-四甲氧基黄酮-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物12：分子式C23H26O10，淡黄色针状结晶，易溶于DMSO；mp 168～169 ℃；ESI-MSm/z463[M+H]+；1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.61～7.38(5H，m，H-2′，-3′，-4′，-5′，-6′)，6.70(1H，s，H-6)，5.63(1H，dd，J=12.1，2.8 Hz，H-2)，3.16(1H，dd，J=17.8，10.3 Hz，H-3a)，2.81(1H，dd，J=16.1，3.0 Hz，H-3b)，4.73(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，3.06～3.45(6H，m，H-2″，-3″，-4″，-5″，-6″)，3.91(3H，s，7-OCH3)，3.73(3H，s，8-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：77.3(C-2)，46.1(C-3)，191.8(C-4)，160.0(C-5)，98.8(C-6)，156.4(C-7)，156.4(C-8)，134.3(C-9)，156.5(C-10)，140.3(C-1′)，127.2(C-2′)，129.6(C-3′)，129.4(C-4′)，129.6(C-5′)，129.6(C-6′)，61.0(8-OCH3)，56.7(7-OCH3)，105.9(glc-1″)，74.7(glc-2″)，80.1(glc-3″)，71.5(glc-4″)，78.6(glc-5″)，62.8(glc-6″)。以上数据与文献[16]数据基本一致，鉴定化合物12为穿心莲黄酮苷A。

化合物13：分子式C23H24O10，淡黄色针状结晶；mp 196～201 ℃；ESI-MSm/z463[M+H]+；1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：8.06(2H，m，H-2′，-6′)，7.52～7.75(3H，m，H-3′，-4′，-5′)，7.18(1H，s，H-6)，6.93(1H，s，H-3)，3.94(3H，s，7-OCH3)，3.90(3H，s，8-OCH3)，4.77(1H，d，J=7.6 Hz，H-1″)，3.14～3.41(6H，m，H-2″，-3″，-4″，-5″，-6″)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ： 160.9(C-2)，107.6(C-3)，190.2(C-4)，103.4(C-5)，158.6(C-6)，132.4(C-7)，158.6(C-8)，155.4(C-9)，109.4(C-10)，132.4(C-1′)，126.1(C-2′)，129.3(C-3′)，130.8(C-4′)，129.3(C-5′)，126.1(C-6′)，61.1(8-OCH3)，56.0(7-OCH3)，106.8(glc-1″)，76.0(glc-2″)，78.4(glc-3″)，70.0(glc-4″)，78.5(glc-5″)，61.2(glc-6″)。以上数据与文献[16]数据基本一致，鉴定化合物13为穿心莲黄酮苷C。

化合物14：分子式C23H25O11，淡黄色针状结晶；mp 145～147 ℃；ESI-MSm/z499[M+Na]+；1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.86(1H，d，J=7.9 Hz，H-4′)，7.49(1H，t，J=7.8 Hz，H-3′)，7.20(1H，s，H-6)，6.89(1H，s，H-3)，4.73(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，3.11～3.50(6H，m，H-2″，-3″，-4″，-5″，-6″)，3.92(3H，s，7-OCH3)，3.90(3H，s，8-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：159.4(C-2)，111.7(C-3)，177.6(C-4)，153.3(C-5)，101.2(C-6)，156.3(C-7)，132.7(C-8)，150.5(C-9)，109.2(C-10)，117.3(C-1′)，156.8(C-2′)，117.1(C-3′)，132.4(C-4′)，119.6(C-5′)，128.1(C-6′)，61.1(8-OCH3)，56.3(7-OCH3)，104.6(glc-1″)，73.6(glc-2″)，76.0(glc-3″)，70.2(glc-4″)，77.7(glc-5″)，61.1(glc-6″)。以上数据与文献[17]数据基本一致，鉴定化合物14为穿心莲黄酮苷G。

3 结论

从临泉产穿心莲地上部分中分离得到了14个黄酮类化合物，包括6个黄酮类、3个二氢黄酮类、1个查耳酮类以及4个黄酮苷类，揭示临泉产穿心莲黄酮类化学成分的复杂性。其中化合物1、2、3、8首次从穿心莲中分离得到，丰富了穿心莲的化学成分，为进一步研究临泉产穿心莲的药理活性和药材品质提供了物质基础。