二氢槲皮素对高脂饲料联合酒精狂饮小鼠肝脏脂肪蓄积的干预机制

吴 梅，乔春莹，叶 欢，吴艳玲，南极星，廉丽花

(延边大学药学院，吉林 延吉 133002)

长期大量的酒精摄入对肝脏有直接损害作用，其损伤机制主要是肝细胞内脂质代谢紊乱所导致脂肪沉积。由于人体代谢能力有限，长期以高蛋白、高脂膳食为主，饮酒等习惯会引起大量脂肪堆积，从而导致脂肪肝。高脂饮食和酒精摄入可协同诱导氮化应激、线粒体应激、内质网应激等，但酒精对高脂引起的脂肪肝的影响及其潜在机制却尚不清楚。二氢槲皮素(dihydroquercetin或taxifolin，TAX)是落叶松、花旗松中含量较高的二氢黄酮醇类化合物[1]。本研究通过小鼠高脂饲料喂养联合酒精狂饮模型，探讨TAX对肝脏脂肪积蓄的干预机制。

1 材料

1.1 药物与试剂TAX(纯度>98%，成都普思公司)；谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)试剂条(Arkray公司)；甘油三酯(TG)试剂盒(南京建成研究所)；固醇调节元件结合蛋白-1(sterol-regulatory element binding protein 1，SREBP-1)抗体(Abcam公司)。

1.2 实验动物SPF级ICR小鼠, ♂，8～10周龄，购自长春市亿斯实验动物技术有限责任公司[SCXK(吉)-2016-0003]。

2 方法

2.1 动物分组将48只小鼠随机分为8组，即正常组(N)、对照饲料组(LFD)、高脂饲料组(HFD)、模型组(HFD+ETOH)、TAX组(25、50、100 mg·kg-1)、单独给药组(TAX100)，每组6只。

2.2 造模及给药每天1次对TAX组与TAX100组进行不同浓度的TAX灌胃，共给药4次。小鼠处死前一晚禁食，可自由饮水。d 4处死当日末次灌胃给药1 h后，N组、HFD组及TAX100组灌胃麦芽糊精，其余5组各灌胃浓度为31.25%的酒精(5 g·kg-1，20 mL·kg-1)。9 h后处死小鼠，收集血液和肝脏。

2.3 血清及肝脏指标测定全自动生化分析仪SP-4430(Arkray)检测ALT、AST、TG的含量。

2.4 肝脏组织的病理观察参照李秀侠等[2]的方法，将肝脏石蜡切片用HE染色；肝脏冷冻切片进行油红O染色。显微镜下观察分析病理学变化。

Tab 1 Determination of liver and serum related biochemical indicators in

2.5 免疫组织化学实验石蜡包埋肝组织，切片，60 ℃烘片，常规免疫组化染色，在显微镜下观察SREBP-1表达情况。利用Image Pro-Plus 6.0软件对小鼠肝脏中的SREBP-1阳性表达进行分析。

3 结果

3.1 TAX对小鼠肝脏生化指标的影响Tab 1结果显示，与模型组相比，TAX给药组ALT、AST活性降低，HFD+ETOH+TAX25组，HFD+ETOH+TAX100组均具有统计学意义(P<0.01)。与正常组相比，模型组的血清及肝脏的TG含量明显增高(P<0.01)，TAX给药组与模型组比较，HFD+ETOH+TAX25组、HFD+ETOH+TAX50组、HFD+ETOH+TAX100组血清的TG含量都明显降低(P<0.01)，且HFD+ETOH+TAX25组肝脏的TG含量也呈下降趋势(P<0.05)。

3.2 TAX对小鼠肝组织病理变化的影响HE染色结果可见，与正常组相比，模型组肝细胞肿胀，胞质内分布有许多脂肪空泡，肝小叶界限模糊。TAX给药组随着浓度增高，肝组织病理变化明显减弱。油红O染色结果显示，模型组染色的脂滴较正常组明显增多。TAX给药后染色变浅，且有一定的剂量依赖性，说明小鼠肝脏脂质含量明显下降。

3.3 TAX对小鼠肝脏SREBP-1表达的影响免疫组化检测显示，与正常组细胞质中只有少量散在分布浅黄色颗粒相比，模型组中央静脉附近有大量棕黄色颗粒沉积，表明小鼠肝组织中SREBP-1表达明显增加(P<0.01)。与模型组相比，TAX给药组的SREBP-1染色明显较浅，且其中的HFD+ETOH+TAX25组有统计学意义(P<0.01)，染色结果呈与正常组相接近的趋势(Tab 2)。

4 讨论

流行病学研究表明，高蛋白、高胆固醇摄入与肝纤维化、肝炎风险增加有关，其已被证明可诱导严重的脂肪变性、炎症和纤维化[3-4]。饮酒和高脂肪饮食是导致脂肪肝的主要因素，无论是否患有非酒精性脂肪肝病，长期酗酒都可能导致酒精性肝病。据Chang等[5]报道，在高脂饲料喂养的情况下，酒精狂饮可引发急性肝损伤，凸显了肥胖/超重个体酗酒的风险。本研究显示，小鼠模型组的肝脏内脂滴沉积，炎性细胞浸润，说明酒精与高脂饲料饲养小鼠成功建立脂肪肝，且TAX给药组的小鼠肝脏内脂肪沉积随着TAX浓度的增加而有所改善。综上所述，TAX能够改善并逆转高脂饲料联合酒精狂饮所引起的脂肪蓄积，对肝脏具有一定的保护作用，其在治疗酒精性与非酒精性脂肪肝方面具有一定的潜力，确切机制有待深入探索。

Tab 2 Effect of TAX on immunohistochemical detection of SREBP-1 in mouse