分光光度法测定黄果柑中维生素C的含量

(雅安职业技术学院，四川雅安，625000)

黄果柑，柑橘品种，俗称青果、黄金果，四川省雅安市石棉县特产，在当地有300多年种植历史，是我国具有自主知识产权的天然杂交柑橘。黄果柑果面橙黄，有光泽，油胞大而凸起，果皮薄，易剥离，基本无核，果肉橙红色，肉质脆嫩化渣，多汁，酸甜爽口，微具香气，营养丰富，深受大众喜爱。其最大特点：花果同树的奇观、极其丰产效益高、极其晚熟(翌年3～4月成熟)。近年石棉县黄果柑种植面积达4.5万亩，年产量达6万吨，成为我国最大规模的黄果柑生产基地。

维生素C (Vitamin C) 又称抗坏血酸(C6H8O6)，是一种水溶性维生素，在弱酸性环境中较稳定，是人体必需的维生素之一。人体内不能自身合成维生素C，维生素C主要存在于新鲜的蔬菜水果中，缺乏维生素C可导致多种疾病[1,2]。维生素C能防治坏血病，预防缺铁性贫血，促进胶原蛋白的合成，利用维生素C较强的抗氧化作用，抑制自由基对人体氧化的损害，协同相关药物从而预防肿瘤和癌症的侵袭等[3-7]。

本试验采用固蓝盐B分光光度法检测了石棉县特产黄果柑中维生素C的含量[8,9]，将为人们选择黄果柑补充维生素C和评估摄入维生素C量提供科学的依据，对指导人们的日常饮食和水果选择有一定的参考价值。

1 材料与方法

1.1 试验材料、主要试剂及仪器

1.1.1 试验材料

石棉黄果柑鲜果，样品采购于雅安市姚桥农贸市场。

1.1.2 主要试剂

冰乙酸、乙二胺四乙酸二钠(EDTA)和抗坏血酸(以上三种试剂均采购于成都市科龙化工试剂厂)；固蓝盐B(采购于上海瑞永生物科技有限公司)，所有试剂均为分析纯。

1.1.3 主要仪器

ME204型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；UV-1800型紫外可见分光光度计(上海翱艺仪器有限公司)。

1.2 实验原理

在弱酸性乙酸溶液中，维生素C与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼-2-羟基丁酰内酯衍生物。在420nm最大吸收波长处测定溶液的吸光度，与标准系列比较定量[7]。

1.3 实验方法

1.3.1 维生素C标准使用液的配制

精密称取0.2000g抗坏血酸，加20mL 2mol·L-1乙酸溶液，溶解后移入100mL棕色容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得维生素C标准储备液2.0g·L-1。精密吸取5.0mL维生素C标准储备液于100 mL棕色容量瓶中，加5.0mL 2mol·L-1乙酸溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得0.10g·L-1维生素C标准使用液。

1.3.2 标准曲线绘制

用移液管分别精密移取0.10g·L-1的维生素C标准使用溶液0.00、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.0、1.5、2.0mL于9支10mL的比色管中，依次加入0.3mL EDTA溶液，摇匀。加入0.5mL 0.5 mol·L-1乙酸溶液，1.25mL 2g·L-1固蓝盐B溶液，摇匀。加蒸馏水至10mL，混匀。静置20min后，用1cm比色皿，以标准0管调节零点，在420nm的波长下测定各标准管的吸光度。通过测出的吸光度对维生素C的浓度绘制标准曲线，浓度C为横坐标，吸光度值A为纵坐标。

1.3.3 待测样品液配制

随机挑选5个新鲜黄果柑，洗净、擦干、去皮、去囊衣后，准确称取5份可食用部分20 g，分别放入已加入20mL 2 mol·L-1乙酸溶液的5个研钵中，将果肉中的果汁全部研出，再分别将匀浆全部转移入已加入5mL 2 mol·L-1乙酸溶液的5个100 mL棕色容量瓶中，蒸馏水定容，摇匀备用。

1.3.4 待测样品中维生素C含量测定

用移液管精密移取5份待测样液1.0mL及1份同量的空白溶液，分别置于6支10mL的比色管中，其余同方法1.3.2标准曲线绘制步骤。分别在420nm波长下依次测定5份样品溶液的吸光度，每份待测样液分别做3次平行测定，测定平均值为吸光度值。通过标准曲线构建的线性回归方程，计算出待测样液中维生素C的含量(μg)，再通过下式计算出待测黄果柑样品中维生素C的质量分数ω(mg·100g-1)。

式中：m1为由标准曲线回归方程算得的待测样液中维生素C含量；V1为待测样品处理液定容后的总体积；V2为测定时取用样品处理液体积；m为测定时称取待测黄果柑果肉样品的质量。

1.3.5 加标回收率测定

用移液管分别精密移取1.0mL的样品溶液于5支10mL比色管中，分别加入抗坏血酸标准溶液0.20、0.30、0.40、0.50、0.60mL，其余同方法1.3.2标准曲线绘制步骤操作，在420nm波长处分别测定溶液的吸光度并记录。计算加标回收率P，计算公式：

式中：P为加标回收率，%；x1为加标样品测定值，μg；x0为待测样品测定值，μg；m为加入标准物质的量，μg。

2 结果与分析

2.1 标准曲线绘制

将维生素C标准系列溶液与所测定的吸光值A进行线性回归，结果如图1所示，标准曲线方程为：y=0.0557x-0.0083，相关系数R2=0.9996。结果表明，在浓度范围为0.0～20.0μg·mL-1的维生素C溶液中，其浓度与吸光度具有很好的线性关系，保证了后续测定维生素C含量的准确性。

图1 维生素C标准工作曲线

2.2 黄果柑维生素C含量计算

待测黄果柑样液维生素C的吸光度和浓度如表1所示，结果以均值和标准差表示 (n=5)。

2.3 加标回收率试验

依据1.3.5中的试验方法，进行加标回收率试验，测定结果见表2。由表2可知，黄果柑样品中的维生素C回收率在98.0%～103.7%之间，平均回收率为100.2%。

3 结论

本实验采用固蓝盐B分光光度法检测了黄果柑的维生素C含量，其测定结果为27.6mg·100g-1，平均回收率为100.2%，RSD(n=5)为1.87%。虽然测定过程中果汁溶液有颜色，但通过对照实验测定溶液吸光度发现溶液的颜色并不影响待测样液吸光度，所以无需进行脱色处理。该测定方法操作简单，可靠易行，回收率高，可用于黄果柑维生素C的含量测定。

表1 黄果柑维生素C含量

表2 加标回收率试验结果