成年人血清细胞角质蛋白19可溶性片段地区性参考区间的建立与探讨

顾玉兰，丘佳明，陈丽芳，宛传丹△

(1.江苏省常熟市第二人民医院肿瘤科 215500;2.江苏省常熟市第二人民医院病理科 215500;3.江苏省常熟市医学检验所 215500)

细胞角质蛋白作为上皮细胞的骨架重要分子，广泛分布于正常组织细胞表面。在恶性上皮细胞中，因为异常活跃的蛋白酶类促进了细胞的降解，使得大量细胞角质蛋白可溶性片段释放进入血液[1- 2]。其中细胞角质蛋白19可溶性片段(CYFRA21- 1)是一种可用于诊断及评价非小细胞肺癌的肿瘤标记物，具有较高的敏感度和特异度[3- 5]。

指标的量化检验涉及参考区间的建立，其直接影响到临床医生对疾病的判断。而肿瘤指标参考区间常受到种族、地域、年龄、性别及地区饮食习惯等众多因素的影响。因此，国际临床化学联合会(IFCC)建议应结合本地区建立适用本地区实验室的参考区间[6]。本文以统计学线性拟合法分析基于常熟市医学检验所实验室信息管理系统(LIS)现有的CYFRA21- 1检验数据建立间接参考区间，并与美国临床和实验室标准化委员会(CLSI)推荐的非参数法建立的参考区间进行比较，探寻更为便捷、省力且有效的参考区间验证方案，为本地区提供更为精准的CYFRA21- 1参考区间。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集江苏省常熟市LIS中2017年6月至2018年6月所有CYFRA21- 1的检测数据。这些标本来源于本地区3家大型综合医院(江苏省常熟市第一人民医院、江苏省常熟市第二人民医院和江苏省常熟市中医院)及各乡镇二级医院、卫生院等，记为临床检测组。纳入标准为经全面体检和影像学检查排除患有严重心、肺、肾、肝、肠、胃等基础疾病；无内分泌系统、免疫系统等疾病；无肿瘤病史。排除妊娠期及哺乳期的女性。将2018年1-6月各医院送检的体检健康者记为健康体检组，两组分别以不同的方法进行统计计算。

1.2CFYRA21- 1检测 所有受检者均在早晨、空腹、安静状态下采集静脉血5 mL左右，室温静置30 min以上，2 h 内分离血清，以3 000×g离心5 min。采用美国雅培公司的Architecti全自动化学发光免疫分析系统及配套试剂进行检测分析。方法为化学发光微粒子免疫检测法，质控品及校准品均由美国雅培公司提供。每天质控均在控，并做好记录。

1.3数据整理 导出的原始数据剔除同一患者重复检测数据，保存第1次有效数据。排除临床诊断为肿瘤相关疾病的患者检测数据。以统计学软件SPSS20.0四分位法将大于P75+3×(P75-P25)的数据作为离群值剔除。将最终有效数据用SPSS20.0软件分析其频数分布。

2 结 果

2.1原始数据与筛选结果 2017年6月至2018年6共检测CYFRA21- 1 28 899例，依据四分位法统计分析检测值，将大于P75+3(P75-P25)的数据作为离群值剔除。再根据纳入标准剔除无效数据，最后经过筛选后得临床检测组有效数据16 550例，年龄20～100岁，平均(63.11±14.43)岁；其中男9 624例，女6 926例。健康体检组共818例，经过筛选后得有效数据806例，年龄19～84岁，平均(41.11±12.10)岁；其中男570例，女236例。将数据依次按性别、年龄进一步分为男青年组、男老年组、女青年组、女老年组进行研究，结果见表1。年龄与CYFAR21- 1数据频率分布直方图，见图1、2。

A：临床检测组；B：健康体检组

图1CYFAR21-1检测值频率分布直方图

A：临床检测组；B：健康体检组

图2年龄频率分布直方图

2.2线性拟合法计算参考区间 通过R语言软件利用LIS信息系统里存储的CYFRA21- 1临床检测数据建立的累积频率分布直方图见图1，通过拟合线性回归方程，求得95%参考区间，见表1。

表1 LIS存储临床数据组血清CYFRA21- 1间接参考区间

A：男青年组;B:女青年组;C：男老年组;D:女老年组

图3CYFRA21-1累积频率分布图(A、B两点

间数据代表最佳线性)

2.3非参数法计算参考区间 对CYFRA21- 1进行正态分布检验显示，样本各组数据呈现偏态分布(P<0.05)，参考区间的建立应取其右单侧第95百分位数作为参考上限。采用中位数M及四分位数(P25,P75)来描述各组数据。见表2。

表2 健康体检组血清CFRA21- 1参考区间

2.4两种方案参考区间比较 两种方案数据来自不同人群样本，通过t检验比较发现两种方案得出的各分组参考区间之间差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 两种方案参考区间比较分析

3 讨 论

血清CYFRA21- 1是肺癌，特别是非小细胞肺癌最为敏感的肿瘤标记物，常用于监测非小细胞肺癌的病程[5]。其特异性较强，可用于肺癌与肺炎、肺结核、慢性阻塞性肺炎等肺部疾病的鉴别诊断。同时，血清CYFRA21- 1针对非小细胞肺癌化疗等效果的评价与预后评估也具有十分重要的临床意义[3，9]。血清CYFRA21- 1参考区间对于临床上非小细胞肺癌诊断至关重要，而不同种族人群、不同地区及年龄、性别等均可影响到参考区间的设立。文献检索显示，国内仅有3篇论文涉及CYFRA21- 1的参考区间建立与设定[7- 8]。3个地区(上海、苏州、南通)所采用的方法不完全相同，且得出的结论之间存在差异。上海、苏州地区均以非参数百分位法建立参考区间，取95%百分位数为上限[10- 11]。该方法样本较小，粗略地估算了参考区间。南通地区以体检与医院存储数据进行统计分析，以科学统计方法评估出最适用于该地区的参考范围，数据精准可靠。常熟地区自2010年江苏省常熟市医学检验所成立后，将本地区所有检验资源整合一起，质量管理体系通过ISO15189认可，建立了完善的LIS，保存了大量临床样本检测数据。据国外文献研究，参考区间可以基于当前数据，通过相关统计算法建立[12- 13]。

本文研究以两种常用的方法来推导参考区间，一是建立在本地区成年人人群检验数据基础之上；二是建立在健康成年人群样本库，以统计学方法演算出参考区间。通过分析，两种方法的结果与厂家提供的均存在一定差异。厂家说明书的参考区间为0～3.3 ng/mL，该参考区间不分青年组(20～45岁)及老年组(>45岁)。而本研究建立在LIS大数据分析基础上，得出的常熟地区血清CYFRA21- 1男青年组95%间接参考区间为0～3.49 ng/mL；男老年组95%间接参考区间为0～3.84 ng/mL。女青年组95%间接参考区间为0～2.74 ng/mL；女老年组95%间接参考区间为0～3.03 ng/mL。男性参考区间上限高于女性，且老年组要高于青年组，与原参考区间上限也存在差异。另一方案通过建立在本地区健康人群的血清CYFAR21- 1检测数据上的分析显示，血清CYFAR21- 1 男青年组95%参考区间上限为3.35 ng/mL；男老年组95%参考区间上限为3.52 ng/mL；女青年组95%参考区间上限为3.18 ng/mL；女老年组95%参考区间上限为3.21 ng/mL。此方案与第一种方案得出的参考区间相比较差异无统计学意义(P>0.05)。这与周边地区研究报道结果相一致[10- 11]。常熟地区成年人血清CYFAR21- 1参考区间上限男性要高于女性，老年组高于青年组。年龄与性别是影响常熟地区成年人血清CYFAR21- 1参考区间的重要因素，实验室在设立参考区间应区别对待，分组设定[14]。

通过临床检测数据计算参考区间的主要不足在于临床送检数据中包含大量疾病患者数据。因此对数据进行仔细筛选十分重要，这将直接影响到结果的正确性[15]。本文通过仔细筛选，统计分析得到的结果与以健康人群建立的参考区间，两者间差异无统计学意义(P>0.05)，说明该方法可以运用于临床检验计量项目参考区间的建立。而该方法的主要优势在于其针对的主要人群与该指标的适用人群相对应，即不以另一人群的参考值来判别本人群的异常情况。同时，该方法基于的数据虽然庞大，但不需另行设计实验来进行抽样分析，可以节省大量的人力与物力。

综上所述，通过对常熟地区成年人血清CYFRA21- 1参考区间的精准设定，既能指导医师对病情做出准确判断，又能避免给患者造成不必要的心理恐慌与过度的医疗检查。