HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA检测在宫颈癌早期筛查中的临床价值

蓝碧波 冉爱冬 沈少俊

【摘 要】目的：研究HPV（人乳头状病毒）E6/E7 mRNA与HPV DNA于宫颈癌早期筛查中的价值。方法：选择本院2015年1月至2017年12月宫颈癌筛查的500例女性，观察HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA检测结果。结果：HPV E6/E7 mRNA阳性率64.40%高于HPV DNA的49.80%（P<0.05）。联合检测的敏感性、特异性高于单一检测（P<0.05）。结论：HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA在宫颈癌筛查中意义重大，但联合检测的敏感性及特异性更高。

【关键词】早期筛查;宫颈癌;人乳头状病毒;宫颈液基薄层细胞学检查

文章编号：WHR2019032213

[Abstract] Objective：To study the value of HPV （human papillomavirus） E6/E7 mRNA and HPV DNA in the early screening of cervical cancer.Methods： 500 women checked from January 2015 to December 2017 in our hospital were selected. HPV E6/E7 mRNA and HPV DNA detection results were recorded. Results： The positive rate of HPV E6/E7 mRNA （64.40%） was higher than HPV DNA （49.80%） （P<0.05）; the detection sensitivity and specificity based on the combination examination was higher than single examination （P<0.05）.Conclusion： HPV E6/E7 mRNA and HPV DNA are of great importance in clinical screening. However， the diagnosis sensitivity and specificity based on the combination mode is higher.

[Key words]Early screening; Cervical cancer; Human papillomavirus; Thin-cytologic test

近年來宫颈癌发生率不仅逐年升高，其发生率约占女性恶性肿瘤的第二位，同时呈现年轻化趋势，随疾病进展，症状加重，可能产生全身衰竭症状。临床上大部分患者确诊时已经错过最佳治疗时间，因此早期筛查具有重要意义[1]。报道表明高危型HPV感染是造成疾病的主要风险因素，侵犯上皮细胞，产生较多癌蛋白，与细胞周期的调节蛋白发生结合，使细胞周期紊乱，发生癌变[2]。目前临床上宫颈病变通常利用病毒学及形态学进行检查，随后HPV E6/E7 mRNA诊断也日渐受到重视。因此本院展开研究，选择本院2015年1月至2017年12月宫颈癌筛查的500例女性作为研究对象，探讨HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA运用于宫颈癌早期筛查中的意义，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本院2015年1月至2017年12月宫颈癌筛查的500例女性，年龄30～50岁，平均年龄（41.47±1.03）岁。患者均存在异常出血、阴道分泌物异味及增多等症状，并经过病理活检：未明确意义非典型鳞状细胞137例（A组），高度鳞状上皮病变172例（B组），低度鳞状上皮病变166例（C组），宫颈癌25例（D组）。本研究经过本院伦理委员会批准同意;患者及家属均签署知情同意书，并自愿加入本次研究中;均经过病理活检确诊;资料齐全，意识正常，能够配合研究者;排除研究前存在盆腔放疗或者宫颈物理治疗史者;合并精神类疾病、文盲或者沟通障碍者;合并急性生殖道炎症者。

1.2 方法

标本采集：将新柏氏液基细胞学检查专用刷置于患者宫颈管，旋转5～8周，采集其宫颈口及宫颈管脱落的上皮细胞，将刷头放于保存液瓶中待检。

将标本按照3000r/min离心，5min后去除上层清液，蒸馏水（2mL）清洗后离心，去除上层清液后放入裂解剂。溶解液、蛋白酶按照1∶800比例混合，于65℃下水浴30min获得裂解剂，检测HPV E6/E7 mRNA。NaOH（2.5mol/L）放入裂解液，于55℃水浴下30min，放入终止反应液。释放所需检测的目的RNA。于-20℃下保存待检。

HPV E6/E7 mRNA：利用两种捕获探针杂交捕获目的RNA，固定在检测板上，另将LEs、CEs靶探针杂交结合于目的RNA。预放大分子杂交结合两个相近LEs、CEs靶探针，放大分子杂交结合预防大分子，连接碱性磷酸酶的标记探针杂交结合放大分子，加入底物，结合碱性磷酸酶，出现化学发光信号。光强弱与目的RNA量呈正相关，利用化学发光检测仪计算目的RNA，按照拷贝数表示。

HPV DNA：遵照二代杂交捕获法，从宫颈管中选择标本，置于试管中，按荧光法检测不同HPV DNA分型。

1.3 观察指标

观察两组检测结果，记录四组HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA阳性率，并观察单一检测与联合检测的敏感性、特异性，探讨HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA在宫颈癌筛查中的价值。

HPV E6/E7 mRNA转录数>4000阳性;HPV DNA值≥1.0ng/L阳性。病理活检为金标准。

1.4 统计学处理

选择SPSS 18.0统计系统，其中计量数据通过（±s）表达，利用t检查，而计数数据通过百分比表达，利用χ2检查，当P<0.05时差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 检测结果

HPV E6/E7 mRNA阳性率64.40%高于HPV DNA的49.80%（P<0.05）。見表1。

2.2 敏感性、特异性

联合检测的敏感性、特异性高于单一检测（P<0.05）。见表2。

3 讨论

近年来，随着宫颈癌的发生率逐年升高，其死亡率也随之增加，虽然发达国家宫颈癌筛查的防治措施不断完善，其患病率出现减低趋势，但大部分发展中国家的疾病发生率仍然呈现升高趋势[3]。HPV属于无包膜的双链闭环DNA病毒，可广泛存在于自然界。一旦宫颈上皮细胞受到感染后，病毒癌基因E6、7mRNA转录，产生E6、E7两种癌蛋白。癌蛋白与宿主细胞中P53或者Rb蛋白发生结合，导致细胞周期控制失衡，形成癌变[4-5]。早期基因E6、E7是HPV致癌中的研究重点，一旦其表达丢失抑制后可逐渐引发宫颈癌，其中E6可结合、杀灭肿瘤抑制因子P53，而E7可结合、降解抑制蛋白pRb，最终使细胞无限分裂，并不会造成凋亡，因此尽早诊断，及时给予治疗至关重要，可提高患者生存率及生活质量[6]。

既往HPV DNA检测取得过一定诊断价值，但敏感性及特异性较低，因此临床迫切需要敏感性及特异性较高的诊断方式。由于宫颈细胞病变的严重程度不仅与病毒类型及其负荷量有关，同时与病毒活跃程度息息相关[7]。而HPV E6/E7 mRNA可体现出E6/E7转录活动程度，加上高危型HPV感染是造成宫颈癌的主要因素，因此定期检查HPV E6/E7 mRNA具有重要作用，可评估宫颈癌发生的风险性，并成为高危人群及癌前病变筛查中的主要方式[8]。HPV E6/E7 mRNA以bDNA专利技术为主，是新型杂交信号放大核酸检测技术，过程中不必反转录、PCR扩增，简便快速[9]。其中bDNA属于三明治结构的核酸杂交方式，主要利用bDNA分子放大捕获目标DNA/RNA信号，但其并不具有呈指数增长的扩增过程，可明确放大倍数，稳定性较高，同时可重复检查，具有推广及应用的价值。本文作者对此展开研究，选择本院2015年1月至2017年12月宫颈癌筛查的500例女性作为研究对象，分别给予HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA检测，结果显示：HPV E6/E7 mRNA检测阳性率64.40%高于HPV DNA的49.80%（P<0.05）。联合检测的敏感性、特异性高于单一检测（P<0.05），提示HPV E6/E7 mRNA阳性率较高，但联合检测的敏感性及特异性更高。HPV DNA检测发现HPV感染类型，而HPV E6/E7 mRNA可检测HPV病毒癌基因E6/E7 mRNA的连续表达量，从而判定细胞中的病毒类型，提高检测结果的准确性。因此E6 /E7 mRNA 检测在宫颈病变的检测与诊断中具有广阔的应用前景，甚至认为它将会与细胞病理学一样，成为宫颈癌筛查的辅助诊断指标[10]。

综上所述，两种检测方式均具有一定价值，联合检测后效果更好，提升敏感性及特异性。

参考文献

[1] 李剑，曲芃芃.HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA检测在宫颈癌早期筛查中的临床价值[J].天津医药，2016，44（04）：466-469.

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[3] 蒙志平，黎勇明，杨玲，等.HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的应用价值探讨[J].实用临床医药杂志，2016，20（11）：76-79.

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[8] 刘集鸿，何晓清，张丽科，等.人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的应用[J].中华检验医学杂志，2015，38（08）：532-536.

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[10]杜彩英，李芳.人乳头瘤病毒DNA及E6/E7 mRNA检测在宫颈病变诊断中的比较研究[J].中国优生与遗传杂志，2015，23（04）：38-40.