熊果酸抑制动脉粥样硬化巨噬细胞吞噬脂质作用

王波 余珊 俞华 王磊 谢力 刘亚彬 陶剑 宁海涛 贾静

(1昆明学院医学院，云南 昆明 650031；2昆明市第一人民医院)

动脉粥样硬化(AS)是心血管疾病的主要病理基础,其引起的血栓形成和斑块破裂可诱发严重的心血管疾病,如冠心病、心肌梗死等。近年来分子生物学及AS治疗学的进步使AS从不治到可治，但高热量、高饱和脂肪酸食物摄入过多及缺乏体力活动等不良生活方式促使AS发病率和死亡率持续上升，对其进行有效地防治尤为重要。研究发现熊果酸(UA)具有抗AS的作用，且安全，不良反应小〔1〕。UA又名乌索酸、乌苏酸是一种存在于多科植物中的五环三萜类化合物，分子式为C30H48O3。UA在自然界中分布广泛，常以游离或结合成糖苷的形式存在于山楂、白花蛇舌草、女贞子、车前草、夏枯草、杜鹃花、连翘和苦丁茶科熊果的叶、果实等植物中，其抗肿瘤、抗AS、降血脂、降低血糖、保肝、抗菌、抗炎、抗病毒、抗氧化、镇静和安定等药理作用已被证实，且安全和不良反应小，作为一种高效低毒的多用途新药，被国内外学者普遍关注〔2～8〕。本研究旨在观察UA在AS形成过程中对巨噬细胞吞噬脂质形成泡沫细胞的影响，并对其作用机制进行探讨。

1 材料与方法

1.1实验动物及分组 本实验选用40只8周龄、体重200～250 g的健康Wistar雌性大鼠，饲养于重庆医科大学动物实验中心。饲养环境照明12 h，温度保持为(22±1)℃，湿度保持为(60±5)%。AS造模分为两组：随机选用20只Wistar雌性大鼠作为干预治疗组，剩余20只Wistar雌性大鼠作为模型组。

1.2主要试剂及仪器 UA粉剂选用成都健腾生物技术有限公司产品，其纯度>95%，用二甲基亚砜(DMSO)溶解，并调整 DMSO终浓度为0.06%。奥林巴斯显微镜、荧光显微镜、徕卡密闭式全自动组织脱水机、组织包埋机、恒温冰冻切片机、恒温展片台、病理图像分析仪、低温冰箱、全自动酶标仪、全自动生化分析仪及台式低温冷冻离心机。

1.3方法

1.3.1造模 采用Wistar大鼠作为研究对象，通过高脂饲养加维生素D喂养的方法建立AS模型(n=20),10 w后对两组Wistar大鼠取血测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),并取损伤侧颈动脉行HE染色制作病理切片，观察巨噬细胞吞噬脂质形成泡沫细胞的病理学变化，检测动物模型建立是否成功。

1.3.2血生化分析 在第10周末处死Wistar大鼠收集血清样本，采用全自动血生化分析仪检测血清TG、TC、LDL-C和HDL-C。

1.3.3标本采集及形态学染色 在第10周末，将各组Wistar大鼠麻醉后处死，取出右侧股动脉近心端1 cm经等渗生理盐水灌洗后，立即置于4℃多聚甲醛溶液中，常温固定12 h后，进行脱水和石蜡包埋，沿横断面行连续切片(5 μm/片)，进行HE染色。采用Image-ProPlus6.0图像分析软件分析图片。

1.4统计学方法 采用SPSS17.0软件进行t及χ2检验。

2 结 果

2.1两组血生化指标比较 与模型组与给药前比较组比较，干预治疗组给药后TC、TG、HDL-C和LDL-C显著降低(P<0.05)，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.2两组细胞学检测比较 干预治疗组给药前和模型组大鼠股动脉内膜明显增厚，两组均观察到有脂质沉积、泡沫细胞、少量红细胞和纤维组织增生，内膜坏死脱落，伴有炎性细胞浸润。给药后干预治疗组大鼠股动脉内膜纤维细胞减少甚至消失，平滑肌增生，沉积脂质减少，单核巨噬细胞增生(图1)。

表1 两组血生化指标比较

与干预治疗组治疗后比较：1)P<0.05

图1 干预治疗组给药前、后股动脉细胞学检测(HE)

3 讨 论

UA又名乌索酸、乌苏酸是一种存在于多科植物中的五环三萜类化合物，分子式为C30H48O3，分子量456.68。熊果酸为山楂、白花蛇舌草、女贞子、车前草、夏枯草、杜鹃花、连翘和苦丁茶科熊果的叶、果实等植物的提取物，其抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、降血脂等药理作用已被证实，且安全和不良反应小〔9～15〕。

高脂导致大量脂质沉积于血管壁，引发巨噬细胞的聚集，巨噬细胞吞噬脂质后，变成泡沫细胞进一步介导血管壁的损伤，降低血清血脂水平，可以抑制损伤斑块中巨噬细胞的聚集，减轻AS〔16～20〕。本研究显示UA能够降低高脂饮食大鼠血清TC、TG和LDL-C水平，提示其调脂作用可能成为其抗AS的一部分。同时UA对脂质沉积和泡沫细胞形成有一定的抑制作用，促进平滑肌增生，但血管壁仍然有少量脂质沉积、炎性细胞和泡沫细胞，这可能与本研究给药时间较短有关。研究证明，UA可以抑制脂质沉积，促进平滑肌增生、血管修复和单核巨噬细胞增生，而这些单核巨噬细胞在AS中发挥着相当的作用，在AS中UA是否可以抑制这些炎症发生，降低内膜损伤将在以后的研究中进一步探讨。