良恶性膀胱肿瘤患者的PRMT5和Cox-2表达水平比较

郅玲然，王卉芳，蔡凤梅，李元朋，焦向宁

（1.西安市第四医院病理科，西安 710004；2.武警陕西省总队医院泌尿外科，西安 710054）

膀胱癌是指发生于膀胱黏膜移行上皮的恶性肿瘤，是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，在全球范围内，膀胱癌发病率居恶性肿瘤的第11位，世界范围内每年新增病例数约为1200万，我国每年膀胱癌发病率约为6.69/10万，其中男性发病率约为女性的3.7倍，且随着近年来我国居民生活方结构的调整，膀胱癌发病率逐年递增[1-3]。有研究发现，PRMT5在蛋白质甲基化中发挥重要作用，参与了细胞增殖、分化、凋亡和肿瘤形成等过程[4-5]；Cox-2属于诱导酶的一类，越来越多的研究指出，其与肿瘤的发展、新生血管的形成等过程有密切联系[6]。联合检测PRMT5与Cox-2在膀胱肿瘤良恶性的应用价值尚未见文献报道。因此，本文对PRMT5和Cox-2在良恶性膀胱肿瘤患者表达水平进行了比较，以为良恶性膀胱肿瘤的诊断提供参考价值。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年1月—2018年1月我院经病理确诊为膀胱肿瘤的患者83例，取其膀胱组织，分为良性组53例和恶性组30例，另选20例行前列腺增生症开放术中所取膀胱黏膜组织且经病理检查确定为正常的黏膜组织作为对照组。3组一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 检测方法 良性组及恶性组均在经过尿道膀胱电切术或膀胱镜术时取膀胱肿瘤组织，对照组为行前列腺增生症开放术中所取膀胱黏膜组织且经病理检查确定为正常的黏膜组织，均经10%甲醛固定、石蜡包埋，将包埋后的组织蜡块行4 μm连续切片，之后采用免疫组织化学法[7-8]检测PRMT5及Cox-2表达水平。兔抗人PRMT5单克隆抗体购自瑞士Enzo Life Sciences公司，羊抗兔二抗购自美国Invitrogen公司；Cox-2兔抗人多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司；即用型SP-9003 His-tostain TM-Plus Kits试剂盒（包括封闭用的生物素标记的抗山羊IgG、正常兔血清、辣根酶标记的链霉卵白素）购自美国Zymed公司；DAB显色试剂购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 判断标准 在装有目镜网格测微尺（80 μm×80 μm），×400倍视野下，每个组织切片随机选取5个视野，每个视野计100个细胞中阳性细胞所占的百分比，结果取5个视野中阳性细胞所占百分比的平均值。PRMT5阳性染色判定为细胞浆或细胞核内出现黄色或褐色颗粒，Cox-2的阳性染色判定为细胞浆内出现黄色或褐色颗粒。5个视野中PRMT5阳性细胞所占百分比平均值≥6%记为PRMT5阳性；5个视野中Cox-2阳性细胞所占百分比平均值≥6%记为Cox-2阳性。根据病理学检查结果对恶性组进行分级，分为低级别组与高级别组，低级别组11例，高级别组19例。

1.4 统计学方法 使用SPSS 16.0软件，计数资料以频数和百分率（%）表示，采用χ2检验；计量资料以均数±标准差（） 表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组PRMT5及Cox-2阳性表达率对比 见表1。

表1 3组PRMT5及Cox-2阳性表达率对比 例（%）

2.2 不同病理分级恶性膀胱肿瘤组织PRMT5及Cox-2阳性表达率对比 见表2。

表2 不同病理分级恶性膀胱肿瘤组织PRMT5及Cox-2表达阳性率对比 例（%）

3 讨论

膀胱癌是现阶段泌尿系统最常见的恶性肿瘤，在我国男性癌症发病率中居第8位，在女性中居第12位[9,10]。PRMT5是一类将S-腺苷甲硫氨酸上的甲基转移至底物蛋白质中精氨酸胍基上的酶，在蛋白质甲基化中起着重要的作用。有研究[11]发现，PRMT5是一种表观遗传酶，可催化多种底物蛋白质甲基化，从而发挥不同的生物学功能，对多个靶基因和信号通路产生影响。张还添等[12]的研究指出，PRMT5既是一种表观遗传酶，同时也是介导实体瘤发生发展的重要基因，该基因在多种实体瘤中均呈现高表达，同时还与患者的病情及预后密切相关。张尤历等[13]通过对肝癌患者的研究也发现，PRMT5对肝癌细胞的增殖、凋亡等过程会产生较大的影响，PRMT5会抑制cdc20、cdc25B等蛋白的表达，抑制细胞克隆形成能力，从而起到调控细胞周期的效果。

本研究也证实，恶性组的PRMT5及Cox-2阳性表达率明显高于良性组和对照组，且良性组也高于对照组，说明在膀胱肿瘤组织中，PRMT5及Cox-2阳性表达率在恶性组织中表达高，分析其原因，Cox-2为可诱导性酶，主要存在于内质网和核膜中，正常情况下Cox-2水平较低，难以检测到。但病理状态下，患者体内Cox-2水平会大幅度上升，催化花生四烯酸转化为前列腺素，促进细胞增殖、血管形成等进程，因而可以通过对Cox-2水平的监测来达到评估肿瘤状态的效果。张军卫等[14]的研究指出，Cox-2对膀胱癌诊断的敏感性为60.0%，特异度为92.0%，准确性为76.0%，提示该物质在肿瘤产生浸润、转移等过程中发挥重要作用。

同时本文通过将膀胱肿瘤患者恶性组织按照病理分级进行分组对比的方式发现，高级别组PRMT5及Cox-2表达阳性率明显高于低级别组，说明在恶性组织中，恶化程度越严重，PRMT5及Cox-2表达阳性率越高。分析认为，其原因为两种物质均在肿瘤细胞的增殖、转移、浸润过程中发挥较为明显的作用，PRMT5能够反映肿瘤细胞DNA复制、转移的进程，而Cox-2可反映肿瘤组织新生血管的形成，膀胱的恶性病变会使PRMT5及Cox-2表达水平上升，远高于良性病变者。同时随着患者病情的加重，其膀胱组织中PRMT5及Cox-2会出现过表达现象，原因与肿瘤组织的转移、浸润会使PRMT5的合成激增，加快细胞的有丝分裂，而高级别组的膀胱癌细胞增殖分裂更为活跃，因而其PRMT5表达阳性率更高；Cox-2可通过诱导血管内皮生长因子的分泌促进新生血管的形成，而高级别组恶性肿瘤的浸润增殖均需血管的营养，因而其Cox-2表达阳性率也较高。