通过固相萃取净化/高效液相色谱-串联质谱法测定华南黄瓜和华北黄瓜中的烯酰吗啉与啶虫脒残留

马艺荞王禄禄 王剑锋谭 克 李彦军姜奇峰*

（1.吉林省蔬菜花卉科学研究院 吉林长春 130033 2.吉林省正恒检测有限公司 长春 130011）

啶虫脒是一种新型杀虫剂，可有效防治农产物的虫害，并可杀卵，此杀虫剂经常用于蔬菜[1]。烯酰吗啉是一种信息内吸治疗性杀菌剂，对卵菌各个阶段都有抑制作用，醉霜霉病霜疫霉病、晚疫病、疫（霉）病、疫腐病、腐霉病、黑胫病等低等真菌性病害均具有很好的防治效果[2]。两种农药经常被用于葡萄、荔枝、黄瓜、甜瓜、苦瓜、番茄、辣椒、马铃薯、十字花科蔬菜[3]。

近年来，电喷雾液相色谱-质谱联用（HPLC-ESI MS MS）经常因灵敏度高，分析快速，定性定量准确而被用于多种农残检测[4]。本文采用超高效液相色谱-串联质谱的方法，经过前期处理步骤，建立了快速分析啶虫脒与烯酰吗啉残留的方法。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂及仪器

华南黄瓜和华北黄瓜（市面购买）：乙腈（美国Fisher chemical公司)、甲酸（麦克林）均为色谱纯：氯化钠（国药化学试剂有限公司）；啶虫脒、烯酰吗啉（农业部环境保护科研监测所）。

仪器：Agilent 1260 UPLC-Agilent 6470A高效液相色谱-串联三重四级杆质谱联用仪（配ESI离子源）；离心机TG16.5（上海卢湘仪离心机仪器有限公司）；固相萃取ASE-12(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；超声波提取仪KQ-8000DE（昆山市超声仪器有限公司）；氮吹仪BF2000-15A（北京八方世纪科技有限公司）；旋转蒸发RE-2000A（上海亚荣生化仪器厂）；可调式混匀仪MX-S（大龙兴创实验仪器（北京）有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 样品处理

华南黄瓜和华北黄瓜取代表性样品500g，取可食部分，避光匀浆，每种样品平均分为2份保存在0～4℃冷藏保存。

1.2.2 样品前处理

称取10g试样于50mL离心管中，加入20mL乙腈，涡旋1min，超声 30min，加 5g 氯化钠，在涡旋 1min[5]，8000r/min 离心5min，取上清10mL，在50℃水浴中旋转浓缩至约1mL，待净化。

1.2.3 净化

在Sep-Pak固相萃取柱中加入2cm左右无水硫酸钠，并放在鸡心瓶固定架上，加样前使用5mL乙腈预洗柱，当液面即将流干时，加入样品浓缩液，并更换鸡心瓶接收净化液，使用乙腈10mL乙腈分3次洗脱，并接收洗脱液于鸡心瓶中，在50℃水浴中旋转蒸发至约1mL。将浓缩液至于50℃氮吹仪上吹干，迅速加入1mL乙腈+甲酸水0.1%（3+2）涡旋混匀，经0.22μm滤膜过滤后进行液相色谱-串联质谱测定[5]。

1.2.4 液相色谱-串联质谱测定条件

1） 色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 2.1mm×50 mm，1.8-Micron。

2）流动相及洗脱程序见表1

表1 流动相及梯度洗脱条件

流动相A：乙腈 流动相B：0.1%甲酸水溶液梯度洗脱，流速0.4mL/min，进样量 1μL。

3）电喷雾离子源（ESI）：正离子扫描，多反应监测（MRM）模式；毛细管电压3.5KV，喷嘴电压500V，鞘气流速11L/min，鞘气温度250℃，雾化器压力45psi，干燥器流速5L/min，干燥器温度300℃。

4）烯酰吗啉与啶虫脒MRM质谱优化参数

啶虫脒保留时间0.405min，母离子223.2：定量离子126.2，去簇电压100eV，碰撞能量20eV；定性离子90.0，去簇电压100eV，碰撞能量30eV。

烯酰吗啉保留时间0.510min，母离子388.1：定量离子301.1，去簇电压100eV，碰撞能量20eV；定性离子165.1，去簇电压100eV，碰撞能量30eV。

2 结果

2.1 质谱条件优化

根据每种化合物的准分子离子及其特征离子的质谱图，选择两个子离子与母离子组成两对离子对进行MRM检测。先对啶虫脒与烯酰吗啉进行全扫（MS2 Scan），确定啶虫脒与烯酰吗啉的母离子为223.2与388.1，依次对两种物质进行选择离子检测（MS2 SIM）、子离子扫描（Product lon）、多重反应监测（MRM），确定子离子、碰撞能量、加速电压等质谱参数[6]。

图1 啶虫脒与烯酰吗啉的质谱方法

2.2 华南黄瓜与华北黄瓜检测结果分析

市面上的华南黄瓜与华北黄瓜的啶虫脒与烯酰吗啉检测结果均为未检出。

图2 啶虫脒与烯酰吗啉的线性范围及回归方程

表2 啶虫脒与烯酰吗啉的线性范围、回归方程、相关系数、检出限、定量限

固相萃取净化/高效液相色谱-串联质谱测定华南黄瓜和华北黄瓜中烯酰吗啉与啶虫脒残留[7]。样品经过处理净化，电喷雾（ESI）离子源多反映检测模式进行质谱检测，外标法定量[8-10]。

结果表明在0.5～50ng/mL范围内呈良好线性关系，相关系数均大于0.9960。啶虫脒与烯酰吗啉的定量限分别为0.84μg/kg与0.15μg/kg。

2.3 回收率与精密度

空白样品分别添加 5μg/kg，10μg/kg，20μg/kg 混合标准溶液，每个浓度做5个平行样品，按照方法1.2.2处理，啶虫脒与烯酰吗啉平均回收率为76.7%～117.6%，相对偏差（RSD）为2.3%～9.8%。

3 结论

本实验采用固萃取净化/高效液相色谱-串联质谱测定华南黄瓜和华北黄瓜中烯酰吗啉与啶虫脒残留。样品经过破壁净化处理，电喷雾（ESI）离子源多反映检测模式进行质谱检测，外标法定量。结果表明在0.5～50ng/mL范围内呈良好线性关系，相关系数均大于0.9960。在5～20μg/kg的加标浓度范围内，平均回收率为76.7%～117.6%，相对偏差（RSD）为2.3%～9.8%。