Th1与Th2细胞因子及血管内皮生长因子联合检测对肺癌患者发生发展及临床诊断价值分析

王洪建 ，刘小慧 ，刘燕飞 ，李智全 ，张子弋 ，牛新清

（1.濮阳市人民医院血液病研究所，河南 濮阳 457000 2.新乡医学院医学检验学院，河南 新乡 453000）

相关数据表示[1]，我国中年男性因癌症死亡的人数高达约150万，其中因肺癌死亡占死亡人数的约35.0%，女性患者死亡约到80万，因肺癌死亡的比例约为25.0%。由以上数据可见肺癌对我国人群健康危害极大。相关资料表示[2]，机体中的主要效应细胞为CD4+T淋巴细胞，分为Th1和Th2两种，Th1主要分泌IL-2、IFN-γ或TNF-β等细胞因子辅助细胞免疫，Th2主要分泌IL-4、IL-5、IL-6或IL-10等细胞因子辅助体液免疫[3]。相关研究表示[4]，VEGF在肿瘤的表达中和其转移和生长有一定的相关性。本研究将对以上几种指标进行联合检测，探究Th1与Th2细胞因子及VEGF联合检测在肺癌患者病情发生发展中的临床应用价值。报告如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 入组患者均为2017年6月至2018年6月之间，在我院治疗的肺癌患者114例，男65例，女 49 例，年龄 27-76 岁，平均（50.41±26.06）岁，设为观察组，均经过我院病理活检和基因检测确诊为肺癌，其中有腺癌55例，鳞癌44例，小细胞癌10例，其余5例为其它类型肺癌（肺泡细胞癌、大细胞癌），根据美国国立综合癌症的分级标准，将本研究标本分为I/II级共50例，III/IV级共64例。将相同时间在我院体检的健康者作为对照组，共92例，男 51，女41例，年龄 24~76岁，平均（47.89±25.00）岁。 见表 1。

表1 两组患者一般资料对比情况

1.2 病例组入选标准与排除标准 入选标准：病例组标本均经过我院病理活检和基因检测确诊为肺癌患者；患者有明确的病理分型以及临床分期；患者未接受过相关的免疫治疗史。排除标准：排除伴有肺部严重疾病感染和肺结核的患者。

1.3 研究方法

1.3.1 实验仪器和试剂 CBA细胞因子检测试剂盒 （购于美国BD生物科技有限公司）、BECKMANCOULTER-NAVIOS流式细胞仪（购于河南省莱福茵生命科学有限公司）、低温离心机、漩涡混匀器、移液器、微量精密加样器。

1.3.2 实验原理 CBA方法[5]是指一系列具有相同荧光素不同荧光强度的微球组合,微球大小体积相同,在相同荧光强度的微球上包被有适合于检测各种细胞因子的特异性抗体。同理，在其他荧光强度的微球上包被有其他不同的特异性抗体，将包被有不同抗体的微球混合在一起加入到测试样本中，使细胞溶解，各种蛋白或细胞内成分释放出来到悬浮溶液中，被捕获微球捕获，就可以利用CBA方法进行多种细胞因子的检测。

1.3.3 实验操作 血浆准备：EDTA-K2抗凝管2毫升全血标本。标准曲线制备：建立系列细胞因子标准品溶液，用定量稀释液稀释相关标准品。微球准备：各试管全血10μl加破膜剂5μl混合室温静置15min，加捕获微球 5μl混合室温暗视野静置10min，转移混合的微球悬液到各个流式测定管中。加藻红蛋白（PE）检测试剂5μl于检测管，室温避光孵育3h。用流式细胞分析液洗涤样本，离心，弃去废液。加分析液500μl震荡混匀，立即上机检测。

1.4 观察指标 观察标准：⑴统计两组患者细胞中的Th1型和Th2型细胞因子和血清中VEGF的表达情况。⑵统计观察组患者的不同临床特征中细胞因子的表达差异性，其中包括年龄、病理分型、临床分期等。⑶观察肺癌患者血浆中的细胞因子和肿瘤标志物的相关性。

1.5 统计学方法 利用SPSS20.0软件对两组细胞因子和肿瘤标志物的表达情况进行统计分析，若两组相关指标表达情况均符合正态分布,则进行统计描述，两组间对比则应用t检验；若两组相关指标表达情况不符合正态分布，则用中位数±四分位间距进行统计描述，组间比较利用秩和检验。利用方差分析对观察组细胞因子不同分型组间进行比较。应用person相关法来检测细胞因子和肿瘤标志物的相关性,若P<0.05认为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者血浆中相关因子表达水平 Th1型中,观察组血浆中的IFN-γ、IFN-a浓度均显著高于对照组（t=9.224、7.887，P=0.001、0.031）,观察组患者的血浆中IL-2表达水平显著低于对照组 （t=-12.524，P=0.000）， 组间差别具有统计学意义 （P<0.05）；而两组患者血浆中的IL-12P40表达情况差别不显著，无统计学意义（P>0.05）；Th2型中，观察组患者血浆中的IL-6、IL-8以及IL-10的表达水平均显著高于对照组 （t=8.206、15.263、7.718，P=0.023、0.000、0.027）， 观察组患者血浆中的 VEGF浓度显著低于对照组（t=-8.110，P=0.009），组间差别具有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.2 观察组患者的不同临床特征中细胞因子的表达差异性 男性肺癌患者的VEGF浓度显著高于女性患者（t=18.001，P=0.000），差别具有统计学意义（P<0.05）；Th1、Th2 型细胞因子以及 VEGF 在不同年龄段的患者血浆表达差别不大（P>0.05）；临床III/IV期患者血浆中的IL-8表达水平显著低于I/II期表达水平（t=9.546，P=0.001），差别具有统计学意义（P<0.05），其余细胞因子在病情不同程度的分期上差别不大（P>0.05）。见表3。

2.3 肺癌患者血浆细胞因子和肿瘤标志物的相关性 肺癌患者中，IFN-γ的表达和NSE、糖类抗原CA125以及肿瘤特异生长因子呈正相关，相关系数分别为 （r=0.164、0.156、0.189，P=0.039、0.032、0.021）；IL-6 浓度越高，NSE、CA125 以及肿瘤特异生长因子水平也越高,其关系为正相关，系数为（r=0.266、0.244、0.400，P<0.001）；IL-8 的表达 NSE、糖类抗原CA125以及肿瘤特异生长因子呈正相关，相关系数分别为（r=0.302、0.299、0.342，P<0.001）；IL-10的表达和糖类抗原CA125呈正相关，相关系数为（r=0.192，P<0.001）；VEGF 和肿瘤特异生长因子为正相关，系数（r=0.287，P=0.001）。 见表 4。

表2 两组患者血浆中相关因子表达水平（，n）

表2 两组患者血浆中相关因子表达水平（，n）

组别 例数IL-2 Th1型IFN-γ IFN-a IL-12 IL-6 Th2型IL-8 IL-10VEGF观察组对照组t值P值114 92 2.65±0.80 6.93±4.20-12.524＜0.001 5.52±1.82 2.50±1.90 9.224 0.001 10.52±9.20 7.01±3.21 7.887 0.031 4.03±2.95 3.95±0.84 2.084 0.712 4.36±1.52 2.84±1.23 8.206 0.023 13.20±3.20 2.23±1.02 15.263＜0.001 3.85±0.74 2.01±0.05 7.718 0.027 123.62±28.63 259.6±100.21-8.110 0.009

3 讨论

虽然目前医学领域对肺癌治疗[6]的进展已经非常之大，其中主要为手术治疗、放化疗等，但是肺癌患者的预后仍然不理想，5年后生存率极低[7]，极大的威胁着人类的健康。相关研究表示[8]，机体内的免疫功能失调会在非小细胞癌的发展过程中出现一定的作用。机体中的主要效应细胞为CD4+T淋巴细胞，分为Th1和Th2两种，Th1主要分泌IL-2、IFN-γ或TNF-β等细胞因子，Th2主要分泌IL-4、IL-5、IL-6 或 IL-10 等细胞因子[9]。 一般情况下两种细胞因子会维持着整个机体的相对平衡，两者相互调节对方的活动和发展方向,但是两者若出现失衡，体积的免疫功能也随着出现失调，严重时会引起肿瘤的发生。相关文献报道[10]：联合检查非小细胞癌患者的血浆中IL-4和IL-10的浓度要远远高于健康者,而Th1型的IL-2、IL-12等因子均显著低于正常人,足以说明Th1和Th2的失衡和肿瘤的发生发展相关。

表3 观察组患者的不同临床特征中细胞因子的表达差异性（，n）

表3 观察组患者的不同临床特征中细胞因子的表达差异性（，n）

注：组间进行比较，*P<0.05。

项目 IL-2 IFN-γ IFN-a IL-12P40性别男女年龄分期分型≥60岁＜60岁I/II期III/IV期腺癌鳞癌小细胞癌其他2.55±0.87 2.60±0.84 2.50±0.78 2.61±0.80 2.75±0.86 2.69±0.84 2.69±0.94 2.46±1.03 2.74±1.30 2.56±1.14 3.26±7.12 3.50±7.09 3.74±2.63 3.23±2.95 5.01±3.32 5.85±3.98 5.69±3.36 6.03±4.02 6.23±4.12 6.51±4.09 11.63±10.20 10.89±10.03 10.80±7.20 10.21±7.69 9.32±8.69 10.49±9.25 10.69±9.17 11.62±10.63 10.32±9.85 11.03±9.01 3.98±3.79 4.16±3.54 4.30±2.96 4.52±3.16 5.48±2.96 4.09±3.02 4.30±2.99 4.58±3.69 4.65±3.62 3.98±2.47 IL-6 IL-8 IL-10 VEGF 2.96±2.65 2.89±2.24 2.87±1.03 2.93±1.56 2.98±0.74 2.93±0.84 2.98±0.96 3.02±0.99 3.23±1.03 2.80±0.89 14.95±3.26 12.98±3.62 11.36±3.14 12.20±3.26 2.96±2.15*15.36±4.85*7.69±4.63 8.03±4.50 7.78±4.47 7.59±4.09 2.78±1.75 2.71±1.80 2.79±1.96 2.74±1.74 3.05±2.03 2.63±1.79 2.78±1.78 2.72±2.01 2.79±1.89 2.65±1.87 622.59±321.47*225.19±192.52*302.25±250.47 299.16±248.14 400.63±295.63 398.59±277.41 512.63±253.64 520.14±245.26 513.67±250.69 505.75±239.89

表4 肺癌患者血浆细胞因子和肿瘤标志物的相关性

血管内皮生长因子(VEGF)，是血管内皮细胞特异性结合生长因子，是一种“保守型”的二聚体糖蛋白，与很多疾病的诊治息息相关[11]。其具有以下功能：1.刺激血管内皮细胞的增殖；2.导致病理性血管生成；3.最强的血管渗透剂[12-13]。

段民新[14]等研究发现，肺癌患者的IL-12水平较健康患者显著降低（P<0.05）；张霞琴[15]等指出,肺癌患者外周血的中TNF-a浓度相对于健康人来说较高,而进展期的肺癌患者的TNF-a浓度更高。穆赢海[16]证实了，高表达水平的IL-6和非小细胞癌患者的不良预后有一定的相关性，病情晚期的患者，其血清中的IL-6浓度显著升高,本研究与之相似。本研究可以看出Th1型中，观察组血浆中的IFN-γ、IFN-a 浓度均显著高于对照组 （P＜0.0 5），而观察组血浆中IL-2表达水平显著低于对照组组间（P＜0.05）；Th2 型中，观察组患者血浆中的 IL-6、IL-8以及IL-10浓度均高于对照组，肺癌患者血浆中的VEGF浓度显著低于健康人，组间差别具有统计学意义 （P＜0.05）；男性肺癌患者的VE GF浓度显著高于女性患者（t=18.001，P=0.000），说明了肺癌患者内存在着Th1型细胞因子向Th2型细胞因子漂移的现象,由此证实了肺癌患者机体内的两种细胞因子出现失衡,和肺癌的发生发展具有密切关系。而观察组患者血浆中的VEGF表达水平显著低于对照组（P＜0.05），其相关文献结果有所差别[17]。表2中可以看出男性肺癌患者的VEGF浓度显著高于女性患者（t=18.001，P=0.000），临床 III/IV期患者血浆中的IL-8表达水平显著低于I/II期表达水平（t=9.546，P=0.001），其余细胞因子在病情不同程度的分期上差别不大（P＞0.05），进一步证实了Th1向Th2漂移的程度和临床分期具有相关性（P＜0.05），和其余临床特征无明显相关性。表3中可以看出 IFN-γ 、IL-6、IL-8分别与 NSE、CA125以及肿瘤特异生长因子呈正相关；IL-10的浓度越高，CA125水平也越高,两者呈正相关；VEGF的表达和肿瘤特异生长因子呈正相关,提示了联合检测相关细胞因子和肿瘤标志物,能够有效的提高对肺癌患者的诊断、预后评估等方面的准确率。

综上所述，研究通过联合检查患者机体的细胞因子和常见肿瘤标志物,同时分析了两者之间的相关性,可以有效的了解机体内免疫系统的情况,并且有可能为肺癌的免疫治疗提供有益的治疗方案。