脑脊液细胞染色分类在有核细胞计数偏低时的临床价值

温小梅，林有东

（福建省立医院检验科，福建 福州350001）

脑脊液细胞染色分类法是目前检测脑脊液细胞的金标准,可诊断和鉴别诊断中枢神经系统感染性疾病、脑血管病、中枢神经系统原发性肿瘤、转移性肿瘤、白血病和淋巴瘤脑膜转移等[1-4]。目前临床上脑脊液细胞分类大部分医院还采用显微镜分类法，即通过冰醋酸的作用下，在高倍镜下根据细胞形状和细胞核的形态进行分类,共计数100个有核细胞，分别计算单个核和多个核所占比例，以百分数表示。《全国临床检验操作规程》脑脊液常规中提到如直接分类法不易区分细胞或临床需要分类结果时才进行细胞染色分类[5]；《临床检验基础》第5版提到白细胞计数<30×106/L可不做分类计数,且未强调一定需要细胞染色分类[6]。亦有文献报道细胞染色分类形态学检查具有很重要的临床意义[7，8]。但是，我们在平时的工作实践中发现,有核细胞计数偏低时还是需要对其进行细胞染色分类,仍具有极其重要的临床价值。

因此，本文通过前瞻性地收集113例脑脊液有核细胞总数计数<20×106/L的标本，进行离心染色分类，探讨脑脊液有核细胞偏低的细胞染色分类对临床的参考价值。

1 材料和方法

1.1 研究对象 选取福建省立医院2016年6月至2018年10月期间住院采集的有核细胞计数均在20×106/L以下的脑脊液标本113例。同步通过住院信息系统收集患者的临床病例资料，通过LIS系统收集同一份脑脊液标本的葡萄糖、氯化物、血清腺苷脱氨酶（ADA）和总蛋白等生化检验结果。

1.2 实验方法 脑脊液标本采集2管，每管2ml送至检验科后2h内完成细胞染色分类和生化检查。首先于Sysmex XE-5000仪器在体液模式下进行细胞计数，然后再充入牛鲍氏计数板，由两位主管技师职称以上的检验师，在Olympus CX23显微镜下进行人工核对有核细胞数,选择有核细胞数<20×106/L，红细胞数<5×106/L的标本，吸出300μl至Thermo细胞涂片离心机 （Cytospin4）进行1000r/min离心3min,收集细胞于玻片上，用珠海贝索生物技术有限公司生产的瑞氏－姬姆萨染液A和B染色10min（根据本实验室SOP文件操作）,用Olympus CX23进行分类100个有核细胞。同一患者的另一管脑脊液标本3000r/min离心5min后按标准操作规程用贝克曼DXC800检测，2h内完成。

1.3 统计学处理 数据处理使用SPSS17.0统计软件进行分析。各组患者百分率之间采用卡方检验或者FISH精确检验，生化结果用单向方差分析。两侧P<0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 病人基本特征 脑脊液有核细胞计数<20×106/L的113例患者均已确诊,见表1。

表1 病人基本特征

2.2 常见细胞染色分类情况和细胞形态 细胞染色后分类发现17例异常细胞，其中最常见的是转移癌细胞，胃癌转移细胞有5例，占29.4%（5/17），肺癌转移细胞4例，占23.5（4/17）；其次为淋巴瘤细胞3例，占17.6（3/17）。常见的转移性癌细胞、淋巴瘤细胞和脑膜白血病细胞形态见图1。113例患者中，淋巴细胞分类升高(>80%)有34例；单核细胞升高（>45%）有18例，1例出现嗜酸性粒细胞升高（>5%）。 见表 2。

2.3 细胞染色分类法与影像学检查 实体恶性肿瘤、淋巴瘤和白血病患者做细胞染色分类检查检出异常细胞的阳性率均高于相近时间段的头颅CT/MRI检查。特别是对于实体恶性肿瘤，细胞染色分类检查检出异常细胞的阳性率为71.4%（10/14）明显高于CT/MRI检查发现占位性病变的阳性率21.4%（3/14）,两种检查方法有显著统计学意义（P=0.021）。 见表 3。

不同临床诊断患者之间葡萄糖、氯化物、ADA和总蛋白等生化检验结果均无统计学意义。

4 讨论

表2 细胞染色分类异常结果

图1 常见的转移性癌细胞、淋巴瘤细胞和脑膜白血病细胞

表3 细胞染色分类法与影像学检查

脑脊液的细胞形态学在临床中枢神经系统疾病诊断和治疗监测上具有重要意义。随着临床检验技术的飞速发展,虽然目前脑脊液检查有流式细胞分析技术、PCR基因扩增技术和原位荧光等的应用[9-14],但细胞形态学简单快速,成本价格低，而且结果直观,因此脑脊液的细胞染色分类法仍然作为中枢神经系统疾病包括转移癌、隐球菌感染、淋巴瘤和白血病等主要的检查手段[15-17]。如前所述《全国临床检验操作规程》脑脊液常规中提到如直接分类法不易区分细胞或临床需要分类结果时才进行细胞染色分类[5]，因此在实际检验操作中,本科室的标准操作规程（SOP）以及大多数福建省级医院检验科均以细胞计数＜20×106/L作为不再染色分类的标准,但本研究发现假如按操作规程检验的话，113例患者中至少漏诊17例患者,包括转移性胃癌、转移性肺癌、淋巴瘤和中枢神经系统白血病。因此脑脊液细胞计数＜20×106/L，细胞染色分类仍然非常必要,对于中枢神经系统病变早期诊断具有十分重要的意义,特别是怀疑脑膜转移癌患者。以往较多文献报道脑脊液脑膜癌检出率一般为1%左右,本研究纳入的标本是有核细胞＜20×106/L的脑脊液标本，检出阳性率为10.6%（12/113）,我们分析了阳性率差异原因，标本入选标准只有一条即有核细胞计数小于20×106/L的所有送检的脑脊液标本，因此不存在选择性偏倚。阳性率差异原因可能有如下两个：一是113例入选患者中有64例有头晕头痛，是否因为临床症状已出现导致阳性率高；二是本研究使用性能较好的Thermo细胞涂片离心机,再加上有高年资的检验技师复核结果可能降低了漏检率。阳性率差异原因需在后续研究中进一步探讨。

有学者报道34例脑膜癌患者中32例脑脊液检出恶性肿瘤细胞,而CT/MRI检查仅有23例出现脑膜损伤脑水肿等各种非特异性的影像学改变[18]。与以往的研究报道类似,本研究亦发现，脑脊液有核细胞计数＜20×106/L的患者细胞染色分类法对实体恶性肿瘤脑转移、淋巴瘤脑转移和中枢神经系统白血病阳性检出率均高于CT/MRI检查，脑脊液细胞染色分类法对这类疾病的诊断准确性可能优于影像学检查。因此，对于怀疑这类疾病患者,脑脊液细胞染色分类法是非常重要的早期诊断手段。当然,后续研究进一步增加研究的样本量是非常必要的。

综上所述,脑脊液的细胞形态学检查无论细胞计数多少均需要进行细胞染色分类,特别是对于怀疑转移性癌、淋巴瘤侵犯中枢和中枢神经系统白血病患者,而且细胞染色分类检查早期诊断作用可能优于CT/MRI检查。