溃疡性结肠炎患者外周血Tim-4mRNA表达水平的变化及意义

华琳 陈元旺 唐静

摘要：目的  探究溃疡性结肠炎患者外周血Tim-4 mRNA的表达变化及临床意义。方法  选取2015年2月～2019年4月我院收治的溃疡性结肠炎患者38例作为观察组，另选取同期来我院体检的健康者30名作为对照组，采用荧光定量PCR测定外周血Tim-4 mRNA表达水平，比较两组Tim-4 mRNA、C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）表达水平及观察组Tim-4 mRNA与CRP和ESR的相关性。结果  观察组Tim-4 mRNA、CRP、ESR表达均高于对照组[（0.79±0.37）vs（0.33±0.20）]、[（6.08±3.21）mg/L vs（0.99±0.87）mg/L]、[（19.12±12.13）mm/h vs（5.58±4.10）mm/h]，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组外周血单个核细胞Tim-4 mRNA表达水平与CRP呈正相关（r=0.376，P<0.05），而与ESR无相关性（r=0.077，P>0.05）。结论  溃疡性结肠炎患者Tim-4 mRNA异常上调，并与CRP密切相关，可能参与溃疡性结肠炎的致病过程。

关键词：溃疡性结肠炎;Tim-4;C反应蛋白;红细胞沉降率

中图分类号：R574.62                                文献标识码：A                                DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.21.054

文章编号：1006-1959（2019）21-0161-03

Abstract：Objective  To investigate the expression and clinical significance of Tim-4 mRNA expression in peripheral blood of patients with ulcerative colitis.Methods  A total of 38 patients with ulcerative colitis admitted to our hospital from February 2015 to April 2019 were enrolled as the observation group. 30 healthy subjects from our hospital for the same period were selected as the control group. The expression of Tim-4 mRNA in peripheral blood was determined by real-time PCR. The expressions of Tim-4 mRNA， C-reactive protein （CRP） and erythrocyte sedimentation rate （ESR） in the two groups and the correlation between Tim-4 mRNA and CRP and ESR in the observation group were compared.Results  The expressions of Tim-4 mRNA， CRP and ESR in the observation group were higher than those in the control group [（0.79±0.37） vs （0.33±0.20）]， [（6.08±3.21） mg/L vs （0.99±0.87） mg/L]， [（19.12±12.13） mm/h vs （5.58±4.10） mm/h]， the difference was statistically significant （P<0.05）. The expression of Tim-4 mRNA in peripheral blood mononuclear cells of the observation group was positively correlated with CRP （r=0.376， P<0.05）， but not correlated with ESR （r=0.077， P>0.05）. Conclusion  The abnormal expression of Tim-4 mRNA in patients with ulcerative colitis is closely related to CRP and may be involved in the pathogenesis of ulcerative colitis.

Key words：Ulcerative colitis;Tim-4;C-reactive protein;Erythrocyte sedimentation rate

潰疡性结肠炎（ulcerativecolitis）是一类以肠道炎症为主要表现的慢性复发性肠道自身免疫性疾病[1]。全球范围内溃疡性结肠炎发病率高达5.5/10000～24.3/10000，中国溃疡性结肠炎发病率也高达11.6/10000，并有逐年增加趋势[2]。但目前溃疡性结肠炎病因学及发病机制尚未完全阐明，且治疗棘手、病程冗长，严重影响患者生活质量。有研究认为[3]，溃疡性结肠炎发生可能与遗传、免疫功能紊乱、感染、环境等多种因素有关。作为自身免疫性疾病，免疫功能异常在疾病机制中扮演重要的角色，其中CD4+T辅助细胞（Th）是介导免疫反应的主要效应细胞，既往研究普遍认为溃疡性结肠炎患者主要以Th2细胞反应为主[4]。Tim-4是T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域家族成员之一，近期发现其可以作为免疫负调控因子调控免疫平衡，包括Th2细胞反应。据此推测Tim-4可能参与溃疡性结肠炎发病过程。然而目前关于溃疡性结肠炎和Tim-4的研究报道较少。本文主要探究溃疡性结肠炎患者外周血Tim-4 mRNA的表达变化及临床意义，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料  选取2015年2月～2019年4月九江市第一人民医院收治的溃疡性结肠炎患者38例作为观察组，另选取同期来我院体检的健康者30名作为对照组。观察组中男22例，女16例，年龄29～67岁，平均年龄（49.87±13.56）岁。对照组中男18例，女12例，年龄28～69岁，平均年龄（48.91±10.82）岁。两组性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经医院伦理委员会审批通过，所有研究对象知情同意并签署知情同意书。

1.2纳入及排除标准

1.2.1纳入标准  ①符合“炎症性肠病诊断与治疗的共识意见（2012年·广州）”制订的溃疡性结肠炎诊断标准[5];②所有患者在纳入研究前均未经任何治疗，为初诊病例;③所有患者在纳入前6个月均未服用任何免疫抑制剂药物。

1.2.2排除标准  ①合并结直肠肿瘤患者;②其他脏器肿瘤、自身免疫性疾病以及感染性疾病的患者。

1.3方法  抽取清晨空腹静脉血5 ml，置于EDTA抗凝管中，淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，TRIZOL法提取外周血单个核细胞总RNA（Invitrogen公司试剂盒）。Real-time qPCR检测外周血单个核细胞Tim-4 mRNA表达水平。引物序列为：Tim-4：5'-ACAGGACAGATGGATGGAATACCC-3'，5'-AGCCTTGT GTGTTTCTGCG -3';β-actin：5'-TGACGTGGACATCCGCAAAG-3'，5'-TGGAAGGTGGACAGCGAGG-3'。另外抽取2 ml静脉血于干燥管中，以4000 r/10 min离心分离血清后，采用西门子BN-II及配套试剂以免疫浊度法检测两组人群的C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）。再抽取2 ml静脉血于枸橼酸钠抗凝管中，采用魏氏法测定红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）。检测前保证仪器室内质量控制合格。

1.4观察指标  比较两组Tim-4 mRNA、CRP、ESR表达及观察组Tim-4 mRNA与CRP和ESR的相关性。

1.5统计学方法  采用SPSS20.0统计学软件进行数据分析。计量资料以（x±s）表示，采用t检验;计数资料以[n（%）]表示，采用？字2检验;采用Pearson法分析Tim-4 mRNA与CRP和ESR的相关性。以P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1两组Tim-4 mRNA、CRP、ESR表达比较  观察组Tim-4 mRNA、CRP、ESR表达均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2观察组Tim-4 mRNA与CRP和ESR的相关性分析  观察组Tim-4 mRNA表达水平与CRP呈正相关（r=0.376，P<0.05），而与ESR无相关性（r=0.077，P>0.05），见图1。

3讨论

溃疡性结肠炎是一种病因尚不明确的结肠和直肠慢性非特异性炎症性疾病，病变局限于大肠黏膜及黏膜下层。病变多位于乙状结肠和直肠，也可延伸至降结肠，甚至整个结肠。病程漫长，常反复发作，严重影响患者生活质量。溃疡性结肠炎治疗仍以缓解症状为基础，在众多机制假说中，机体对肠道微生物的过度免疫反应以及机体自身免疫平衡紊乱被认为是最为重要免疫学机理。抗原呈递细胞在溃疡性结肠炎发病机制中起着重要作用，而巨噬细胞是一类可向T细胞提供抗原信息的专职抗原提呈细胞，并诱导T细胞增殖分化。溃疡性结肠炎发病过程涉及以上免疫异常过程，而免疫调控分子Tim-4与这些过程存在一定联系。

Tim-4是Tim家族成员之一，主要表达于抗原呈递细胞、T细胞和单核/巨噬细胞表面。Miyanishi M等[6]首次证实Tim-4是凋亡细胞吞噬的磷酸化受体，进一步证实了其调节免疫细胞功能的生物学效应。另研究发现[7]，Tim-4可参与系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎等自身免疫性疾病的慢性炎症调控过程，且其表达水平与疾病进展密切相关。Fang XY等[8]研究发现，Tim-4可通过不同细胞信号参与机体免疫调控，被证实为全新的免疫负性调控因子。Tim-4已经在多种自身免疫性疾病中被证实，如在强直性脊柱炎患者中单核细胞上Tim-4的表达以及血浆中Tim-4的水平均高于健康人群，且与TNF-α和疾病活动度密切相关;此外，在系统红斑狼疮患者中也发现Tim-4表达异常上调。以上结果提示Tim-4作为新型免疫调控分子参与自身免疫性疾病的发生发展，据此推测Tim-4可能参与同为自身免疫性疾病的溃疡性结肠炎的病因学过程。本研究结果发现，观察组Tim-4 mRNA、CRP、ESR表达均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），表明溃疡性结肠炎患者的炎症活化状态，与上述研究结果一致，而Tim-4转录水平的上调则提示其参与了溃疡性结肠炎的致病过程，但具体调控机制有待于进一步研究。此外，相关性分析结果显示，观察组Tim-4 mRNA表达水平与CRP呈正相關（r=0.376，P<0.05），而与ESR无相关性（r=0.077，P>0.05）。提示Tim-4可能参与了溃疡性结肠炎中过度炎症反应过程，且有潜力成为评估疾病炎症状态的新指标。

综上所述，溃疡性结肠炎患者Tim-4 mRNA表达异常并与CRP密切相关，可能参与了溃疡性结肠炎的致病过程。

参考文献：

[1]孙健，文艳，林一帆.溃疡性结肠炎病因和发病机制研究进展[J].辽宁中医药大学学报，2017（4）：94-97.

[2]刘笃佳，王媛媛，马旭.溃疡性结肠炎的流行病学研究进展[J].中国烧伤创疡杂志，2017，29（3）：214-217.

[3]Zhang SL，Wang SN，Miao CY.Influence of Microbiota on Intestinal Immune System in Ulcerative Colitis and Its Intervention[J].Frontiers in Immunology，2017（8）：1674.

[4]吴昊，夏盛隆，夏宣平，等.结肠组织中Th1/Th2和Th17细胞失衡与溃疡性结肠炎的关系[J].解放军医学杂志，2017，42（9）：49-54.

[5]中华医学会消化病学分会炎症性肠病学组.炎症性肠病诊断与治疗的共识意见（2012年·广州）[J].胃肠病学，2012，51（12）：818-831.

[6]Miyanishi M，Tada K，Koike M，et al.Identification of Tim4 as a phosphatidylserine receptor[J].Nature，2007，450（7168）：435-439.

[7]Zhang X，Liu Q，Wang J，et al.TIM-4 is differentially expressed in the distinct subsets of dendritic cells in skin and skin-draining lymph nodes and controls skin Langerhans cell homeostasis[J].Oncotarget，2016，7（25）：37498-37512.

[8]Fang XY，Xu WD，Pan HF，et al.Novel insights into Tim-4 function in autoimmune diseases[J].Autoimmunity，2015，48（4）：189-195.

收稿日期：2019-7-1;修回日期：2019-7-11

编辑/杜帆