液基细胞学联合p16、Ki67用于诊断宫颈上皮内瘤变的意义

邱华娟 纪燕琴 梁朵献

【摘要】 目的 探究液基细胞学联合p16、Ki67用于诊断宫颈上皮内瘤变（CIN）的意义。方法 225例

CIN患者为研究对象， 分别给予液基细胞学、p16、Ki67检测， 比较液基细胞学、p16、Ki67单独检测及联合检测的诊断准确率。结果 液基细胞学联合Ki67、p16检测的诊断准确率为100.00%， 显著高于液基细胞学、p16、Ki67单独检测的91.56%、88.44%、86.67%， 差异均具有统计学意义（χ2=19.838、27.594、32.143， P=0.000、0.000、0.000<0.05）。液基细胞学、p16、Ki67单独检测的诊断准确率两两比较， 差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 将液基细胞学联合p16、Ki67应用于CIN诊断中， 可显著提升诊断准确度， 值得应用与推广。

【关键词】 宫颈上皮内瘤变;液基细胞学;p16;Ki67

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.27.007

Significance of liquid-based cytology combined with p16 and Ki67 in the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia   QIU Hua-juan， JI Yan-qin， LIANG Duo-xian. Department of Gynaecology， Huizhou Central Peoples Hospital， Huizhou 516001， China

【Abstract】 Objective   To investigate the significance of liquid-based cytology combined with p16 and Ki67 in the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia （CIN）. Methods   A total of 225 CIN patients as study subjects， and all were tested by liquid-based cytology， p16 and Ki67， respectively. The diagnostic accuracy of single and combined detection of liquid-based cytology， p16 and Ki67 were compared. Results   The diagnostic accuracy of combined detection of liquid-based cytology， p16 and Ki67 was 100.00%， which was significantly higher than 91.56%， 88.44% and 86.67% of single detection of liquid-based cytology， p16 and Ki67， and the difference was statistically significant （χ2=19.838， 27.594， 32.143， P=0.000， 0.000， 0.000<0.05）. There was no significant difference in diagnostic accuracy among liquid-based cytology， p16 and Ki67 （P>0.05）. Conclusion   Combined detection of liquid-based cytology， p16 and Ki67 in CIN diagnosis can significantly improve the diagnostic accuracy， and it is worthy of application and promotion.

【Key words】 Cervical intraepithelial neoplasia; Liquid-based cytology; p16; Ki67

宮颈病变在妇科临床中较为常见， 而宫颈癌则是其中最严重的一种类型。临床依据患者细胞的异常程度可将CIN分为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级， 但均有转变成宫颈癌的可能， 对妇女健康产生较大威胁[1， 2]。因此， 需要尽早诊断并采取合理的治疗方法。有研究提出[3]， 从癌前病变发展至宫颈癌大约需要10年。因此， 在这一时期内， 应及时作出相应诊断并及时进行干预， 阻止疾病进一步发展， 因此早期诊断显得尤为重要。在传统诊断中， 主要通过巴氏涂片进行检查， 但是如果巴氏涂片的质量较差， 且厚度存在差异， 在一定程度上影响其诊断结果， 假阴性率、假阳性率也相对较高[4]。随着医疗技术的不断发展， 在目前临床诊断中， 宫颈液基薄层细胞学广泛应用， 加上近年来临床对抗癌基因的认识逐渐加深， 将组织细胞学与基因技术相结合的新型诊断方式成为可能。本研究采用液基细胞学联合p16、Ki67诊断， 为临床诊断方案提供借鉴， 报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取本院2016年2月～2018年2月收治的225例CIN患者作为研究对象， 年龄25～49岁， 平均年龄（35.89±4.87）岁。采用2001伯塞斯达（The Bethesda System， TBS）分类法判读：无上皮内病变或恶性病变（NILM）40例， 非典型鳞状上皮细胞-意义不明确（ASCUS）20例， 非典型鳞状上皮细胞-不除外高级别鳞状上皮内病变（ASC-H）

12例， 低度鳞状上皮内病变（LSIL）76例， 高度鳞状上皮内病变（HSIL）44例， 鳞状上皮癌（SCC）33例。

1. 2 方法 225例患者分别给予液基细胞学、p16、Ki67

检测。

1. 2. 1 液基细胞学检查 ①采用宫颈液基细胞学采样刷分别采集宫颈外口及宫颈管的上皮细胞， 将采样刷置入保存液中;②采用液基细胞学制片技术， 将脱落细胞制成一薄膜细胞涂片， 直径距离为2 cm;③采用TBS诊断系统对其诊断， 其主要内容包括：NILM、ASCUS、ASC-H、LSIL、HSIL、SCC等。

1. 2. 2 p16、Ki67免疫组化检测 采用免疫组化方法检测p16、Ki67蛋白表达。免疫组化染色采用Envision法。鼠抗人一抗Ki67和p16单克隆抗体以及HRP兔抗鼠二抗均购自北京中杉生物技术公司， 用PBS取代一抗作阴性对照。阳性结果判定标准：Ki67阳性信号定位于细胞核， p16以细胞核及细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性表达;在LSIL中， p16呈大片弥漫强阳性判读为阳性， 不累及基底层的点状、斑片状表达定义为阴性;Ki67以及p16的真阳性表达局限于鳞状上皮细胞层下1/3定义为LSIL;Ki67以及p16的真阳性表达超过鳞状上皮3/2至全层， 定义为HSIL。

1. 3 观察指标 比较液基细胞学、p16、Ki67单独检测及联合检测的诊断准确率。

1. 4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件进行统计分析。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

液基细胞学联合Ki67、p16检测的诊断准确率为100.00%， 显著高于液基细胞学、p16、Ki67单独检测的91.56%、88.44%、86.67%， 差异均具有统计学意义（χ2=19.838、27.594、32.143， P=0.000、0.000、0.000<0.05）。液基细胞学、p16、Ki67单独检测的诊断准确率两两比较， 差异均无统计学意义（P>0.05）。见表1。

3 讨论

近年来， 宫颈癌的发病率呈逐年上升发展趋势， 严重威胁患者的身心健康和生命安全， 因此对宫颈病变的早期诊断和治疗显得尤为重要， 不仅能显著降低宫颈癌的发病率， 还能及早有效防治宫颈癌[5， 6]。

随着医疗技术的不断发展， 在目前临床诊断中， 宫颈液基薄层细胞学广泛应用， 該技术不仅有效改善取材方式和标本的保存和固定、制片染色， 同时还可提升涂片质量[7]。此

外， 该技术的背景较为干净， 在观察时清晰可见细胞结构， 容易辨认， 不仅使诊断的特异性大大提高， 同时还可提升其敏感性[8]。该技术的应用为临床提供较好的宫颈病变诊断方式， 但该技术亦会存在误诊、漏诊， 其原因在于：萎缩性标本的良性细胞具有异型性， 而血性标本中， 其细胞结构相对模糊， 由于阳性病理的细胞较小， 且较为拥挤， 与脱落的细胞形态难以区分， 该因素也是导致假阴性的主要原因[9]。随着近年来临床对基因学的不断深入了解， 研究发现， 一些基因直接或间接参与肿瘤的发生发展中， 如p16、Ki67。p16基因直接参与细胞生长增殖的负调节， p16基因的失活则可导致正常p16蛋白的表达异常。研究表明[10]， p16蛋白可竞争cyclinD与CDK4的结合， 通过抑制CDK4的活性， 阻止细胞G1期向S期转化， 使细胞周期停止在G1期， 避免细胞的过度增殖。当p16基因突变或缺失时， p16蛋白就无法正常表达， 细胞增殖失去控制， 最终形成肿瘤。目前已经发现多数肿瘤存在p16蛋白表达的下降或缺失。Ki67是目前应用最广泛的增殖细胞标志之一， 其是一种细胞增殖核抗原， 存在于G0期以外的各期细胞， 与细胞有丝分裂密切相关， 是反映细胞增殖状态的理想标记物， 对判断肿瘤恶性程度有一定的价值。本次研究结果表明， 液基细胞学联合Ki67、p16检测的诊断准确率为100.00%， 显著高于液基细胞学、p16、Ki67单独检测的91.56%、88.44%、86.67%， 差异均具有统计学意义（χ2=19.838、27.594、32.143， P=0.000、0.000、0.000<0.05）。临床基于对分

子标志物的了解， 很多新的分子标志物有助于克服目前宫颈癌普筛的局限性。本研究结果表明， 将p16、Ki67分子标记物联合液基细胞学检查可显著提升诊断准确度。

项目风险分析与对策：病例数量不足：为尽可能准确性的以样本估计总体， 减小抽样误差需要一定的样本量， 增大样本量的有效办法是多中心病例研究。由于多中心研究需要庞大的医疗人力资源及经费开支， 所以本课题在设计时暂以本院医疗网络为主。以本院近两年收治的225例CIN患者为研究对象， 统计分析表明在课题期限内应该有充足的病例， 但不排除各种客观因素造成病源流失， 以致无足够的样本量完成课题。规避措施：课题进行期间每月进行质量监控， 及时预见可能发生的样本量不足情况。在样本量不足时， 尽可能联系急救医疗系统内的兄弟单位进行多中心病例收集。

综上所述， 对CIN患者采用p16、Ki67分子标记物联合液基细胞学诊断， 可显著提升诊断准确度， 值得临床借鉴推广。

参考文献

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[收稿日期：2019-04-02]