HPLC 法测定不同月份远志中远志皂苷的含量

刘庆华，郭海利，姚 莹，王小莉，张 欣，张雪娟，张小民

（1.太原市食品药品检验所，山西太原030006；2.山西大学生命科学学院，山西太原030006；3.山西金科海生物科技有限公司，山西太原030006）

细叶远志（Polygala tenuifolia Willd）为远志科植物的一种，与卵叶远志（Polygala sibirica L.）共同收录于《中国药典》2015 版[1]。远志的干燥根为中医常用药，其功效主要有益智、安神、解酒、祛痰、镇咳、抗衰老及抑菌等[2-7]。远志资源分布广泛，其中山西种植面积最广[8]。已有研究者对不同产地远志的质量进行了评价，认为山西和陕西为远志的道地产区，均为细叶远志，质量最好[9-11]。远志的化学成分主要有三萜皂苷类、酮类、寡糖脂类及生物碱类等[12-13]。细叶远志皂苷（C36H56O12）、远志酮Ⅱ（C25H28O15）和3，6- 二芥子酰基蔗糖（C36H46O17）作为远志的主要药用有效成分，共同被收载于药典[1]。

本试验以远志皂苷为指标，通过HPLC 法测定并比较2 年生远志在不同采收月份中远志皂苷的含量，以确定该地区远志的最佳采收时期。

1 材料和方法

1.1 试验材料

供试材料为2018 年3—10 月每月下旬在平遥县中药基地采收的远志根部，干燥粉碎后备用。

1.2 试验方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱为Kinetex C18（4.6 mm×100 mm，5 μm）；检测波长为210 nm；流动相为甲醇-0.05%磷酸溶液（体积比70∶30）；柱温为30 ℃；流速为1.0 mL/min；进样量为10 μL。

1.2.2 溶液制备

1.2.2.1 标准品溶液的制备 取适量细叶远志皂苷对照品，精密称定，加甲醇配制为1.0 mg/mL 的溶液。

1.2.2.2 供试品溶液的制备 供试品粉末过（355±13）μm 筛，精密称定1 g，置锥形瓶中，加入70%甲醇50 mL，超声处理（400 W，40 kHz）1 h，放冷后再次称质量，70%甲醇补质量。摇匀过滤后取过滤液25 mL，蒸干，残渣中加入10%氢氧化钠溶液50 mL，加热回流2 h，放冷后调pH 值为4～5。50 mL 水饱和的正丁醇振摇提取，共3 次，合并正丁醇，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，定容，摇匀即得。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的绘制

按照1.2.2 溶液的制备方法，将远志皂苷标准品配制成质量浓度分别为5，10，20，25，50，100 μg/mL 的溶液，在1.2.1 的色谱条件下测定相对峰面积与相对保留时间，得到标准品色谱图（图1）。以远志皂苷标准品的质量浓度（μg/mL）为横坐标、相对峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归直线方程为：y＝2.990 6x＋0.629 6（R2＝0.999 9），线性关系良好。

2.2 精密度试验

取相同质量浓度的供试品溶液，在1.2.1 色谱条件下重复进样5 次，测定峰面积，RSD 为0.56%，表明仪器精密度良好。

2.3 重复性试验

取9 月份采收的样品，分成5 份，每份1 g，配制供试液，在1.2.1 色谱条件下分别进样，测定峰面积，RSD＝1.18%（n＝5）＜3%，表明样品重现性好。

2.4 稳定性试验

取适量8 月份采收的样品，分别在0，2，4，6，8，12 h 按照1.2.1 的色谱条件下进样检测，测得RSD为0.45%，表明样品在12 h 内稳定。

2.5 加样回收试验

取已知含量的供试品1 g，加入0.5 mg 远志皂苷对照品，制备供试液，进行含量测定，并计算回收率。结果表明，平均回收率为98.47%，RSD 为0.87%（表1），远志中远志皂苷回收率符合要求。

表1 远志中远志皂苷回收率测定结果

2.6 样品测定

将不同月份采收的远志样品按1.2.2.2 方法制备成待测试样，相同色谱条件下测定待测样品。测定结果显示，3—10 月远志皂苷含量分别为：0.484%，0.358%，0.607%，0.687%，1.376%，0.941%，1.308%，1.821%（图2）。由图2 可知，随着远志生长月份的增加，远志中远志皂苷的含量呈上升趋势，在10 月份达到最高值（1.821%）。10 月份样品的色谱图如图3 所示。

3 结论与讨论

山西是远志种植最为广泛的地区。关于远志中皂苷含量的测定，诸多学者进行了研究。目前，利用HPLC 法测定远志中细叶远志皂苷的方法已基本成熟，并收录于2015 版《中国药典》中。李军等[14]建立了HPLC 法测定远志中总皂苷含量的方法。刘可等[15]建立了HPLC- CAD 法测定远志中细叶远志皂苷含量的方法。刘雪梅等[16]利用HPLC 法测定了远志合剂中细叶远志皂苷的含量。赵云生等[17]对晋产远志资源的皂苷元含量进行测定，结果表明，远志皂苷元含量与该资源所属的农业气候区相关，其中，太原盆地、上党盆地、晋西丘陵等气候区皂苷元含量较高。

本试验材料采收于平遥基地，属于太原盆地，该地较为适宜远志资源的人工种植。刘艳芳等[9]对不同来源的远志资源进行过有效成分的定量分析，结果表明，陕西、山西种植的远志资源质量较高，测定了山西万荣远志种植基地不同月份采收的远志中细叶远志皂苷的含量，发现3—5 月与10—11 月为细叶远志皂苷含量最高时期。本试验中细叶远志皂苷含量在3—10 月呈上升趋势，10 月达到最高。本试验结果与刘艳芳等[9]的结果不一致，是因为远志种植地区不同，本试验材料采自于太原盆地，刘艳芳等[9]的试验材料采自运城盆地，两地温度、气候、湿度等都存在差异，远志资源的质量因种植地区而异。

本试验结果表明，平遥中药基地远志资源中远志皂苷含量随生长月份的增加而增加，最佳采收时期为10 月。研究结果为远志资源的采收时期提供了理论依据。