脑梗死患者血小板糖膜蛋白Ⅱb基因多态性观察

王宁宁，金铭，武楠，邱长春,2

(1齐齐哈尔医学院，黑龙江齐齐哈尔 161006；2中国医学科学院基础医学研究所)

脑梗死近年已发展成为常见病，血小板聚集是其发病机制中的重要组成部分。血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)为血小板上的一类受体，可结合血管性血友病因子(vWF)、纤维蛋白原等多种黏附蛋白，是各种因素所致血小板黏附与聚集的最终共同通路，并通过与P2Y12受体耦联，接到P2Y12受体拮抗剂而发挥药理作用[1]。已有研究[2,3]报道，GPⅡb/Ⅲa的编码基因[血小板糖膜蛋白Ⅱb基因(ITGA2B基因)/ITGA3]遗传多态性与缺血性脑梗死的发病风险相关，但在中国人群中的研究较少，尤其是针对ITGA2B的研究更为鲜见。黑龙江省地处高纬度区域，气温偏低，冬季时间长成为该地区的一大特点，同时本地区居民长期高盐饮食，使该地区脑梗死患病率居于中国之首[4]。但是在黑龙江省地区选取脑梗死患者，并针对ITGA2B基因与脑梗死相关性的研究尚未发现。本研究收集了384例脑梗死患者的临床资料，并探讨其ITGA2B基因多态性与脑梗死发病的关联性，以期进一步完善脑梗死发病机制，为脑梗死的基因诊断和针对不同基因型进行有针对性的治疗提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取齐齐哈尔医学院第二附属医院收治的脑梗死患者384例，男201例，女183例；年龄(61.24±8.89)岁。纳入标准：所有患者均经脑部CT或MRI确诊，并无脑血管病变；排除标准：患有严重肝肾疾病等严重器质性病变或传染病而无法参与研究的患者均予以排除。另选与齐齐哈尔市处于同一纬度的漠河市北极镇健康体检无脑卒中健康居民384例(对照组)，男194例，女190例；年龄(55.82±8.98)岁。所有参与者均无神经系统的症状及体征。本研究经齐齐哈尔医学院医学伦理委员会批准，所有对象均签署知情同意书。

1.2 ITGA2B基因的标签位点筛选及检测 在GeneBank中查找ITGA2B基因区间，42449550-42466874，上下游各扩大2 kb后，为42447550-42468874，下载文件序列后，用Hapview进行设置标签SNP，最终选取标签位点8个，分别为rs5910、rs850733、rs850731、rs853730、rs850728、rs11780452、rs850735、rs55541425。从脑梗死患者和对照组人群的血样中，利用DNA提取试剂盒(北京康为世纪生物科技有限公司)提取DNA，通过SpectroChip 11-G384芯片技术检测已筛选出的SNP位点，计算各基因型的频数，进一步采用统计学方法对比组间ITGA2B基因多态性的差异。

1.3 统计学方法 采用SPSS20.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验，以例数(百分比)表示；群体基因型用Hardy-Weinberg遗传平衡检验；并采用二元Logistic回归计算不同基因型和等位基因的危险性。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组rs850730和rs11780452基因型、等位基因频率比较 每个DNA分别检测了8个位点，即rs5910、rs850733、rs850731、rs853730、rs850728、rs11780452、rs850735、rs55541425。SNP位点rs55541425仅有一种基因型AA予以删除；进一步经Hardy-Weinberg遗传平衡检验发现，rs850733、rs850731、rs850735不符合遗传平衡；经连锁不平衡分析，rs5910与rs850730完全连锁平衡，rs5910为同义突变，所以本次研究重点探讨rs850730和rs11780452与脑梗死的关联。rs850730有19例未检出，检出率为97.53%；rs11780452有17例未检出，检出率为97.79%；其中两位点均未检出的有8人。删除未检出的参与者后，共有740例样本(对照组379人，观察组361人)在本研究中参与进一步的分析，整体有效率为96.35%。

rs850730基因型、等位基因频率比较见表1,rs11780452基因型、等位基因频率比较见表2，由表1、2可知，两组rs850730和rs11780452基因型、等位基因频率比较均无统计学差异(P均>0.05)。

表1 rs850730基因型、等位基因频率

表2 rs11780452基因型、等位基因频率

2.2 两组不同年龄段rs850730和rs11780452基因型、等位基因频率比较 两组不同年龄段rs850730基因型、等位基因频率比较见表3，两组不同年龄段rs11780452基因型、等位基因频率比较见表4，由表3、4可知，非老年人中位点rs850730的AG基因型和等位基因A均增加了脑梗死的危险性，OR(95%CI)=1.819(1.136，2.913)和1.324(1.012，1.733)；计算该位点的显性模型，结果显示脑梗死发病危险性显著增加，OR(95%CI)=1.667(1.065，2.611)。

表3 两组不同年龄段rs850730基因型、等位基因频率

表4 两组不同年龄段rs11780452基因型、等位基因频率

3 讨论

缺血性脑卒中是环境和遗传因素共同作用的产物，具有高发病率、高致残率的特点[5]。据2015年的报道显示，全球脑卒中死亡人数630万人，占总死亡人数的11.8%[6]，其中缺血性脑卒中占60%～80%[7]。随着生活方式的改变和生活压力的增加，近年来脑卒中发病率呈现年轻化的趋势，1990～2010年的20～64岁人群脑卒中发病率增加了25%[8～10]。在我国缺血性脑卒中的危害同样不容小觑，我国每年新增脑卒中200多万，死亡约150万，存活着中50%～60%伴随着瘫痪、失语等严重残疾乃至失去自理能力[11]。因此，加强脑卒中的病因学研究，刻不容缓。

血小板是溶血系统的重要组成部分，在脑梗死的发病机制中起着关键作用。GP Ⅱb/Ⅲa是内膜家族的数量最多的膜蛋白，在血小板活化、聚集和凝固过程中发挥着重要作用。而编码Ⅱb-Ⅲa复合物的基因为ITGA2B和ITGA3[12]，这两个基因均位于17号染色体。目前关于ITGA2B和ITGA3与脑梗死发生的关联性研究，结论并不一致[13～15]。最近的一篇综述显示，包含有3 209例患者的11项研究表明ITGA2B和ITGA3与脑梗死发生有关，这些患者绝大多数数白种人；而同时有包含有1 237例患者的9项研究表示与脑梗死无显著关联性，这些9项中仅有一项是中国脑梗死患者[16]。2010年Sanja Stankovic等发表的综述中曾指出在5篇病例对照性研究中，仅有1篇文献显示ITGA2B对脑梗死的发生有影响[17]。

年龄是脑梗死发生过程中已知的重要影响因素，根据年龄分为老年人和中青年人，分别进行分析，可以降低年龄因素对结果的影响。伴随年龄的增长，高血压、高血脂、糖尿病等多种慢性疾病患病率逐年增加，老年人在慢性疾病长期缠身的状态下，身体各方面机能逐渐减弱，从而加速了脑梗死的发生，而基因在脑梗死发生过程中的作用被掩盖。而在中青年人中这方面的影响相对较弱，基因的作用相对增强，所以在中青年人中基因对脑梗死发生的影响足以显现出来。本研究结果经过对361例脑梗死患者和379例对照组进行比对，未发现ITGA2B与脑梗死之间的显著关联；而将年龄分为老年人(≥60岁)和非老年人(<60岁)进一步分层分析，结果显示在中青年人中，携带有rs850730 AG基因型的个体发生脑梗死的危险性是GG基因型携带者的1.819倍，rs850730显性遗传模型(AG+AA)携带者发生脑梗死的危险性是GG基因型携带者的1.667倍，既从rs850730位点角度看，ITGA2B基因与脑梗死有显著统计学关联；而在老年人中未发现此结论，进一步控制性别、吸烟，饮酒和BMI因素后，仍无统计学差异。该研究结果与国内已有的一篇研究结果相一致，ITGA2B基因多态性会对GPIIb受体的表达与否或表达量产生影响，从而参与脑梗死的发生，所以ITGA2B基因可能是脑梗死发病过程中的一种易感基因[18～21]。

总之，在黑龙江省中青年人中，ITGA2B基因中的rs850730位点与脑梗死有显著关联，其显性遗传模型(AA+AG)基因型携带者发生脑梗死的危险性显著增加，同时显性模型中ALT水平显著升高。因此，在国内进一步深入探讨ITGA2B其他位点与脑梗死的关联性，将有助于脑梗死遗传发病机制的认识。