Sp1和miR-92b在口腔癌组织中的表达及与其临床病理特征的关系

王晓庚 刘 林 左 健 张非煜 李若萱

近年来，口腔癌病例不断增加，并逐渐趋于年轻化，由于口腔癌患者细胞生长分裂速度较慢，扩散转移晚，往往患者确诊时已处在癌症中晚期，虽然临床上对患者予以外科手术及联合药物治疗可取得令人满意的疗效，但其预后生存情况仍然不乐观[1]。口腔癌患者的，尤其对于已经发生远处转移的患者，治疗仍然十分困难[2-3]。因此，积极探讨预后评估指标具有重要意义，本文探讨Sp1和miR-92b在口腔癌组织中的表达与临床病理特征的关系分析，取得满意效果，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 临床资料

选取我院2014年1月至2018年1月行手术切除的口腔癌组织60例作为研究组；另选取癌旁正常口腔组织60例作为对照组。纳入标准：患者年龄>18岁，口腔癌均经病理及组织学检查确诊，所有病例均具有完整的临床病理资料；排除标准：排除合并其他恶性肿瘤，如胃癌、食管癌、肝癌等，排除全身系统性疾病；研究组男性38例，女性22例；年龄为28～72岁，平均年龄为(63.14±5.18) 岁;肿瘤直径平均为(2.25±0.16)cm。癌旁正常口腔组织均肿瘤边缘距离5 cm以上，平均(6.84±1.12)cm，均经病理证实无肿瘤细胞浸润，男性39例，女性21例，年龄为26～75岁，平均年龄为(63.25±4.92) 岁，两组年龄、性别等基本资料上相比差异无统计学意义，具有可比性(P>0.05)。

1.2 试剂与方法

试剂：显色剂为 DAB(厂家：北京中杉金桥生物技术公司) ，miR-92b inhibitor(厂家锐博生物)兔抗人Sp1单克隆抗体(厂家：北京博奥生物公司)，PV9000 免疫组织化学二抗试剂盒(厂家：上海嵘葳达实业有限公司，生产批号:11719386001)。;Lipofectami-ne TM2000转染试剂盒(Invitrogen)。

采用 SP 法免疫组织化学染色检测口腔癌组织Sp1和miR-92b水平：先采用10%甲醛将组织进行固定后，用石蜡包埋，石蜡切片常规脱蜡至水，抗原热修复，采用山羊血清进行封闭，并滴加一抗、二抗，进行HE、DBA染色，复染，脱水，然后在显微镜下观察。

1.3 阳性判断

癌组织阳性：在肿瘤细胞胞质或胞核中呈现棕褐色或棕黄色颗粒者。癌旁正常口腔组织：0 分：无阳性细胞；1 分：阳性细胞所占比例30.0%以下；2 分：阳性细胞所占比例30.0%或以上；根据阳性细胞表达强弱分为:0 分：未出现着色；1 分：浅黄色或者黄色记为；2分：棕黄色；3分：棕褐色。将两项的评分相乘，0～1分为阴性，2～6分为阳性。

1.4 观察指标

回顾性分析研究对象的临床病例特征。两组Sp1和miR-92b在组织中的表达差异，并比较不同淋巴结转移情况、分化程度及临床分期组织Sp1和miR-92b表达水平；采用Logistic回归分析口腔癌组织中Sp1和miR-92b表达水平与临床病理特征的关系。

1.5 统计学方法

应用SPSS 19.0统计学软件分析，比较计数资料采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组组织中Sp1和miR-92b表达情况比较

Sp1和miR-92b在研究组中的阳性表达率分别为80.00%(48/60)、73.33%(44/60)，明显高于对照组阳性表达率[8.33%(5/60)、11.67%(7/60)]，差异有统计学意义(P<0.05)。如表1所示。

表1 两组组织中Sp1和miR-92b表达情况比较/%

2.2 不同临床病理特征口腔癌组织中Sp1和miR-92b表达情况

口腔癌组织中肿瘤分化类型中～高分化与低～未分化Sp1和miR-92b表达均无统计学意义(P>0.05)；有36例出现淋巴结转移，其中91.67%Sp1表达阳性，86.11%miR-92b表达阳性。40例临床分期Ⅲ+Ⅳ，其中90.00%Sp1表达阳性，85.00%miR-92b表达阳性，差异具有统计学意义(P<0.05)，如表2所示。

表2 不同临床病理特征口腔癌组织中Sp1和miR-92b表达情况/%

注：a为与同组不同分化程度相比，χ2=1.79，1.17，P>0.05；b为与同组淋巴结转移相比，χ2=5.94，7.51，P<0.05；c为与不同临床分期相比，χ2=5.74，8.35，P<0.05。

2.3 Sp1和miR-92b在口腔癌组织中的表达与其临床病理特征的关系

采用Logistic回归分析显示，口腔癌组织中Sp1和miR-92b表达水平与临床病理特征有关(P<0.05)，如表3所示。

表3 口腔癌患者组织中Sp1和miR-92b水平与临床病理特征的关系

3 讨论

口腔癌是1种由多种因素参与的头颈部较常见的恶性肿瘤之一，而其中主要影响因素包括饮酒、吸烟、营养不良、病毒感染、局部刺激惯和饮食习等，其中饮酒和吸烟的危险性最大[4-6]。最近有学者提出，口腔癌的发生、发展、转移及预后等各个方面与免疫相关的细胞因子及其相关的调节因子密切相关[7]。

本研究结果临床分期越晚和淋巴结转移Sp1和miR-92b越呈现高阳性表达，Sp1和miR-92b水平表达与口腔癌患者临床病理特征密切相关。Sp1是广泛存在于细胞核中的转录因子中的一员，在肿瘤的发生发展过程中Sp1起着重要的调控作用，其在肿瘤患者中均有较高的阳性表达率[8-9]；microRNA(miRNA) 是1种以特异的序列调控基因表达的小非编码RNA，其参与细胞增殖、分化、凋亡等多种细胞生命活动过程[10]。已有研究报道，miR-92b在肿瘤细胞中表达显著高于正常，其扮演着致癌基因角色，且表达越高肿瘤的浸润性和转移性越强[11]。本研究结果发现口腔癌组织Sp1阳性表达率80.00%(48/60)和miR-92b阳性表达率73.33%(44/60)均明显高于癌旁正常口腔组织，与上述结论一致。侵袭转移是导致恶性肿瘤难以治愈的关键生物学特性之一[12]。既往有研究表明[13]，异常表的炎症因子达会使同源细胞的致癌潜能提高，也使会癌细胞的转移能力提高。陈峰等[14]研究发现，通过抑制Sp1和miR-92b水平可抑制癌细胞的生成和转移，同时使癌细胞的侵袭转移能力降低。

综上所述，Sp1和miR-92b在口腔癌组织中的阳性表达率高，其表达水平与肿瘤分期及淋巴结转移密切相关，检测Sp1和miR-92b对口腔癌预后的评估具有重要意义。