商洛桔梗茎叶中桔梗皂苷D动态研究

赵志新 王通 潘苗

摘要：采用高效液相色谱法（HPLC）分析商洛种植的两年生桔梗（Platycodon grandiflorum）茎和叶在不同月份（5—10月）中桔梗皂苷D的含量变化，以探究主要次生代谢产物在桔梗茎叶中积累量的变化。结果表明，5—10月桔梗皂苷D的含量在茎中比较稳定，9月份达到最大值;而叶中桔梗皂苷D含量在7—8月份含量较高，10月份含量急剧下降;叶中桔梗皂苷D平均含量（0.614%）大于茎中（0.257%），表明商洛地区所种植桔梗幼嫩茎叶也可入药，其采收期应在8月份。通过对不同月份及茎叶中桔梗皂苷D含量的研究，可为确定商洛桔梗入药部位及采收期提供参考，同时也可为桔梗质量控制及规范化种植提供借鉴。

关键词：桔梗（Platycodon grandiflorum）;HPLC;桔梗皂苷D;不同月份;茎叶

中图分类号：S567.23+9         文献标识码：A

文章编号：0439-8114（2019）17-0116-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.17.031           开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Abstract： High performance liquid chromatography （HPLC） was utilized to analyze the variations of Platycodin D content in stems and leaves in Platycodon grandiflorum （Jacq.） A. DC.， which were collected from May to October from Shangluo area， and the study was aimed to explore the variations of main secondary metabolites in stems and leaves. The results showed that the contents of Platycodin D were stably in the stems from May to October， and the peak was reached in September; the contents of Platycodin D were highly in July and August， yet the content decreased dramatically in October. Furthormore， the average content of Platycodin D in leaves （0.614%） was higher than in stems （0.257%）. Therefore， the young stems and leaves also could be used as medicines， and their harvest time should be August in Shangluo. By investigating the variations of Platycodin D content in stems and leaves in different months， the study can provide references for medicinal parts and harvest time and standardization production in P. grandiflorum in Shangluo.

Key words： Platycodon grandiflorum; HPLC; platycodin D; different months; stems and leaves

桔梗（Platycodon grandiflorum）为桔梗科桔梗屬多年生双子叶植物，为2015年版《中国药典》收载品种，主要以其根部入药，亦可食用[1]。桔梗为常用的且市场需求量大的中药材，中国大部分地区均有分布，常见于河南、安徽、吉林、山东、四川、陕西等地，在商洛广泛种植，被誉为“五大商药”之一[2]。桔梗具有开宣肺气、祛痰排脓之功效，其主要成分为三萜皂苷类化合物，目前发现有70余种皂苷类成分，已经分离得到18种三萜皂苷，以及桔梗皂酸A甲酯，远志皂苷D、D2等，桔梗具有显著的镇咳祛痰、抗肿瘤、抗氧化及免疫增强作用，此外还有抗炎、防治心脑血管疾病等作用[3，4]。

商洛种植的桔梗种源大多为当地品种，桔梗的生长受生境条件（气候、土壤条件等）影响较大[5，6]，桔梗除了主要以根部入药以外，茎叶药理研究也有所开展[7]，对于商洛种植桔梗，特别是茎叶中桔梗皂苷积累缺乏相关的研究。因此本试验采集5—10月商洛学院药园基地种植的桔梗，通过高效液相色谱法（HPLC）测定桔梗茎和叶中桔梗皂苷D的含量，以期对不同生长月份及不同部位桔梗药材品质进行评价，为确定商洛桔梗药材利用及采收期提供借鉴，同时也为桔梗质量控制及规范化种植提供借鉴。

1  材料与方法

1.1  材料

桔梗种植于商洛学院GAP中心药材基地，2018年5—10月每月采集两年生的桔梗样品，将收集的桔梗材料按采集时间及部位进行分组（表1）。

1.2  仪器与试剂

岛津LC-20A型液相色谱仪，二元泵、UV检测器、自动进样器;KQ-250型超声波清洗器;FA1104型电子天平;粉碎机。

桔梗皂苷D对照品购自中国食品药品检定研究院;乙腈为德国Merck公司的色谱级产品;磷酸、甲醇购于天津福晨化学试剂有限公司，均为分析纯;水为超纯水;其他试剂均为分析纯。

1.3  方法

1.3.1  色谱条件  检测波长210 nm;色谱柱为大连依利特Hypersil C18ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）;柱温30 ℃;流速1.0 mL/min;流动相A为0.05%磷酸水溶液;B为纯色谱乙腈。梯度洗脱程序：0～20 min， 96%～85% A;20～35 min，85%～77% A;35～40 min，77%～72% A;40～55 min，72% A;55～65 min，72%～60% A;65～80 min，60%～10% A;80 min以后，10% A，记录时间90 min。

1.3.2  对照品溶液的制备  精密称取桔梗皂苷D对照品，以甲醇为溶剂制成1 mg/mL的标准品溶液，以微孔滤膜（0.45 μm）过滤，备用。

1.3.3  供试品溶液的制备  取桔梗药材样品粉末2.0 g，过60目筛，然后加入50 mL体积分数为50%的甲醇，溶解，称定其重量，超声提取30 min;提取结束后放至室温，称重，再以甲醇补足损失的重量，摇匀，过滤，取滤液，用微孔滤膜（直径0.45 μm）过滤，备用。

分别精密吸取对照品及供试品溶液20 μL，记录90 min的色谱图。对照品溶液显示在54 min出现桔梗皂苷D峰（图1）。图2为供试品103B溶液色谱图，显示在54 min出现桔梗皂苷D峰。

1.3.4  标准曲线  取对照品溶液分别稀释至10、100、200、500、800和1 000 μg/mL，取20 μL进行测定，按上述条件测定峰面积。以进样量X（μg）对峰面积Y进行回归，得回归方程为Y=45 697X-29 257，R2=0.983 7，表明进样量在10～800 μg/mL有良好的线性关系。

2  结果与分析

2.1  不同月份桔梗茎中桔梗皂苷D含量

图3为5—10月桔梗茎中桔梗皂苷D的含量。由图3可以看出，5—10月茎中桔梗皂苷D的含量整体比较稳定，在0.223%～0.298%变动，平均含量为0.257%，9月达到最大值，0.298%。

2.2  不同月份桔梗叶中桔梗皂苷D含量

图4为5—10月桔梗叶中桔梗皂苷D的含量，由图4可以看出，7—8月份含量较高，分别为0.915%、0.857%，两侧的月份含量递减，特别是10月达到极小值0.109%，此时桔梗叶片已逐渐枯萎，表明桔梗皂苷D含量随着叶片枯萎而快速降低。桔梗叶中桔梗皂苷D含量整体较高，5—9月份均值为0.715%。

3  小结

试验使用HPLC法测定商洛地区种植的不同月份（5—10月）的两年生桔梗茎和叶中桔梗皂苷D的含量。结果显示，桔梗皂苷D的含量在茎中比较稳定，9月份达到最大值;而叶中桔梗皂苷D含量在7—8月份含量极高，10月份随着叶片枯萎含量急剧下降。同时可以看出叶中桔梗皂苷D平均含量（0.614%）大于茎中（0.257%）。申茹等[8]测定山东不同区域桔梗根中桔梗皂苷D的含量范围为0.38%～0.16%，与商洛桔梗茎中结果基本一致，却低于商洛桔梗叶中的含量，显示桔梗药材品质受所种植区域环境影响很大，要加大桔梗的道地性研究，同时也与入药部位有很大的关系。

据此，建议商洛地区所种植桔梗幼嫩茎叶也可入药，其采收期应在8月，此时茎叶有效成分含量都很高。通过對不同生长期及茎、叶中桔梗皂苷D含量的研究，为确定商洛桔梗入药部位及采收期提供参考，同时也为桔梗质量控制及规范化种植提供借鉴。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2015.

[2] 张晓虎.秦岭“五大商药”施肥技术研究综述[J].陕西农业科学，2010，56（4）：94-97.

[3] 刘  群，李  伟，郑毅男，等.桔梗中三萜皂苷类成分及药理活性研究进展[J].吉林农业大学学报，2013，35（2）：221-228.

[4] 左  军，尹柏坤，胡晓阳.桔梗化学成分及现代药理研究进展[J].辽宁中医药大学学报，2019，21（1）：113-116.

[5] 王新军，陈明彬，邓寒霜.基于生境条件的商洛桔梗道地性解析[J].商洛学院学报，2014，28（4）：8-11，53.

[6] 王新军，陈明彬，吴  珍.商洛桔梗基于GIS的适宜气候区划及分区评价[J].陕西农业科学，2014，60（8）：55-58.

[7] 田雨弘，高  鸽，刘  颖，等.桔梗茎叶皂苷对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及机制研究[J].毒理学杂志，2016，30（1）：46-48.

[8] 申  茹，徐英辉，莫颖华，等.山东省不同区域桔梗药材中桔梗皂苷D的测定[J].现代中药研究与实践，2018，32（4）：11-13.