抑制素α、A103、钙网膜蛋白联合检测在肾上腺皮质腺瘤与肾上腺良性嗜铬细胞瘤鉴别诊断中的应用价值

霍亚杰，康志强，何丽，罗方，许玲玉,毛雨

(郑州大学附属郑州中心医院内分泌科，河南 郑州 450000)

肾上腺肿瘤为临床常见肿瘤类型，根据其组织起源可分为肾上腺髓质肿瘤与肾上腺皮质肿瘤[1-3]。 肾上腺皮质腺瘤(Adrenal cortical adenoma，ACA)是一种肾上腺皮质良性上皮性肿瘤，按照有无分泌功能可分为功能性与非功能性肿瘤，具有较高发病率，病变特点为瘤细胞细胞质内脂质较为丰富，形成索状、巢状并伴有窦隙样结构及丰富血管[4-6]。肾上腺良性嗜铬细胞瘤 (Adrenal benign phaeochromocytoma，ABP)为临床常见肾上腺髓质良性肿瘤，瘤组织形态类似ACA，尤其是瘤细胞脂质变性时，细胞外观呈透明状，与ACA相似，二者鉴别诊断难度较大[7-9]。现阶段临床鉴别ACA、ABP仍以组织化学技术为主，但传统组化方法银染、嗜铬反应缺乏特异性，多已弃用。随着免疫组化技术的广泛应用，用于肾上腺肿瘤的免疫标记种类较多，临床上通常联合采用多种免疫标记诊断鉴别ACA、ABP[10-12]。本研究通过测定肾上腺髓质、皮质肿瘤组织中抑制素α(Inhibin α)、抗黑色素抗原单克隆抗体(A103)、钙网膜蛋白(Calretinin)表达情况，旨在探究其在ACA、ABP鉴别诊断中的应用价值。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2010年4月-2017年8月我院病理科62例手术存档肾上腺标本，其中ACA标本28例，男10例，女18例；年龄12～70岁，平均48.62±9.12 岁；肿瘤最大直径 1～10 cm，平均 3.89±0.56cm；其中8例伴Cushing综合征，17例伴Conn综合征；3例无功能者；ABP标本28例，男12例，女 16例；年龄 12～71 岁，平均 48.96±9.47 岁；肿瘤最大直径 8～13 cm，平均 10.69±2.30cm；正常肾上腺标本6例，男2例，女4例；年龄15～68岁，平均48.96±9.47岁。本研究经我院伦理协会审核同意。

1.2 免疫组化法 62例手术存档肾上腺标本均通过中性福尔马林固定 (体积分数为10%)，石蜡包埋，连续切成3 μm厚薄片，采用MaxVision两步法进行免疫组化操作，操作步骤均按照说明书进行；阳性对照选择已知阳性切片，选择PBS代替一抗作阴性对照，研究标本、对照切片均于同一条件下染色。 结果判定：Inhibin α、A103、Calretinin 均表达于细胞质。综合判断染色强度及高倍镜下阳性细胞百分率。(1)染色阳性为细胞质呈现为浅黄色至棕褐色，按染色强度评分：0分：无染色；1分：浅黄色；2分：棕黄色；3分：棕褐色。(2)高倍镜下随机选取5个视野阳性细胞数之平均数即为该例标本阳性细胞数结果，根据阳性细胞百分比评分：0分：≤5%；1分：5%＜阳性细胞百分比≤25%；2分：25%＜阳性细胞百分比≤50%；3分：50%＜阳性细胞百分比≤75%；4分：＞75%。根据染色强度与阳性细胞百分率评分之和判定阳性，阴性(-)：0分；弱阳性(+)：2～3 分；阳性(++)：4～5 分；强阳性(+++)：6～7 分，其中弱阳性、阳性及强阳性均按照阳性计数。

2 结果

2.1 不同肾上腺组织中 Inhibin α、A103、Calretinin表达情况 ACA组织中 Inhibin α、A103、 Calretinin阳性表达率均较ABP高(P＜0.05)；肾上腺组织中 Inhibin α、A103、Calretinin 阳性表达与 ACA 患者临床特征无关(P＞0.05)。见表1、表2。

表1 不同肾上腺组织中Inhibin α、A103、Calretinin表达情况

续表1

表2 Inhibin α、A103、Calretinin表达情况与ACA患者临床特征关系

2.2 Inhibin α、A103、Calretinin 单一及联合诊断价值 Inhibin α、A103、Calretinin 联合鉴别诊断 ACA、ABP敏感性 96.43%、准确度 92.86%均较A103、Calretinin 单独鉴别诊断高，P＜0.05。 见表 3。

3 讨论

Inhibin α 系转化生长因子 β(TGF-β)超家族成员，是一种二聚体蛋白质激素，由α、β两个亚单位组成，其中Inhibin α仅一种分子结构，位于人体染色体2q33，相对分子量18000，多由睾丸Sertoli细胞、卵巢粒层细胞合成，对垂体促性腺激素合成、分泌具有明显抑制作用，以往多用于鉴别诊断卵巢颗粒细胞瘤和癌[13-15]。近年来，随着临床研究的不断深入，发现Inhibin α可表达于正常肾上腺皮质、皮质肿瘤及皮质结状增生中，且肾上腺皮质中可检测出该激素mRNA。本研究中，Inhibin α在正常肾上腺皮质中阳性表达率高达100%，且正常肾上腺皮质中Inhibin α表达多以束状带内侧、网状带为主，而束状带外侧及球状带基本不表达。ACA组织中Inhibin α阳性率85.71%，多表现为中等强度，而在ABP组织中阳性率仅3.57%，与孔璐璐等学者[16]研究结果基本一致。A103为抗黑色素原单克隆抗体，多用于伴有黑色素细胞分化的肿瘤与恶性黑色素瘤诊断中，同时还可用于产生类固醇激素肿瘤及具有血管周上皮样细胞分化肿瘤的鉴别诊断。早在1998年，国外学者Busam K J等[17]即报道了A103在类固醇细胞及肾上腺皮质肿瘤中的免疫反应，同时还表示，其在肾上腺皮质肿瘤中阳性表达率较高，而在ABP及其他上皮性肿瘤中均为阴性，提示A103可用于诊断肾上腺皮质肿瘤。随着临床上对A103研究的不断深入，孔璐璐等学者表明ACA组织中A103阳性表达率仅58.3%，仅可作为ACA辅助诊断指标。本研究中，ACA组织中A103阳性表达率虽为50.00%，但A103在ABP组织中均无表达，可见A103在ACA、ABP鉴别诊断中仍具有较高价值。此外，A103阳性表达与ACA患者临床特征并无相关性。Calretinin系激动蛋白C超家族，是一种具有EF手型结构的细胞内钙结合蛋白，通常用于标记卵巢性索间质、间皮、神经的肿瘤，随着临床研究的不断深入，国外学者指出，Calretinin在肾上腺皮质肿瘤细胞中同样处于高阳性表达状态[18]。本研究中ACA组织中阳性表达率为71.43%，且多为阳性，而ABP组织中仅3例为阳性表达，且均为弱阳性。因此，Calretinin可用于鉴别诊断ACA、ABP。同时本研究表明，Calretinin阳性表达与患者临床病理特征无关。 Inhibin α、A103、Calretinin 联合鉴别诊断ACA、ABP敏感性96.43%、准确度92.86%均较A103、Calretinin单独鉴别诊断高，提示联合采用Inhibin α、A103、Calretinin 鉴别诊断 ACA、ABP，可进一步提高诊断敏感性及准确度。

表3 Inhibin α、A103、Calretinin单一及联合诊断价值

综上所述，Inhibin α、A103、Calretinin 联合应用于ACA、ABP鉴别诊断中，诊断敏感性及准确度较高，值得临床推广应用。