苗字叶,姚亚亚,刘阳星月,田博宇,李晓洋,李慧静,*
(1.河北农业大学食品科技学院,河北 保定 071000;2.沧州市农业技术推广站,河北 沧州 061000)
小麦加工后的副产品麸皮约占加工小麦质量的1/5左右,而且小麦麸皮中蛋白质、脂肪、糖类、纤维素、维生素和矿物质的含量比面粉高出几十倍[1],但是目前小麦麸皮市场利用率和经济效益较低,这是对资源的极大浪费[2]。
麦麸具有多种生理活性[3],麦麸中富含的膳食纤维能够促进肠道蠕动,治疗二型糖尿病[4];麦麸中的阿拉伯木聚糖能明显降低体内胆固醇的含量[5],防止动脉硬化;麦麸有清除体内有害离子亚硝酸根的作用[6];麦麸中酚类物质具有抗氧化能力,Alves等[7]在可食用涂料配方中加入阿魏酸,结果发现阿魏酸可以延长鲜切苹果的保质期,说明阿魏酸在延长食品的保质期方面有一定的应用市场;段元霄等[8]通过动物实验得出麦麸中的阿魏酰低聚糖能有效地提高大鼠血浆及组织中抗氧酶的活性,有效地改善了机体抗氧化能力的降低;Choi等[9]研究发现麦麸影响全身和肠道免疫功能,可作为一种免疫功能食品。麸皮精深加工成本低,且精深加工麦麸销售价格适中,消费对象广泛,因此,研发适合现代人群口味的全麦食品具有可行性。虽然传统的热加工技术能够灭活麦麸中的脂肪酶类,改善麦麸的部分功能特性,但也会对食品品质如风味、色泽、营养成分、质地以及功能特性产生很大的破坏[10],影响加工产品的质量。“非热加工技术”因处理温度低、能够保留及改善食品原有品质的优点,成为了目前食品研究领域的热点。
超高静压处理食品的过程是一个纯物理过程,它和传统食品加热处理工艺机制完全不同。高压过程中,食品在液体介质中体积被压缩,导致食品成分中非共价键形成或破坏,食品中生物高分子物质变性糊化,从而改善食品品质[11]。但在此过程中,超高静压一般只破坏大分子的非共价键,而对于形成维生素、风味物质等小分子物质的共价键无任何影响[12],可以更好地保持食品的天然风味、营养价值及色泽[13]。国内外对超高静压改善膳食纤维功能特性研究较少,Mateos-Aparicio等[14]研究发现超高压处理可显著地增加豆渣膳食纤维中可溶性膳食纤维(soluble dieary fibre,SDF)的含量;Xie Fan等[15]发现超高静压处理改变了紫薯膳食纤维的单糖组成和结构特征。李梦琴等[16]研究发现超高压可以增大麦麸的持水力、膨胀力,且微粒表面出现较多的片层状结构。
本实验旨在探讨超高静压对小麦麸皮持油力、清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基能力、吸附胆固醇能力、清除亚硝酸根能力等功能性质的影响,研究出改善麦麸功能性质的最优超高静压条件,为开发出具有减肥、抗衰老功效的麦麸产品提供理论参考。
小麦麸皮(膳食纤维质量分数37.5%、蛋白质量分数17.94%、脂肪质量分数2.26%、灰分质量分数5.16%)、新鲜鸡蛋、植物油均为市售;热稳定α-淀粉酶(酶活力≥20 000 U/mL)、淀粉葡萄糖苷酶(酶活力≥100 000 U/mL) 上海金穗生物科技有限公司;蛋白酶(酶活力1.5 AU/g) 诺维信(中国)生物技术有限公司;硝酸银、氢氧化钠、盐酸、亚硝酸钠、乙醇、DPPH、冰乙酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、邻苯二甲醛等均为分析纯试剂。
HPP600MPa/1-10L超高静压设备 包头科发高压科技责任有限公司;L3660D低速离心机 上海知信实验仪器技术有限公司;101-0AB电热鼓风干燥箱 奥豪斯仪器上海有限公司;KDN-08C型消化炉 浙江托普仪器有限公司;XL-100高效节能快速一体马弗炉 鹤壁亿欣仪器仪表有限公司;AK-4008中药粉碎机 温岭市奥力中药机械有限公司;752N型分光光度计 上海仪电分析仪器有限公司;SU8010型扫描电子显微镜 日本日立精密科学仪器有限公司;Nicolet iS10型傅里叶变换红外光谱仪 美国Thermo Scientific仪器公司。
1.3.1 超高静压改性
1.3.1.1 小麦麸皮预处理
取一定量的小麦麸皮,用水冲洗,烘干,再将麦麸过40、50、60 目筛,得到预处理麦麸粉。
1.3.1.2 超高静压处理条件单因素试验
取200 g麦麸粉按照质量的20%加水混合均匀,将得到的悬浊液转移至30 cm×20 cm的铝箔袋中,利用真空包装机进行封口,放入超高静压设备进行超高静压处理。超高静压处理腔水浴循环装置热至所需温度为20~25 ℃,体积为10 L,放置20 min,取出样品真空冷冻干燥并装袋备用,标记为未处理样品。
取200 g麦麸粉按照一定质量分数加水混合均匀,将得到的悬浊液转移至30 cm×20 cm的铝箔袋中,利用真空包装机进行封口,放入超高静压设备进行超高静压处理。超高静压处理腔水浴循环装置加热至所需温度为20~25 ℃,体积为10 L,升压速率为400 MPa/min,降压速率为400 MPa/min,升压至所需压强,保压时间达到后机器自动迅速卸压。处理后的样品真空冷冻干燥并装袋备用,按照各处理条件做好标记。
控制处理时间20 min、麦麸质量分数20%、压强400 MPa,改变麦麸粒度分别为40、50、60 目;控制压强400 MPa、麦麸质量分数20%、麦麸粒度40 目,改变处理时间分别为15、20、25 min;控制处理时间20 min、麦麸质量分数20%、麦麸粒度40 目,改变压强分别为200、300、400、500 MPa;控制处理时间20 min、压强400 MPa、麦麸粒度40 目,改变麦麸质量分数分别为15%、20%、25%。
1.3.2 超高静压改性后麦麸基本性质的测定
1.3.2.1 持水力的测定
取未处理的样品和经不同改性条件处理的样品各1 g于100 mL离心管中,加入50 mL蒸馏水,电磁搅拌30 min,3 500 r/min离心20 min,倾倒法弃去上清液,称残留物质量[17]。按式(1)计算持水力。
式中:m1为麦麸样品干质量/g;m2为残留物的总质量/g。
1.3.2.2 持油力的测定
取未经处理的样品和经不同改性条件处理的样品各1 g于100 mL离心管中,加入20 g植物油,振荡均匀,室温下静置24 h,3 500 r/min离心20 min,倾倒法弃去上清液,擦干离心管内外壁所附着的油脂和水分,称残留物质量[17]。按式(2)计算持油力。
式中:m1为麦麸样品干质量/g;m2为残留物的总质量/g。
1.3.2.3 SDF的测定
SDF的测定方法参见杨晓莉等[18]中酶-重量法。
1.3.2.4 阳离子交换能力的测定
称取一定量的样品置于烧杯中,注入0.1 mol/L HCl,浸泡24 h后过滤,用蒸馏水洗去过量的酸,用体积分数10% AgNO3溶液滴定滤液,直到不含氯离子为止(无白色沉淀产生)。将滤渣用微热风干燥后置于干燥器中备用。准确称取0.25 g干滤渣加入到100 mL质量分数5% NaCl溶液中,磁力搅拌器搅拌均匀后,每次用0.01 mol/L NaOH溶液滴定,记录对应的pH值,直到pH值变化很小为止,并根据得到的数据作V(NaOH)-pH关系图[19]。
1.3.2.5 吸附亚硝酸根能力的测定
标准曲线的绘制:准确称取0.100 0 g干燥后的亚硝酸钠,配制成质量浓度为5 μg/mL的亚硝酸钠标准使用液。取9 支50 mL带塞比色管,按表1分别加入亚硝酸钠标准使用液。于9 支比色管中分别加入2 mL对氨基苯磺酸溶液(4 g/L),混匀,静置3~5 min后各加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液(2 g/L),加水至25 mL,混匀,静置15 min,在538 nm波长处测吸光度,绘制标准曲线[20]。
表1 亚硝酸盐标准曲线试剂添加量Table 1 Preparation of nitrite standard curve
吸附亚硝酸根能力的测定:准确称取1.0 g小麦麸皮于200 mL夹层烧杯中,加入50 mL亚硝酸钠标准使用液,搅拌均匀,调节体系pH值为2.0(模拟人体胃液环境下效果比较明显)[21],37 ℃电磁搅拌2 h,于3 500 r/min下离心20 min,吸取2 mL上清液,加入2 mL对氨基苯磺酸溶液,混匀,静置3~5 min后加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液,加水至25 mL,混匀,静置15 min,在538 nm波长处比色。对照标准曲线换算出吸附后上清液中亚硝酸根的含量,按式(3)[20]计算亚硝酸根的吸附量。
式中:m为麦麸样品干质量/g;m0为吸附前亚硝酸根质量/mg;m1为吸附后亚硝酸根质量/mg。
1.3.2.6 清除DPPH自由基能力的测定
样品管中加入0.5 mL待测样品溶液,2.5 mL DPPH溶液,空白管和对照管分别用蒸馏水和体积分数95%乙醇溶液替代DPPH溶液,避光条件下反应30 min,515 nm波长处测定吸光度[22],按式(4)计算DPPH自由基清除能力。
式中:A0为空白管吸光度;A1为对照管吸光度;A2为样品管吸光度。
1.3.2.7 吸附胆固醇能力的测定
以总胆固醇质量为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线。吸附胆固醇能力的测定:取鲜鸡蛋的蛋黄并称质量,用9 倍质量蒸馏水充分搅打成乳液。准确称取2.0 g小麦麸皮膳食纤维于100 mL夹层烧杯中,加入50 g稀释蛋黄液,搅拌均匀,调节体系pH值为7.0(模拟人体小肠环境效果比较明显)[23],37 ℃振荡2 h,于4 000 r/min下离心20 min,吸取1 mL上清液,用体积分数90%的醋酸稀释5 倍,取0.1 mL,采用邻苯二甲醛作显色剂,在550 nm波长处比色。对照标准曲线换算出原蛋液中胆固醇含量和吸附后上清液中胆固醇含量,按式(5)[24]计算胆固醇的吸附量。
式中:m为麦麸样品干质量/g;m0为吸附前胆固醇质量/mg;m1吸附后上清液中胆固醇质量/mg。
1.3.2.8 麦麸中脂肪酶活力的测定
称取麦麸样品1.00 g,加入少量石英砂和1 mL植物油,混合均匀后加入5 mL pH 7.4的磷酸盐缓冲液,研磨至糊状,转移至具塞锥形瓶中,用5 mL蒸馏水少量多次洗涤研钵,洗液并入具塞锥形瓶。36 ℃培养箱保温24 h,取出加入乙醇-乙醚(4∶1,V/V)混合液50 mL,摇匀静置1~2 min后过滤,弃去初滤液,移取25 mL滤液置于锥形瓶中,加入3~5 滴酚酞指示剂,用0.05 mol/L KOH溶液滴定至微红色且30 s不褪色,记录消耗KOH溶液的体积V1[25],按式(6)计算脂肪酶活力。
式中:V1为消耗KOH溶液的体积/mL;V0为空白消耗KOH溶液的体积/mL;c为KOH溶液的浓度/(mol/L);m为麦麸样品干质量/g;ω为样品水分质量分数/%。
1.3.3 超高静压改性后麦麸超微结构的观测
取适量麦麸样品固定于观察台上,采用戊二醛将麦麸样品进行固定,再用溅射镀膜法对样品表面进行镀金,将其置于扫描电子显微镜下观测形态。
1.3.4 超高静压改性前后麦麸SDF和IDF的傅里叶变换红外光谱分析
选取超高静压改性条件为麦麸粒度40 目、处理时间20 min、400 MPa、麦麸质量分数20%的麦麸样品提取麦麸SDF和不溶性膳食纤维(insoluble dietary fiber,IDF)。
分别称取改性前后1.0 g麦麸样品,分别经热稳定α-淀粉酶、中性蛋白酶、淀粉葡萄糖苷酶酶解,之后水煮灭酶,滤液用4 倍体积的体积分数95%乙醇溶液醇沉10 h、离心、干燥得SDF,滤渣用热水多次洗涤、干燥得IDF。
分别称取改性前后的麦麸SDF和IDF,在红外灯下将麦麸样品与KBr粉末以2∶48的质量比混匀并充分研磨,利用真空压片机进行压片,置于傅里叶变换红外光谱仪中进行扫描,在4 000~400 cm-1的光谱范围内进行扫描测定,绘制傅里叶变换红外光谱图。
数据分析采用SPSS 17.0软件,选用Duncan’s检验比较多组实验数据之间的差异,P<0.05表示差异显著,采用Origin 9.1软件作图。
由图1可知,超高静压改性显著地增加了麦麸的持水力和持油力,不同麦麸粒度之间差异不明显,说明麦麸粒度在40~60 目范围内,超高静压对麦麸吸附力影响差异不明显。超高静压显著增大了胃液条件下麦麸对亚硝酸根的清除能力,但是随着麦麸粒度的减小,清除能力降低。改性麦麸的DPPH自由基清除率降低,这可能是麦麸中的多酚类物质受到了破坏,不同粒度麦麸的抗氧化活性与多酚含量呈正相关,麦麸中阿魏酸主要为结合多酚,且随着粒度的减小多酚含量显著降低,这和王小平等[26]的研究结论一致。综上可知,粒度对麦麸中的多酚及抗氧化活性有显著影响。超高静压处理增大麦麸中SDF质量分数,但随着粒度的减小,SDF质量分数降低,40 目时SDF质量分数最高。超高静压处理麦麸后阳离子交换能力发生了改变,图1C中曲线越陡峭表示阳离子交换能力越强,40 目时最有利于影响消化道内的渗透压,王跃等[19]研究得出,为体内呈现一个缓冲能力相对较强的环境有利于消化吸收。随着粒度的增加,吸附胆固醇能力和脂肪酶活力都是先增加后减小,这可能是因为随着粒度的增大,超高静压对麦麸结构产生了一定影响;但当粒度过大时,由于淀粉等物质的包埋会影响压力对膳食纤维的破坏,而当粒度更小时,大分子物质的长链断裂,短链含量增加,可溶性组分含量增加,物料的组分发生变化,使得物料对水、油和胆固醇的束缚能力降低[19]。40 目麦麸的脂肪酶活力最低,但50 目麦麸的吸附胆固醇能力较高,综合考虑在40 目下,亚硝酸根清除能力、SDF质量分数、阳离子交换能力较好,脂肪酶活力较低,在50 目下,持水力、持油力、DPPH自由基清除能力和吸附胆固醇能力较好,但是麦麸粒度对麦麸功能性质影响较小,40 目和50 目粒度差别不是很明显,可根据需要改善的功能指标选择最适粒度。
图1 不同麦麸粒度对超高静压改性麦麸功能性质的影响Fig. 1 Effect of particle size on functional properties of HPP modified wheat bran
图2 超高静压不同时间处理对麦麸功能性质的影响Fig. 2 Effect of pressure holding time on functional properties of HPP modified wheat bran
由图2可知,随着超高静压处理时间的延长,麦麸的持水力和持油力之间无明显变化,这是因为当达到一定处理时间时,超高静压已经基本破坏了麦麸的结构;亚硝酸根清除率先增加后降低再增加,DPPH自由基清除率逐渐降低。超高静压可使膳食纤维生物大分子结构发生改变,增加SDF的含量[27],SDF在人体内的生理活性明显高于IDF,并有较强的调节糖类和脂类代谢的生理功能,可以调节人体内含量过高的胆固醇,预防心血管疾病,SDF含量高有利于更好地发挥麦麸的生理功能[17];阳离子交换能力在20 min时最强,有研究表明一些阳离子交换能力较强的膳食纤维,能在一定程度上破坏或分解脂质的乳化体系,减少人体对胆固醇以及脂肪的吸收[28]。随着时间的延长,压力破坏了维持酶活性中心的非共价键,导致酶发生解离,酶活力降低[29]。吸附胆固醇能力随着时间的延长逐渐增加。在15 min时持水力和DPPH自由基清除率较高,在20 min时持油力、SDF质量分数和阳离子交换能力较好,在25 min时亚硝酸根清除率、吸附胆固醇能力较好,脂肪酶活力较低。
图3 超高静压不同压强处理对麦麸功能性质的影响Fig. 3 Effect of pressure on functional properties of HPP modified wheat bran
由图3可知,随着超高静压处理压强的增大,持水力和持油力都逐渐增加,400 MPa和500 MPa已经没有显著差异,相对达到最高;随着压强的增大,SDF质量分数先增加后减少,有研究采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器对豆渣进行碳水化合物分析,发现超高静压处理纤维可以增加可溶性碳水化合物的含量[30]。亚硝酸根清除率在300 MPa时达到最高,DPPH自由基清除率在400 MPa时明显下降,这和潘芳[31]的研究结果一致;阳离子交换能力曲线在400 MPa时最陡峭,说明此时阳离子交换能力最强,其他处理之间无明显差异;随着处理压强的增大,麦麸中脂肪酶活力先降低后增加,这是由于麦麸中脂肪酶属于蛋白质,随着压强的增大,蛋白质结构受到了破坏,导致麦麸中脂肪酶活力降低,Eisenmenger等[32]研究得出高温高压可以使脂肪酶活力提高;麦麸脂肪酶活力在400 MPa时最低,500 MPa显著升高,脂肪酶活力较高不利于麦麸保存。胆固醇吸附能力在超高静压处理后显著增强,且随着压强的增加先降低后升高。在300 MPa时,亚硝酸根清除率和DPPH自由基清除率较高,在400 MPa时,持油力、SDF质量分数及阳离子交换能力较好,脂肪酶活力较低,在500 MPa时持水力和吸附胆固醇能力较好。
超高静压显著地提高了麦麸的持水力,这和李梦琴等[33]的研究结果一致,但是不同改性麦麸质量分数对持水力影响差异不明显。随着麦麸质量分数的增加,SDF质量分数先增加后减少,在麦麸质量分数20%时SDF质量分数最高,超高静压处理后DPPH自由基清除能力显著降低,但随着麦麸质量分数的增加逐渐增强,亚硝酸根清除率在麦麸质量分数15%时最高;不同麦麸质量分数对阳离子交换能力无明显影响;脂肪酶活力随着麦麸质量分数的增加先降低后增加,麦麸质量分数在20%时脂肪酶活力最低,在麦麸质量分数为25%时,吸附胆固醇能力最强。在麦麸质量分数15%时,亚硝酸根清除率最高;在麦麸质量分数20%时,持油力、SDF质量分数、阳离子交换能力最高,脂肪酶活力最低;在麦麸质量分数25%时,持水力、吸附胆固醇能力和DPPH自由基清除率最高。
图4 不同麦麸质量分数对超高静压改性麦麸功能性质的影响Fig. 4 Effect of wheat bran concentration on functional properties of HPP modified wheat bran
图5 超高静压改性前(A)、后(B)麦麸的扫描电子显微镜图Fig. 5 Scanning electron micrograph of wheat bran before (A) and after (B) HHP modification
从图5结果可看出,在相同的放大倍数下,超高静压改性前后麦麸具有不同形态的微观结构。超高静压改性后的麦麸结构疏松,孔隙增多增大,样品呈现片层状,颗粒表面变得粗糙,呈蜂窝状,由很多的小颗粒聚集在一起形成,这种结构使水分更容易渗入并且使其可以吸收更多的水分。结构变疏松可以使更多的亲水基团外露而增加物料与水、油等物质的接触面积,这与实际测定的改性后麦麸样品的持水力、持油力及SDF质量分数等性质增强有良好的相关性。
图6 超高静压改性前后麦麸SDF的傅里叶变换红外光谱图Fig. 6 FTIR spectra of wheat bran SDF before and after HHP modification
经过超高静压处理的麦麸SDF的傅里叶变换红外光谱如图6所示。在3 300~3 500 cm-1内出现较强的宽展圆滑的吸收峰是O—H的伸缩振动,未处理麦麸SDF和超高静压改性麦麸SDF分别在3 415 cm-1和 3 420 cm-1处出现宽展圆滑的吸收峰是O—H的伸缩振动所致。改性前后麦麸SDF分别在2 929 cm-1和2 926 cm-1处出现弱吸收峰,是糖类C—H的反对称伸缩振动所致,1 200~1 400 cm-1内是C—H的变角振动吸收峰,这些区域的吸收峰为糖类的特征吸收峰。改性前后麦麸SDF分别在1 079 cm-1和1 080 cm-1处出现较强吸收峰,是由C—O—C中C—O伸缩振动和C—O—H的O—H变角振动产生,也是多糖类的另一特征吸收峰。1 663 cm-1或1 664 cm-1附近为—COOH的吸收峰,峰强度较大,表明麦麸SDF经过高压处理后糖醛酸含量增加。推测麦麸经改性处理后,SDF的单糖含量发生变化。改性麦麸SDF在3 442 cm-1附近出现的吸收峰更强,说明在制备改性麦麸SDF时,部分糖苷键断裂,形成—OH增多。综合分析得出改性前后麦麸SDF结构很相似,由于结合程度或含量不同,导致在吸收强度上存在差异。
图7 超高静压改性前后麦麸IDF的傅里叶变换红外光谱图Fig. 7 FTIR spectra of wheat bran IDF before and after HHP modification
经过超高静压处理的麦麸IDF的傅里叶变换红外光谱如图7所示。由于氢的振动,IDF的傅里叶变换红外光谱图中发现了3 428 cm-1或3 427 cm-1处由O—H伸缩振动所致拉伸带,与未处理麦麸IDF相比,观察到超高静压处理的峰值强度增大,这可能是由于超高静压处理诱导纤维素内分子内氢键断裂,导致O—H显著增多[15]。1 200~1 400 cm-1内是C—H的变角振动吸收峰,为糖类的特征吸收峰,与未处理样品相比,超高静压处理后的峰值强度降低,这与部分IDF转换成了SDF的结果相吻合。由傅里叶变换红外光谱图可看出麦麸样品的基团类型未变,表明麦麸IDF样品中的糖类型未变。
本研究采用超高静压技术处理麦麸,然后利用单因素试验测定了超高静压对小麦麸皮持水力、持油力、SDF质量分数、亚硝酸根清除率、吸附胆固醇能力、清除DPPH自由基能力等功能性质的影响。结果表明:超高静压技术改性麦麸的功能性质有较大程度的改善,改性后的麦麸持水力、持油力增强,SDF质量分数增加,亚硝酸根吸附能力增强,DPPH自由基清除能力降低,阳离子交换能力增强,吸附胆固醇能力增强,脂肪酶活力显著降低。适合增加麦麸SDF质量分数、阳离子交换能力、降低脂肪酶活力的条件为麦麸粒度40 目、处理时间20 min、压强400 MPa、麦麸质量分数20%;适合提高持水力和持油力的条件为麦麸粒度50 目、处理时间15 min、压强400 MPa、麦麸质量分数20%;适合提高亚硝酸根清除能力的条件为麦麸粒度40 目、处理时间25 min、压强300 MPa、麦麸质量分数15%;适合提高胆固醇吸附能力的条件为麦麸粒度50 目、处理时间25 min、压强500 MPa、麦麸质量分数25%。通过扫描电子显微镜可以看出,超高静压破坏了麦麸膳食纤维的组织结构,增大了麦麸与外界物质接触的比表面积、通过傅里叶变换红外结构分析可以看出,超高静压破坏了纤维素之间的氢键,SDF质量分数和官能团数量显著增加,而且各个功能性质与超高静压处理条件具有明显的量效关系,本研究可为麦麸的深度开发和利用提供有效的理论参考。未来研究可通过分析各个功能指标的相关性筛选出需要改性的多个功能性质进行优化,选择最合适的条件。