三颗针水提物体的镇痛与抗炎作用

宋继华 吴静蔓.牡丹江医学院.黑龙江牡丹江市.157000

三颗针是一种很常见的中药材，而且药理作用显著，尤其是在抗菌消炎，清热解毒 ，降压，利胆等方面，因三棵针有毒，应病愈即止，且不宜长期服用。主治：肝炎。配方：三颗针（三钱）、地星宿（一两）、木通（一两），煎水内服 ，每天三次、每次100ml。主治：肝炎复水 。配方：三颗针（三钱），铁筷子（五钱）、狗地菜草根（五钱）、甘草（二钱）、木通（一两），煎水内服，每天三次、每次100ml。本人导师名吴必发，以上配方是他为病人治疗时所用的配方，以期为探索其抗炎镇痛作用提供依据。

实验部分

1 材料与方法

1.1 实验动物

昆明小鼠，体质量（20±1）g，清洁级，由贵阳医学院研究中心提供。实验前将动物在室内适应性饲养3d，室温(20~28℃)，相对湿度60%~80%。

1.2 药品与试剂

硫酸罗通定注射液（浙江诚意药业股份有限公司、规格：60mg/2ml、批号：134018）；醋酸地塞米松片（天津药业新郑制药有限公司、规格：每片75mg、批号140643）；二甲苯（青岛正华化工有限公司、批号 ：130418）；甲醇（东光鑫源化工有限公司、批号：21300737）；冰醋酸（国药集团化学试剂有限公司、批号：T20090625）；氯化钠注射液（贵州天地药业有限责任公司、批号：A12092120）。

1.3 仪器与设备

TGL-16B离心机（上海安亭科学仪器厂）；YLS-6B型智能热板仪（淮北正华生物仪器设备有限公司）；752型紫外分光光度计（南京麒麟分析仪器有限公司）；电子分析天平（奥斯国际贸易（上海）有限公司）；L-204电子天平（梅特勒-托利多中国分公司）。

1.4 实验方法

1.4.1 对醋酸致小鼠扭体反应次数的影响[12-14].取小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，空白对照组，罗通定组（60mg/kg），三颗针水提物大（21.3mg/kg）、中（10.2mg/kg）、小（5.1mg/kg）剂量组。均灌胃给药20ml/kg .qd，连续4d 。空白对照组给予同体积纯净水。末次药后1h、小鼠腹腔注射0.7%醋酸溶液10ml/kg，记录注射醋酸后15min内小鼠扭体反应次数。

1.4.2. 对热板仪致小鼠疼痛的影响 [14-15].取雌性小鼠，放入(55±4) ℃热板测痛仪，各小鼠自放入到出现舔后足所需时间即为痛阈值，5min后重复1次。痛阈〈5s或〉30s者，以及喜跳者，弃去不用。小鼠分组及给药同“1.4.1”项，分别在末次给药后30、60、90、120min测定小鼠的痛阈。小鼠在热板测痛阈仪内60s仍无痛觉反应则取出，按60s计。

1.4.3 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响[15-16].取雄性小鼠50只，随机分为5组，即空白对照组，地塞米松组（5.0mg/kg），三颗针水提物小（5.1mg/kg）、中（10.2mg/kg）、大（21.3mg/kg）剂量组。均灌胃给药，20ml/kg.qd，连续7d，空白对照组给予同体积纯净水。于末次1h，各组小鼠于右耳廓滴二甲苯20微升致炎（正、反面各滴10微升），15min后脱劲椎处死，直径6mm打孔器打下左右耳朵，称定质量，以两耳质量差值作为肿胀度，并计算抑制率（%）=（空白对照组平均两耳质量差—给药组平均两耳质量差）/空白对照组平均两耳质量差×100%。

1.4.4 对小鼠腹腔通透性的影响 [17-18].分组及给药方法同“1.4.3”项，于末次给药后1h，经小鼠尾静脉注射0.25%伊文思蓝，10ml/kg，小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液10ml/kg，15min后将小鼠处死，腹腔注射0.9%氯化钠溶液6ml冲洗，腹腔洗出液2000r/min 离心10min(r=8cm)，取上清液体用紫外-分光光度计于590nm波长处测定吸光度（A）值。

1.5 统计学方法 应用SPSS17.0版软件进行统计学分析，计量数据以均数±标准差（ ±s）表示，采用t检验，以P〈0.05表示差异有统计学意义。

2.结果

2.1 对醋酸小鼠扭体反应的影响 见表1。.三颗针水提物大、中剂量组扭体反应次数明显少于空白对照组，差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）。提示三颗针水提物对醋酸致小鼠扭体反应有抑制作用。

表1 5组小鼠扭体反应测定结果Tab.1 Determination results of twisting test on five groups of mice. ±s.n=10

2.2 对热板仪致小鼠疼痛的影响. 见表2。.三颗针水提物大剂量组小鼠30、60、90、120min痛阈值均明显低于空白对照组，差异有统计学意义（P〈0.01，P〈0.05）；中剂量组小鼠60min 痛阈值明显低于空白对照组，差异有统计学意义（P〈0.05）；小剂量组小鼠120min痛阈值明显低于空白对照组，差异有统计学意义（P〈0.05）。提示三颗针水提物可提高热板致小鼠疼痛的痛阈。

表2 5组小鼠不同时间痛阈值测定结果Tab .2 determination results of pain threshold in five groups of mice at different time points. s, ±s ,n=10

2.3 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响.见表3。 三颗针水提物大、中剂量组耳肿胀明显低于空白对照组，差异有统计学意义（P〈0.01，P〈0.05）。提示三颗针水提物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有抑制作用。

表3 5组小鼠耳肿胀实验结果Tab.3 determination results of pain threshold in five groups of mice at different time points. s, ±s ,n=10

2.4 对小鼠腹腔通透性的影响 见表4。 三颗针水提物小、中剂量组腹腔通透性A值明显低于空白对照组，差异有统计学意义（P〈0.05）。提示三颗针水提物对0.6%醋酸致小鼠腹腔通透性增加有抑制作用。

表4 5组小鼠腹腔通透性吸光度值测定结果Tab.4 Absorbance value of peritoneal permeability in five groups of mice.±s.n=10

3 讨论

主治：肝炎。配方：三颗针（三钱），地星宿（一两），木通（一两），煎水内服 ，每天三次、每次100ml，本土苗医用此配方治好无数个肝炎患者。由此可做猜想其中应有一味或一味以上的药材有抗炎镇痛作用。在本次实验中已经得到论证，所以在探寻某未知物是否有抗炎镇痛作用时可以运用此实验方法。小鼠热板法属于反射性疼痛模型，对仅有外周镇痛作用的非甾体抗炎药不敏感，是区分麻醉性镇痛药和非甾体抗炎药有效模型【19】。

实验结果表明，三颗针水提物大、中剂量对醋酸致小鼠扭体反应次数有抑制作用；大剂量三颗针水提物在30、60、90、120min 可高提热板致小鼠疼痛的痛阈；三颗针水提物中剂量组在60min可提高热板致小鼠疼痛的痛阈；三颗针水提物小剂量组小鼠在120min痛阈值高于空白对照组。

炎症是机体对组织损伤或致炎因子侵入所产生的防御为主的反应。炎症的主要表现为红、肿、热、痛。实验结果表明，三颗针水提物大、中剂量可抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀度产生；三颗针水提物大、小剂量可抑制0.6%醋酸所致小鼠腹腔通透性增加。

4 结论

三颗针水提物具有显著的镇痛效果，三颗针水提物大剂量组的镇痛效果最好，其镇痛机制目前仍不清楚，需要进一步实验论证。