注射用伏立康唑细菌内毒素检查方法及意义

郑州大学附属儿童医院 河南省儿童医院 郑州儿童医院（450000）谢博

1 材料和方法

1.1 材料 恒温水浴锅为DZKW-S-8型、德国IKA的MS3型旋涡混合器、TAL-40D型试管恒温仪、Eppendorf移液器、Thermo Fisher Scientific公司的OMH180SS型高温烘箱等。实验使用的所有玻璃器皿在250℃下烘烤2小时以除去外源细菌内毒素。

TAL：TALⅠ是厦门迅试剂实验厂有限公司的产品，批号：1505804，灵敏度为0.25EU/mL；TALⅡ是湛江安得生物有限公司的产品，批号：1607062，灵敏度为0.25EU/mL。

内毒素工作标准品（CSE）买自北京世纪奥科生物技术有限公司，规格：每支80EU，批号：150601-201478。

BET水购自上海恒远生物科技有限公司，规格：10mL每支，产品编号：160006。

注射用VRC：来自四川美大康华康药业，批号为：16061319、15121119，规格：每瓶0.1g。

1.2 方法 根据临床使用情况对细菌内毒素的限值进行测定，使用剂量：本产品静脉滴注速度最快不得＞3mg/（千克/时），将其稀释后需要进行1～2小时的滴注，极限值为1.67EU/mg。严格限制在计算值的1/3～1/2之间，以确保安全使用药物，并结合现行标准和相关要求，暂且认为VRC的细菌内毒素应不得高于0.75EU/mg。

本研究根据2015版中华人民共和国药典中的药剂敏感度审查规则对TAL进行试剂敏感性审查。

笔者通过预干扰实验发现选用0.25EU/mL的TAL时，将注射用VRC稀释到0.67mg/mL时不存在BET干扰。因此，我们将样品稀释到测试溶液A的0.67mg/mL，并采用该稀释液和BET水分别将标准品稀释，浓度为含内毒素2、1、0.5、0.25λ的溶液B、C。BET可直接作为阴性对照D。准备工作完成后进行干扰试验检查，溶液B各个浓度设置4个平行管，溶液A、C、D的各个浓度设置2个平行管。

供试品BET：根据建议的BET标准检查所有样品。溶液A：将样品稀释至0.67mg/mL，并选择λ=0.5EU/mLTAL进行BET。阳性对照B：将内毒素工作标准稀释成2λ，阳性对照C和阴性对照D均由BET水建立，依法进行限度测试。

2 结果

2.1 通过实验发现TAL的λ都在0.5～2λ之间，说明TAL符合规定，因此笔者认为0.25EU/mL即为该批次TAL的灵敏度。见附表1。

2.2 A和D所有平行试管均为阴性，溶液C的测试结果满足试剂敏感性复查试验的要求，因此实验是有效的。溶液B的结果也符合试剂敏感性审查测试的要求，表明注射剂用VRC稀释到0.67mg/mL选用0.25EU/mL的TAL进行BET无干扰。见附表2。

2.3 根据干扰结果确定制定含有内毒素的VRC细菌的BET检测标准应小于0.75EU/mg。

3 讨论

相关研究证明注射用VRC对于念珠菌血症以及足放线菌引起的严重感染等非嗜中性粒细胞减少等疾病具有良好的效果[1]，因此其安全性受到很多学者的关注。

附表1 灵敏度复核结果

附表2 干扰确认试验结果

本研究选择使用两种不同制造商生产的TAL试剂，对两种不同批次的VRC注射样品进行细菌内毒素检测并进行研究。通过实验我们发现TAL的λ都在0.5～2λ之间，说明这两家TAL试剂制造商所生产的TAL均符合规定，因此笔者认为0.25EU/mL即为该批次TAL的灵敏度。又进一步通过干扰确认实验，证实样品稀释到0.67mg/mL时选用0.25EU/mL的TAL进行BET不存在干扰。因此根据干扰确认的结果，笔者建议将细菌内毒素测试统一应用于注射用VRC标准，并且限值严格为0.75EU/mg。拟定细菌内毒素检查方法为取本品依法进行检查，且VRC的细菌内毒素含量不得超过0.75EU/mg。而且采用细菌内毒素法检查注射用伏立康唑的安全性在合理用药方面有着及其重要的作用[2]。