标本保存条件对血液病患者网织红细胞测定百分数的影响

袁 静 陈静静

（安徽医科大学第四附属医院，安徽 合肥 230022）

红细胞发育过程中要经历几个不同的阶段，网织红细胞是晚幼红细胞和成熟红细胞之间过渡阶段未完全成熟的红细胞，由晚幼红细胞脱核形成，直径约为8至9.5m，比成熟红细胞体积略大，胞质内残存有核糖体、核糖核酸等嗜碱性RNA物质，经碱性染料如天青B、煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后,在油镜下观察可以看到其胞浆中的蓝色或蓝绿色点状或网织状结构[1]，主要分为4型，外周血网织红细胞百分数的测定以观察IV型为主。由于网织红细胞在外周血中所占的百分数可以反映骨髓的造血功能，因而其对血液病的诊断和治疗[2]、骨髓移植[3]以及恶性肿瘤患者放疗前、后骨髓功能恢复的评估[4]有着非常重要的临床价值。网织红细胞计数增高提示骨髓造血功能旺盛，常见的有溶血性贫血、急性失血、缺铁性贫血和巨幼细胞性贫血等；网织红细胞计数减低提示骨髓造血功能低下，主要见于再生障碍性贫血和骨髓病性贫血等[5]。由于在检验科血液标本的实际检测的过程中不是所有的标本都能得到及时的检测，因此血液标本的保存问题是临床检验质量控制的关键。本实验抽取我院收治的50例血液病住院患者血液样本为研究对象，并将标本平均分成两份，分别放置在4℃和室温26℃，在即刻、4小时、8小时、12小时、24小时、48小时和72小时内采用煌焦油蓝法进行活体染色，计数1000个红细胞，测定网织红细胞在其中所占的百分数，并对结果进行分析比较，探讨标本保存条件对煌焦油蓝染色法计数网织红细胞百分数的影响。

1 材料与方法

1.1 检测对象

抽取2017年1月1日至2017年6月1日我院收治血液病住院患者50例，其中男性24例，女性26例，年龄 15-79岁,平均(53.26±15.64)岁。

1.2 方法

1.2.1 标本采集

用含EDTA-2K的抗凝真空管采集检测对象外周空腹静脉血约2ml，采血后将抗凝管上下轻轻颠倒混匀几次，使抗凝剂与血液充分混匀，但要避免气泡的产生。

1.2.2 检测方法

病人静脉血采集后将标本均匀分成两管，一管放在4℃条件下，另一管放在26℃条件下，分别在即刻、4小时、8小时、12小时、24小时、48小时和 72小时内采用煌焦油蓝法进行活体染色。染色具体步骤为在小试管中滴加2滴煌焦油蓝染色液，再加2滴抗凝全血，充分混匀，混匀后将试管放在室温下静置15～20分钟，各取1滴推片，制片两张，待干燥后在油镜下观察每张片500个红细胞中网织红细胞所占的百分数，避免分布不均匀引起的误差。注意染色时间不能过短，室温过低可放置水浴箱37℃水浴，煌焦油蓝染色液应定期更换，以免变质，显微镜观察应选择细胞分布均匀的体尾交界处进行计数。

1.3 结果判定

根据万学红、卢雪峰主编的人民卫生出版社出版的《诊断学》（第八版）中网织红细胞测定百分数为0.5%-1.5%。

1.4 统计学方法

采用SPSS19.0软件对实验数据进行统计学处理分析，数据用±s表示，两种方法测定结果比较用配对t检验，以α=0.05为检验水准，P＜0.05表示为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同标本保存条件下网织红细胞百分数测定结果的比较(±s)

将采集后的血标本平均分成两份，分别放置在4℃和26℃条件下，用煌焦油蓝染色法测定即刻、4小时、8小时、12小时、24小时、48小时和72小时内不同保存时间下网织红细胞所占的百分数并将结果进行分析比较。结果显示，与即刻检测的血液标本的网织红细胞的百分数相比，在室温26℃保存，12小时内检测结果差异无统计学意义(P＞0.05)，见表1。在4℃保存，48小时内检测结果差异无统计学意义(P＞0.05)，见表 2。

表1 26℃保存条件下网织红细胞百分数测定结果的比较 (±s)

表2 4℃保存条件下网织红细胞百分数测定结果的比较(±s)

3 讨论

网织红细胞百分数测定方法主要包括传统普通光学显微镜目测法和现代仪器检测法。现代仪器检测法主要包括网织红细胞计数仪法和血液分析仪法。很多基层医院因为条件限制，尚未开展仪器法测定网织红细胞，所以手工染色用显微镜观察网织红细胞所占的百分数仍是网织红细胞计数的首选方法[6]。同时，由于仪器法测定网织红细胞与仪器的性能和仪器的状态等多种因素有关，所以当出现可疑检测结果时仍需要用手工染色显微镜目测法进行复查。传统普通光学显微镜目测法主要包括玻片法和试管法，其中试管法操作简便，耗时短，重复性好，被广泛应用于临床。

本研究抽取我院收治的50例血液病住院患者血液样本为研究对象，并将标本平均分成两份，分别放置在4℃和室温26℃，在即刻、4小时、8小时、12小时、24小时、48小时和72小时内采用煌焦油蓝法进行活体染色，计数1000个红细胞，测定网织红细胞在其中所占的百分数，并对结果进行分析比较。结果显示，与即刻检测的血液标本的网织红细胞的百分数相比，在室温26℃保存，12小时内检测结果差异无统计学意义(P＞0.05)，12小时之后网织红细胞计数逐渐降低；在4℃保存，48小时内检测结果差异无统计学意义(P＞0.05)，48小时之后网织红细胞计数逐渐降低。出现这种情况可能是因为在4℃低温条件下，红细胞代谢变缓，其胞质内部嗜碱性RNA物质消失速度减慢，所以在48小时内测定不影响计数结果。

综上所述，煌焦油蓝手工染色显微镜目测法仍是网织红细胞百分数测定的重要方法。在临床标本分析过程中，最好能将标本及时检测。如果无法对网织红细胞进行及时检测分析，应将标本保存在4℃冰箱里，最多放置48小时，这样可以最大限度地减少红细胞的代谢速度，从而保证检测结果的准确。