核桃楸中檞皮素的提取

□ 牛春艳 李涔洋 宋艳芳 于佳乐 吉林农业科技学院食品工程学院

核桃楸为核桃加工中的废弃物，其占核桃重量的近50%。本文以绿色、环保、资源节约为出发点，采用微波-酶法对核桃楸进行加工处理，从核桃楸中提取檞皮素化合物。不仅为核桃的进一步利用和开发提供了宝贵的依据，也对核桃加工废弃物再利用问题进行解决和研究，使得大批量的核桃楸变废为宝，为进一步的高效利用提供一定可靠的理论依据，具有一定的经济效益和社会意义[1-4]。

1 试验材料与方法

1.1 试验材料与试剂

材料：核桃楸。

试剂：无水乙醇、亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝（以上均为分析纯）。檞皮素标准品（北京中伟质检生物科技有限公司）。

1.2 试验仪器与设备

TDL-4离心机（浙江佑宁仪器厂）、UV-721分光光度计（青岛环球仪器有限公司）、Cary 60紫外光谱仪（安捷伦（科技）有限公司）、FLB-180A万能粉碎机（常州柏羽药化设备公司）、DHG-9240A恒温干燥箱（宏远实验仪器有限公司）、BSA124S-CW电子分析天平（浙江广发科技有限公司）、inyi08S-3超声微波合成反应仪（山东海能科研仪器有限公司）。

1.3 核桃楸中总檞皮素的提取

1.3.1 工艺流程

核桃楸→清洗→烘干→粉碎→过筛→超声波-微波辅助萃取→过滤→纯化→分离→檞皮素

1.3.2 操作要点

（1）原料预处理：选取无霉斑、无腐烂、无变质的核桃楸，进行清洗，整理，平铺放于干燥温度90～100 ℃的干燥箱内烘干，待完全干燥后经粉碎机粉碎，过20目筛，得到核桃楸粉末，以留备用。

（2）提取：准确称取2.00 g预处理后的核桃楸粉末，加入适量的乙醇溶液，按设定的不同条件进行提取。

（3）离心：将微波提取后的溶液，过滤后用离心机进行离心，并取出上清液。

（4）定容：将上清液在100 mL容量瓶进行定容，获得总檞皮素提取液。

1.4 核桃楸总檞皮素得率的测定

1.4.1 檞皮素标准曲线的制作

分别取檞皮素标准液（0.25 mg/mL）2.00、4.00、6.00、8.00、10.00 mL于5个25.00 mL的容量瓶中，加入1.50 mL的NaNO2溶液充分摇匀，静置 6 min，加入 1.50 mL 的 Al（NO3）3溶液进行摇匀，放置6 min后，加入10.00 mL的NaOH溶液摇匀，最后用浓度为30%的乙醇溶液定容，放置15～20 min后，在波长为510 nm处测吸光度，绘制标准曲线。

1.4.2 总檞皮素得率的计算

取核桃楸总檞皮素提液1 mL置于100 mL容量瓶中，乙醇定容。用标准曲线回归方程得到檞皮素类化合物的质量浓度，其计算公式为：

式中：W—檞皮素类物质得率（%）；C—檞皮素类物质质量浓度（mg/mL）；N—稀释倍数；V—提取液体积（mL）；m—核桃楸干粉量（g）。

1.5 正交试验分析

以提取率作为参考指标，根据单因素试验的结果，选取最优的提取时间、提取功率、料液比、乙醇浓度作为正交试验因素，做L9(34)正交试验。通过方差齐性分析确定其最佳工艺条件。

2 结果与讨论

2.1 檞皮素标准曲线的制定

以紫外分光光度计进行扫描，510 nm处测得吸光度值，以空白为参比，横坐标X为檞皮素浓度，纵坐标为Y吸光度值，绘制檞皮素标准曲线线经过计算得回归方程为y=6.26x-0.1106 R2=0.997。其中x表示1,8-二羟基檞皮素浓度mg/mL；y表示在510 nm处测得吸光度值。结果显示：在所测定1,8-二羟基檞皮素的浓度范围与吸光度值所呈现良好的线性关系。

2.2 正交试验确定最佳工艺条件

2.2.1 正交试验因素与水平设计

本文在单因素试验结果的基础上，按L9(34)正交试验表（见表1）提取核桃楸中总檞皮素，经分离、稀释后，测定最大吸收处的吸光度值，从而求得得率。

2.2.2 正交试验结果分析

结果表明，影响檞皮素提取率的因素次序分别是，提取时间＞料液比＞提取功率＞乙醇浓度。由极差分析可知，A2B1C3D2为最优提取工艺，但是在正交九组数据中没有出现，在正交试验结果表分析表（见表2）中可以看出A2B2C3D1的提取率最高，因此，需要对A2B2C3D1和正交表中得出的A2B1C3D2做验证试验，每组试验做3次，取平均值。试验结果见表3。

表1 正交试验因素水平表

表2 正交试验结果分析表

表3 验证试验结果分析表

由表3可知，试验号为A2B2C3D1的提取率为5.9 5%，试验号为A2B1C3D2的提取率为6.1%，因此檞皮素最佳提取条件为试验A2B1C3D2，即提取时间为3 min、提取功率为500 W、料液比为1∶25（g/mL），乙醇浓度为45%。