肺癌诊断中血浆中多基因联合甲基化检测的价值

党红　杨金宇　郭炫

【摘 要】 目的：探讨肺癌诊断中血浆中多基因联合甲基化检测的价值。方法：选取80例肺癌患者的资料作为研究组，选取80例健康体检者为对照组，比较两组多基因检测及甲基化状态。结果：肺癌组织的CDH13、RASSF1A、RUN3基因甲基化率高于癌旁组织甲基化率（P<0.05）。研究组患者的CpG岛甲基化表型阳性率高于对照组（P<0.05）。结论：血浆中多基因联合甲基化检测在肺癌早期诊断中有重要意义。

【关键词】 多基因;甲基化;肺癌;联合检测;临床价值

肺癌是临床常见的恶性肿瘤，有着较高发病率及死亡率，肺癌患者来院就诊时，大多是中晚期;若取患者的肺癌组织标本，会对患者的身体造成一定的影响[1]。因此，临床急需一种有效且无创的检测手段，提高对于该疾病的诊断率。有临床研究表明：肺癌发生与抑癌基因启动子区CpG岛甲基化相关。因此，本文为了分析血浆中多基因联合甲基化检测在肺癌诊断中的价值，选取本院收治的80例肺癌患者进行分析，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

80例肺癌患者来源于本院2015年3月至2018年3月收治，男57例，女23例;年龄40～86岁，平均年龄（58.42±2.45）岁;根据WHO肺癌组织学分类，鳞癌45例，腺癌20例，小细胞癌15例。选取同期来院体检的80例健康者为对照组，男56例，女24例;年龄40～84岁，平均年龄（59.23±1.56）岁。两组性别、年龄无显著差异（P>0.05），可比较。

1.2 方法

1）采集血液标本。两组受试者均于治疗前清晨空腹抽取2mL静脉血，EDTA抗凝，按照500r/min离心血清10min，获得无血细胞成分的血浆，置于-80℃温度下待测，严格按照试剂盒说明书来操作。2）血浆DNA的提取。采用QIAamp DNA Mini Kit提取，严格按照说明操作。采用Epi Tect Whole Bisulfitome Kit 扩增试剂盒对修饰过后的血浆DNA进行基因组扩增。3）甲基化特异性PCR及电泳检测。采用EZ DNA MethylationGold Kit对提取的血漿DNA进行亚硫酸氢钠修饰，将DNA序列中未甲基化的胞嘧啶（C）转变为尿嘧啶（U），以20μL AE缓冲液洗脱DNA，置于-20℃保存。在重亚硫酸盐测序下设计外侧引物，在甲基化特异性PCR条件下设计甲基化（M）与非甲基化（U）引物。4）判断甲基化结果。甲基化：第一轮PCR出现条带，第二轮PCR甲基化引物出现条带，非甲基化引物未出现条带，甲基化引物、非甲基化引物PCR均出现条带，可判断甲基化。未甲基化：甲基化引物未出现条带，非甲基化引物出现条带。

2 结果

2.1 引物序列、产物大小及退火温度

以CDH13、RASSF1A、RUN3基因为例，其引物序列、产物大小及退火温度详细见下表1所示。

2.2 肺癌及癌旁组织中的基因甲基化情况

肺癌组织的CDH13、RASSF1A、RUN3基因甲基化率明显高于癌旁组织甲基化率（P<0.05）。如下表2所示。

2.3 肺癌与正常健康体检者的CpG岛甲基化表型比较

肺癌患者的CpG岛甲基化表型阳性率高于正常健康体检者（P<0.05）。如下表3所示。

3 讨论

肺癌的发生及发展是由多种因素促进的，通过原癌基因高表达、抑癌基因的低表达两大途径可产生癌症。临床多种癌症疾病中可检测到CDH13、RUNX3、DLEC1、RASSF1A、SEPT9基因高甲基化，但以上基因均未有在同一种癌症标本中检测。经联合检测多种基因可提高标志物的特异度及灵敏度[2]。在本次研究中，通过检测CDH13、RASSF1A、RUN3基因联合甲基化，可提高肺癌诊断价值。CDH13是一种编码黏附分子，在细胞侵袭及转移中有着重要作用。当CDH13表达下调时，可降低癌细胞粘附力，促进肿瘤生长及转移。RASSF1A是临床疾病较常见的抑癌基因，经阻断细胞周期蛋白D1的积累，使得蛋白激酶失活，组织细胞分裂周期的进展，从而调控细胞周期。RUN3蛋白是TGF-β信号通路的重要参与者，其水平下调可影响该细胞信号通路的失调，促进肿瘤细胞发展[3]。

综上所述，血浆中多基因检测联合甲基化检测可提高肺癌诊断率。

参考文献

[1] 骆江龙，李鲲，冯旭.p16、DAPK和APC基因甲基化在肺癌早期诊断中的价值[J].微创医学，2018，（01）：12-16.

[2] 朱宇敏，李坚，俞立超，等.血浆APC和DCC基因启动子甲基化测定在肺癌早期诊断中的应用[J].江苏大学学报（医学版），2015，25（01）：62-67.

[3] 解桢，李天月，刘洪建，等.联合RASSF1A与FHIT基因甲基化检测在非小细胞肺癌诊断中的应用[J].滨州医学院学报，2017，40（04）：249-251.