HPLC法测定8种市售碳酸饮料中山梨酸的含量

张卓 杨巍巍 顾博文 赵映红

摘 要：本研究采用高效液相色谱法（HPLC法）检测了8种市售碳酸饮料中山梨酸的含量。结果表明：碳酸饮料中的山梨酸含量在0.134～0.249 g·kg-1范围内，线性关系（r2>0.999 9），平均回收率为100.41%～103.36%，RSD为1.08%。用该方法测定的饮料中的山梨酸，均未超过最大添加量。该方法精密度、重复性和准确度均良好，可用于碳酸饮料中山梨酸含量的测定。

关键词：山梨酸;饮料;高效液相色谱法

Abstract：The content of sorbic acid in 8 kinds of carbonated beverages was determined by high performance liquid chromatography （HPLC）. The results showed： the content of sorbic acid in carbonated beverages ranged from 0.134 to

0.249 g·kg-1. The linear relationship （r2>0.999 9）， and the recoveries were 100.41%～103.36%， with RSD was 1.08%.The sorbic acid determined by this method did not exceed the maximum addition. The method has good precision， repeatability and accuracy， which can be used for detection of content of sorbic acid in carbonated beverages.

Key words：Sorbic acid; Beverages; High performance liquid chromatography

中图分类号：O657.72;TS275.3

食品添加剂是为改善食品色、香、味等品质，以及为满足防腐和加工工艺的需要而加入食品中的人工合成或天然物质[1]。目前我国食品添加剂有22个类别，2 000多个品种，其中防腐剂和甜味剂在目前的食品加工过程中广泛使用[2]。山梨酸有广泛的抗菌活性，因此常作为防腐剂添加到食品中，以满足保藏需要。山梨酸在一定范围剂量内，对人体无害，但如果滥用，就会有一定的毒害作用。在GB 2760-2014《食品添加剂使用标准》中，对最大使用量有明确的规定，饮料类食品中，山梨酸计最大使用量为0.5 g·kg-1。本研究利用高效液相色谱法对8种碳酸饮料中的山梨酸含量进行测定。

1 材料与方法

岛津LC-16高效液相色谱仪（紫外检测器，自动进样器，柱温箱，色谱工作站）;超声波清洗器（昆山市仪器公司）;天平（METTLER TOLEDO）;0.22 μm水系微孔滤膜。

甲醇（色谱纯 Fisher Scientific）;乙二胺（色谱纯macklin）;山梨酸标准品（Dr.Ehrenstorfer）;碳酸饮料样品（元气森林汽水，格瓦斯汽水，怡泉等，均购于超市）。

2 方法

2.1 流动相与标准液的配制

2.1.1 乙酸铵溶液配制

准确称取3.11 g乙酸铵，加入适量水溶解，用水定容至2 000 mL，经0.22 μm水系微孔滤膜抽滤。

2.1.2 标准储备液的配制

准确称取0.134 5 g山梨酸标准品，用甲醇溶解并定容至100 mL。其山梨酸含量为1 345 mg·L-1。

2.1.3 标准中间液

准确吸取山梨酸标准储备液10.0 mL于50 mL容量瓶中，用水定容。其山梨酸含量为269 mg·L-1。

2.1.4 标准使用液

分别准确吸取山梨酸标准中间液0、0.05、0.25、0.50、1.00 mL及2.50 mL，用水定容至10 mL。其山梨酸含量为0、1.345、6.725、13.45、26.9 mg·L-1及67.25 mg·L-1，作为标准系列溶液。

2.2 样品前处理

准确称取市售的8种碳酸饮料2 g，超声20 min，至50 mL容量瓶中，定容至刻度，经0.22 μm滤膜过滤，滤液待液相色谱测定。

2.3 色谱条件

色谱柱：C18柱（柱长250 mm，内径4.6 mm，粒径5 μm）;流动相：甲醇-乙酸铵溶液（体积比为5∶95）;流速：1.0 mL·min-1;柱溫：30 ℃;检测波长：230 nm;进样体积：10 μL;用保留时间定性，外标法定量。

3 结果与分析

3.1 系统适用性实验

在2.3的色谱条件下，用26.9 mg·L-1的山梨酸标准溶液进样，记录色谱图，见图1。如图所示，理论塔板数大于5 000。

3.2 精密度实验

在2.3的色谱条件下，用26.9 mg·L-1的山梨酸标准溶液进样，进行精密度试验，进行6次重复测定，记录峰面积，计算RSD。见表1。

3.3 线性范围与检测限

在2.3的色谱条件下，对山梨酸标准使用液系列进行测定。以标准品浓度x（mg·L-1）为横坐标，峰面积y为纵坐标，进行线性回归，山梨酸在0～67.25 mg·L-1范围内线性关系良好。以3倍信噪比、10倍信噪比计算检出限、定量限，回归方程、相关系数、检出限及定量限见表2，标准曲线见图2。

3.4 加标回收率实验

称取一定量的碳酸饮料3份，加入2.1.3制备的标准样品中间液，将其稀释成浓度为6.725、13.45、

26.9 mg·L-1的溶液在2.3的色谱条件下测定并计算回收率，结果见表3。

3.5 样品测定

取市售的8种碳酸饮料，按照2.2的方法和2.3的色谱条件进行分析，得到8种样品色谱图，记录峰面积，并计算样品中山梨酸含量，实验结果见表4。

4 结论

通过实验研究发现，被检测的8种市售碳酸饮料中的山梨酸含量均未超出国家标准。该方法灵敏度高，操作简便，结果准确，有良好的线性范围和稳定性。

参考文献：

[1]阚建全，庞 杰，刘 玲，等.食品化学[M].第3版.北京：中国农业大学出版社，2016.

[2]宗珊盈，李 超，张 娟，等.超高效液相色谱-串联质谱法同时测定食品中7中防腐剂和4种甜味剂[J].中国食品添加剂，2016（6）：195-199.