GC法同时测定艾纳香油中6种成分的含量

陈宝雯 钱一鑫 周黎亚 王鲁 康冀川

摘 要 目的：建立同時测定艾纳香油中β-蒎烯、芳樟醇、L-樟脑、L-龙脑、β-石竹烯、花椒油素含量的方法。方法：采用气相色谱法。色谱柱为RTX-1701毛细管柱，程序升温，检测器为氢离子火焰检测器，检测器温度为240 ℃，进样口温度为240 ℃，载气为高纯氮气，流速为3 mL/min，进样量为0.5 μL，进样分流比为50 ∶ 1。结果：β-蒎烯、芳樟醇、L-樟脑、L-龙脑、β-石竹烯、花椒油素的检测质量浓度线性范围分别为0.029 7～0.267 1 mg/mL（r=0.999 9）、 0.024 3～0.218 9 mg/mL（r=0.999 9）、0.126 0～1.134 0 mg/mL（r=0.999 9）、0.217 2～1.954 8 mg/mL（r=0.999 9）、0.136 3～1.226 9 mg/mL（r=0.999 9）、0.044 5～0.400 3 mg/mL（r=0.999 5）;定量限分别为0.028 5、0.008 7、0.018 6、0.016 8、0.014 5、0.042 1 mg/mL，检测限分别为0.009 4、0.002 9、0.006 1、0.005 5、0.004 8、0.013 9 mg/mL;精密度、稳定性、重复性、耐用性试验的RSD均小于3%;加样回收率分别为98.13%～101.30%（RSD=1.20%，n=9）、98.44%～101.81%（RSD=1.28%，n=9）、98.26%～101.05%（RSD=1.19%，n=9）、99.08%～101.58%（RSD=0.89%，n=9）、98.66%～101.66%（RSD=1.17%，n=9）、98.84%～103.60%（RSD=0.96%，n=9）;样品含量分别为14.552～46.766、16.951～22.096、80.597～113.115、205.224～242.537、47.761～135.697、26.493～45.771 mg/g。结论：本方法操作简便、准确，精密度、重复性良好，可用于同时测定艾纳香油中6种成分的含量，并可为艾纳香油质量的综合评价及提取工艺研究提供参考。

关键词 艾纳香油;气相色谱法;β-蒎烯;芳樟醇;L-樟脑;L-龙脑;β-石竹烯;花椒油素;含量测定

Simultaneous Determination of Contents of 6 Components in the Oil of Blumea balsamifera by GC

CHEN Baowen1，QIAN Yixin2，ZHOU Liya3，WANG Lu2，3，KANG Jichuan1，2（1. School of Pharmacy， Guizhou University， Guiyang 550025， China; 2. Engineering Research Center of Southwest Bio-Pharmaceutical Resources， Ministry of Education， Guizhou University， Guiyang 550025， China; 3. Guizhou Rui-Teng Intellectual Property Agency Co.， Ltd.， Guiyang 550007， China）

ABSTRACT   OBJECTIVE： To establish a method for simultaneous determination of contents of β-pinene， linalool， L-camphor， L-borneol， β-caryophyllene and xanthoxylin in the oil of Blumea balsamifera. METHODS： GC method was adopted. The determination was performed on RTX-1701 capillary column （programmed temperature）. The FID detector was controlled at 240 ℃. The inlet temperature was set at 240 ℃. The carrier gas was high-purity nitrogen 3 mL/min. The the sample size was 0.5 μL， and split ratio was 50 ∶ 1. RESULTS： The linear range of β-pinene， linalool， L-camphor， L-borneol， β-caryophyllene and xanthoxylin were 0.029 7-0.267 1 mg/mL （r=0.999 9）， 0.024 3-0.218 9 mg/mL （r=0.999 9）， 0.126 0-1.134 0 mg/mL （r=0.999 9）， 0.217 2-1.954 8 mg/mL （r=0.999 9）， 0.136 3-1.226 9 mg/mL （r=0.999 9）， 0.044 5-0.400 3 mg/mL（r=0.999 5）， respectively. The limits of quantitation were 0.028 5， 0.008 7， 0.018 6， 0.016 8， 0.014 5， 0.042 1 mg/mL; the limits of detection were 0.009 4， 0.002 9， 0.006 1， 0.005 5， 0.004 8， 0.013 9 mg/mL， respectively. RSDs of precision， stability， reproducibility and durability tests were all lower than 3%. The average recoveries were 98.13%-101.30%（RSD=1.20%，n=9），98.44%-101.81%（RSD=1.28%，n=9），98.26%-101.05%（RSD=1.19%，n=9），99.08%-101.58%（RSD=0.89%，n=9），98.66%-101.66%（RSD=1.17%，n=9），98.84%-103.60%（RSD=0.96%，n=9）， respectively. The contents of 6 components in the sample were 14.552-46.766， 16.951-22.096， 80.597-113.115， 205.224-242.537， 47.761-135.697， 26.493-45.771 mg/g， respectively. CONCLUSIONS： The established method is simple， accurate， precise and reproducible， which can be used for simultaneous determination of contents of 6 components in the oil of B. balsamifera. It can provide reference for comprehensive evaluation and extraction technology study of the oil of B. balsamifera.

KEYWORDS   Oil of Blumea balsamifera; GC; β-pinene; Linalool; L-camphor; L-borneol; β-caryophyllene; Xanthoxylin; Content determination

艾纳香[Blumea balsamifera（L.）DC]为菊科艾纳香属多年生木质草本植物，分布于我国南部各省，如贵州、广西、海南等[1]，是贵州重要的民族药。该药具有祛风消肿、活血散瘀的功效，可用于治疗跌打损伤、疮疖肿痛、湿疹、皮炎等[2]。艾纳香油是由艾纳香叶提炼而成的精油，具有抗炎、抗氧化和修复皮肤等药理活性[3-5]，主要含有萜品烯醇、龙脑、樟脑、芳樟脑等多种成分[6]，其中L-龙脑具有促进药物吸收的作用，L-樟脑具有神经保护作用[7]，β-石竹烯具有局部麻醉、抗炎、驱蚊虫、抗焦虑、抗抑郁等作用[8]，β-蒎烯具有抗菌、抗肿瘤、抗病毒、抗炎等作用[9]，芳樟醇具有镇痛、抗焦虑、镇静催眠等作用[10]，花椒油素具有抑制血小板凝聚和药物所致肠、子宫、膀胱等肌肉收缩等作用[11]。《贵州省中药材、民族药材质量标准》采用气相色谱法（GC）测定艾纳香油中L-龙脑的含量，规定其含量不得低于20.0%[6]。但由于艾纳香油成分较多，因此对单一成分的定量检测难以全面评价其质量。目前，虽然已有研究采用GC法同时测定艾纳香油中5种成分的含量，但该方法存在耗时较长的缺点[12]。为了缩短分析时间、提高分析质量和效率，本研究在优化色谱条件的基础上，采用GC法同时测定了艾纳香油中β-蒎烯、芳樟醇、L-樟脑、L-龙脑、β-石竹烯、花椒油素等6种成分的含量，旨在为其质量标准的建立提供参考。

1 材料

1.1 仪器

GC-2010 Plus型GC仪，包括RTX-1701型毛细管柱、2010 Plus型氢火焰离子检测器、WBI-2010 Plus型进样口、AOC-201+S型自动进样器、Lab Solutions 5.87工作站（日本Shimadzu公司）;BS1101S型万分之一电子天平（德国Sartorius公司）。

1.2 药品与试剂

β-蒎烯对照品（批号：C10H116，纯度：≥98%）、花椒油素对照品（批号：C10H1204，纯度：≥98%）均由郑州杰克斯化工有限公司提供;L-樟脑对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111749-201702，纯度：99.9%）;芳樟醇对照品（批号：J28J9S66619，纯度：≥98%）、β-石竹烯对照品（批号：Z02A9H67113，纯度：≥98%）均由上海源叶生物科技有限公司提供;L-龙脑对照品[阿拉丁试剂（上海）有限公司，批号：F1705071，纯度：≥98%];艾纳香油（贵州A公司，批号：20170317;贵州B公司，批号：20170409;贵州C公司，批号：20170321、20180116;规格均为500 mL/瓶）;水杨酸甲酯对照品[内标，阿拉丁试剂（上海）有限公司，批号：J1709026，纯度：≥99.5%];甲醇为色谱纯，水為超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：RTX-1701毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）;程序升温：初始温度100 ℃，以10 ℃/min升温至150 ℃，保持1 min，以20 ℃/min升温至220 ℃，保持6 min;检测器：氢火焰离子检测器;检测器温度：240 ℃;进样口温度：240 ℃;载气：高纯氮气（纯度：99.999%）;流速：3 mL/min;进样量：0.5 μL;进样分流比：50 ∶ 1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液 分别精密称取花椒油素、芳樟醇、β-石竹烯、β-蒎烯、L-龙脑和L-樟脑对照品各适量，置于同一10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成β-蒎烯、芳樟醇、L-樟脑、L-龙脑、β-石竹烯和花椒油素质量浓度分别为0.371、0.304、1.575、2.715、1.704、 0.556 mg/mL的混合对照品溶液。

2.2.2 内标溶液 精密称取水杨酸甲酯对照品适量，置于50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成质量浓度为9.982 mg/mL的内标溶液。

2.2.3 供试品溶液 精密称取艾纳香油样品40 mg，置于10 mL量瓶中，精密加入“2.2.2”项下内标溶液2 mL，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 空白对照溶液 以甲醇为空白对照溶液。

2.3 系统适用性试验

分别取“2.2”项下混合对照品溶液、供试品溶液、内标溶液、空白对照溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，详见图1。由图1可知，各成分均能达到基线分离，分离度均大于3，保留时间均小于13 min，理论板数均大于3 000;空白对照溶液对测定无干扰。

2.4 线性关系考察

精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液0.4、0.8、1.0、1.8、3.6 mL，分别置于5 mL量瓶中，精密加入“2.2.2”项下内标溶液1 mL，再加甲醇定容至刻度，得系列标准工作溶液。取适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，以各成分与内标的质量浓度比（x）为横坐标、各成分与内标的峰面积比（y）为纵坐标进行线性回归，结果见表1。

2.5 定量限与检测限考察

精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，用甲醇倍比稀释，按“2.1”项下色谱条件进样测定，以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1分别计算定量限、检测限。结果，β-蒎烯、芳樟醇、L-樟脑、L-龙脑、β-石竹烯、花椒油素的定量限分别为0.028 5、0.008 7、0.018 6、0.016 8、0.014 5、0.042 1 mg/mL，检测限分别为0.009 4、0.002 9、0.006 1、0.005 5、0.004 8、0.013 9 mg/mL。

2.6 精密度试验

取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，用甲醇稀释后，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，β-蒎烯、芳樟醇、L-樟脑、L-龙脑、β-石竹烯、花椒油素峰面积的RSD分别为 0.51%、0.96%、0.09%、0.12%、0.19%、0.49%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

取“2.2.3”项下供试品溶液（批号：20180116）适量，分别于室温下放置0、2、4、6、8、10、12 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，β-蒎烯、芳樟醇、L-樟脑、L-龙脑、β-石竹烯、花椒油素峰面积的RSD分别为0.55%、1.91%、0.21%、0.21%、0.25%、0.46%（n=7），表明供试品溶液于室温下放置12 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验

取样品（批号：20180116）40 mg，共6份，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按内标法计算样品中6种成分的含量。结果，β-蒎烯、芳樟醇、L-樟脑、L-龙脑、β-石竹烯、花椒油素的平均含量分别为16.296、20.466、114.568、209.877、117.284、35.062 mg/g，RSD分别为1.79%、0.97%、1.26%、1.04%、0.99%、1.23%（n=6），表明本方法重复性较好。

2.9 加样回收率试验

取已知含量的样品（批号：20180116），共9份，每份约20 mg，分别加入一定量的混合对照品溶液，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表2。

2.10 耐用性试验

取样品（批号：20180116）适量，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件分别以不同进样口温度（230、240、250 ℃）、柱温（98、100、102 ℃）、流速（2、3、4 mL/min）进样测定，记录峰面积并按内标法计算样品中6种成分的含量。结果显示，各成分含量的RSD均小于3%，提示本方法可满足试验要求，耐用性良好。

2.11 样品含量测定

取各批样品，每份40 mg，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，每批样品平行操作3次，记录峰面积并按内标法计算样品中6种成分的含量，结果见表3。

3 讨论

在样品前处理中，笔者分别考察了乙酸乙酯和甲醇为溶剂时的色谱分离情况。结果发现，以乙酸乙酯为溶剂时，色谱图中除有乙酸乙酯峰外，在3 min内还出现了杂峰，干扰了样品中其他成分的测定，这可能与乙酸乙酯具有较强吸水性，吸水后在高温下易水解有关[13];以甲醇为溶剂时，样品在甲醇中溶解度好，且甲醇在GC分析中不易分解出杂峰，故选择将其作为溶剂。同时，笔者对程序升温进行了优化，并在10～30 ℃/min范围内对升温速率进行调整。结果发现，L-樟脑、L-龙脑在温度升至150 ℃左右时出峰，且保留时间相近，此时的升温速率（10～30 ℃/min）无法将二者分离;在150 ℃保留1 min时，L-樟脑和L-龙脑有良好的分离效果，且峰形良好;同时由于花椒油素熔点较高，在210 ℃以下无法出峰，当温度升至220 ℃保持4 min后才得以洗脱出现在色谱图上，继续升高温度虽然可以提高花椒油素的分析率，但是由于温度过高，使得色谱图后半段基线严重漂移，无法保證分析质量，因此将220 ℃的持续时间设定为6 min，并最终确定了本研究中的升温程序。

本研究含量测定结果显示，L-龙脑为艾纳香油中含量最高的成分，其在4批样品中的含量相对稳定，分别为20.5%、24.3%、20.6%、20.8%，符合《贵州省中药材、民族药材质量标准》[6]中的规定（不低于20.0%），这提示虽然不同厂家的提取方法不同，但对L-龙脑含量的影响均较小。不同企业样品间其余各成分的含量存在较大差异，由于本研究中的3家企业的原材料产地、样品采收季节均相同，只是提取工艺不同，因此提示提取方法对样品中其余成分的含量影响较大，这与严学芬等[14]研究结果一致。

综上所述，本方法操作简便、准确，精密度、重复性良好，可用于同时测定艾纳香油中β-蒎烯、芳樟醇、L-樟脑、L-龙脑、β-石竹烯、花椒油素等6种成分的含量，并可为艾纳香油质量的综合评价及提取工艺的研究提供参考。

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（收稿日期：2019-05-13 修回日期：2019-09-23）

（编辑：陈 宏）