电化学发光法定量检测乙型肝炎表面抗原与荧光定量PCR检测乙肝病毒DNA载量的关系探讨

张继东 曹立华 赵培利 杨延源

【摘 要】目的 探讨电化学发光法（ECLIA）定量检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）与荧光定量PCR检测乙肝病毒DNA（HBV-DNA）载量的关系。方法 选择2018年1月至2019年2月我院收治的170例慢性乙型肝炎患者为研究对象，抽取患者静脉血液分离血清，同时采用ECLIA法和荧光定量PCR法对患者血清进行HBsAg含量和HBV-DNA载量检测，对检测结果进行分析。结果 有151例患者血清检测结果为HBsAg阳性，所占比率为88.82%，有96例患者血清检测结果为HBV-DNA阳性，所占比率为56.47%，有96例患者的血清检测结果同时为HBsAg和HBV-DNA阳性，所占比率为56.47%。利用统计学知识，分析发现，HBsAg含量和HBV-DNA载量之间不具有相关性，P>0.05。结论 ECLIA法定量检测HBsAg和荧光定量PCR法检测HBV-DNA载量之间不具有相关性，在对患者进行诊断时候，同时采用这两种方法检测HBsAg和HBV-DNA载量，可以为临床提供更优的诊断依据。

【关键词】电化学发光法;乙型肝炎表面抗原;荧光定量PCR;乙肝病毒DNA载量

【中图分类号】R440 【文献标识码】A 【文章编号】1004-597X（2019）19-0239-02

肝炎是由乙肝病毒（HBV）传播造成的一种疾病，其中乙型肝炎是对患者威胁最大的肝炎之一[1]。目前，国内通常主要根据患者血清内HBsAg含量和HBV-DNA载量对乙肝患者的病情精心诊断鉴别[2]。但是由于医疗设备等原因，利用荧光定量PCR法检测患者血清HBV-DNA载量的做法难以在全国各个医院进行普及[3]。为了提高对乙型肝炎患者的诊断鉴别能力，本文探讨的电化学发光法（ECLIA）定量检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）与荧光定量PCR检测乙肝病毒DNA（HBV-DNA）载量的关系，希望对诊断和治疗乙型肝炎患者提供有意义的参考。

1.资料和方法

1.1 一般资料

选择2018年1月至2019年2月我院收治的170例慢性乙型肝炎患者为研究对象，其中男性患者116例，女性患者54例，患者年龄在13岁至65岁之间，平均年龄为（38.15±10.21）岁，抽取患者静脉血液分离血清，检测后留存血清标本。

1.2 方法

采用ECLIA法对患者血清进行HBsAg含量检测和采用荧光定量PCR法对患者血清进行HBV-DNA载量检测。电化学发光法所使用的仪器罗氏全自动电化学发光免疫分析系统E602，检测过程严格按照检测试剂（来自罗氏诊断产品（上海）有限公司）的说明书来进行操作。荧光定量PCR法所用仪器为上海宏石SLAN96S荧光定量PCR仪，检测过程严格按照检测试剂（来自东北制药股份有限公司）的说明书来进行操作以取得最终结果。

1.3 统计学处理

用Microsoft Excel软件建立数据库，整理后用SPSS13.0统计软件进行Pearson相关分析和处理。

2.结果

2.1 HBs Ag定性与HBV-DNA定性检测结果比较

170例患者中，有151例患者血清检测结果为HBsAg阳性，所占比率为88.82%，有96例患者血清检测结果为HBV-DNA阳性，所占比率为56.47%，有96例患者的血清检测结果同时为HBsAg和HBV-DNA阳性，所占比率为56.47%，有55例（32.35%）患者的血清检测结果为HBsAg阳性和HBV-DNA阴性，有19例（11.18%）患者的血清檢测结果为HBsAg阴性和HBV-DNA阴性，有0例患者的血清检测结果为HBsAg阴性和HBV-DNA阳性。见下表1。

2.2 HBV-DNA载量与HBsAg定量检测结果平均值比较

根据HBV-DNA载量进行分组，分为阴性组、低载量组、中载量组和高载量组。若患者血清HBV-DNA载量小于等于1000IU/ml，则为阴性组;若患者血清HBV-DNA载量在103至105IU/ml之间，则为低载量组;若患者血清HBV-DNA载量在10^5 至10^7IU/ml之间，则为中载量组;若患者血清HBV-DNA载量大于1.0*10^7IUml，则为高载量组。各组患者血清HBV-DNA载量和HBsAg定量检测结果见下表2。

2.3 HBsAg定量与HBV-DNA相关性分析

通过Pearson相关性分析方法，对四组中患者血清HBsAg定量与HBV-DNA载量进行分析，统计分析结果显示两者之间的r值均小于3，P>0.05，说明两者之间缺乏相关性，具体见表3。

3.讨论

肝炎是由乙肝病毒（HBV）传播造成的一种疾病，其中乙型肝炎是对患者威胁最大的肝炎之一，传播途径包括血液、性接触以及母婴等。乙型肝炎患者的临床表现具有多样性、不明显性的特点，较难被患者发觉，很容易恶化转变成肝硬化，小部分患者甚至会恶化成原发性肝癌，严重威胁着患者的生命健康。目前，我国乙型肝炎患者群体越来越多，越来越威胁着国民的生命健康[4-5]。

随着医疗技术的发展，在临床应用上荧光定量PCR法愈发的成熟，利用荧光定量PCR法检测患者血清HBV-DNA载量成为主要的诊断鉴别乙肝的有效方法[6]。患者感染HBV主要在于乙肝病毒在宿主体内不断进行复制，所以若可以对乙肝病毒的复制活动进行检测，那对乙肝患者的诊断就会更加准确，而恰好HBV-DNA载量水平便可以很好的反应乙肝病毒的复制活动。有相关文献表明，目前评价乙肝病毒在宿主体内的复制情况的“金标准”就是患者血清的HBV-DNA载量水平。测定HBV-DNA载量水平为诊断治疗患者提供了可靠的依据，是非常重要的指标。但是，荧光定量PCR法的操作非常复杂，需要非常专业的高能力的人员和非常好的实验室条件才可以进行，这种苛刻的条件严重束缚了这种技术在全国的推广，只有那些具有非常好人力资源和技术资源的医院才有能力独自进行荧光定量PCR法的操作。此外，慢性乙型肝炎患者在经过一段时间的药物治疗后，一定比例的患者血清HBV-DNA会下降到较为低的水平，难以被检测。因此，以其为依据，判定何时对患者停止抗病毒药物的使用具有一定的局限性。

乙型肝炎病毒在感染患者正常的肝细胞过程中，由病毒S基因编码的多肽的HBV外膜蛋白起到了重要的作用。正常健康者在受到HBV感染后的5到7天内，血清中就会有HBsAg的出现，在非活动携带状态期、免疫耐受期、再活动期和免疫清除期，H B V感染以及部分肝硬化和肝癌患者的血清中均可检测到H B s A g;在HBV感染的急性期，对患者的血清进行检测，仍旧可以检测到H B s A g，所以对患者血清进行HBsAg进行检测一直是临床上一种传统的诊断HBV感染的方法。对于HBsAg的检测方法，以往一般采用酶联免疫吸附法（ELISA）进行检测。有一部分文献以该方法进行HBsAg检测，得出了患者血清内HBsAg水平和HBV-DNA載量之间具有正的相关性的结论。但也有一部分文献认为患者血清内HBsAg水平和HBV-DNA载量之间之间不具有相关性。

近几年来，国际上对通过电化学发光法（ECLIA）检测血清HBsAg含量而非ELISA法，分析HBsAg含量与HBV-DNA表现出了较强的兴趣。本文也是在电化学发光法（ECLIA）的基础上，探讨电化学发光法（ECLIA）定量检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）与荧光定量PCR检测乙肝病毒DNA（HBV-DNA）载量的关系，希望对诊断和治疗乙型肝炎患者提供有意义的参考。本次研究结果显示，在170例患者当中，有151例患者血清检测结果为HBsAg阳性，所占比率为88.82%，有96例患者血清检测结果为HBV-DNA阳性，所占比率为56.47%，有96例患者的血清检测结果同时为HBsAg和HBV-DNA阳性，所占比率为56.47%。利用统计学知识，分析发现，HBsAg含量和HBV-DNA载量之间不具有相关性，P>0.05。本次研究认为HBsAg含量和HBV-DNA载量之间不具有相关性，这与一些文献的结论相一致，但是也与采用ELISA方法检测HBsAg的文献结论不同。不同原因可能在于所用方法不同，也可能是由于研究对象本身所具有的特性不同。

综上所述，ECLIA法定量检测HBsAg和荧光定量PCR法检测HBV-DNA载量之间不具有相关性，在对患者进行诊断时候，同时采用这两种方法检测HBsAg和HBV-DNA载量，可以为临床提供更优的诊断依据，提高治疗效果。

参考文献

[1]杨正南.磁微粒化学发光法检测HBsAg与荧光定量PCR检测HBV-DNA载量的关系[J].中国继续医学教育，2017，9（17）：63-64.

[2]杨正南.乙型肝炎病毒表面抗原低水平阳性与乙肝病毒核酸载量的相关性[J].当代医药论丛，2018，16（2）：174-175.

[3]周新媚，李秀华，李广平等.电化学发光免疫法与酶联免疫法检测乙肝病毒标志物比较研究[J].中国医药科学，2017，7（23）：116-118.

[4]陆正贤，倪沈珏，曹利华等.电化学发光免疫法定量检测乙肝病毒的临床应用[J].当代医学，2018，24（29）：107-108.

[5]刘昌文，季忠庶.ELISA法与电化学发光法在检测乙肝病毒血清标志物结果中的对比应用研究[J].中国医疗器械信息，2017，23（17）：98-99.

[6]林丽.电化学发光法与酶联免疫吸附法在乙肝病毒感染中的诊断价值[J].临床合理用药杂志，2019，12（12）：175-176.

作者简介：

张继东，男，1971年4月，河北张家口市，大学本科，副主任技师，检验研究， 河北省秦皇岛市第三医院检验科

曹立华，女，河北省秦皇岛市第三医院副院长 ，肝病专家

赵培利，女，河北省秦皇岛市第三医院医教科

杨延源，女，河北省秦皇岛市第三医院公共卫生科