N-乙酰半胱氨酸与磷霉素联用对几种下呼吸道感染病原菌的体外抑制作用研究

金晶 张立佳 席薇 郑雨捷 孙慎侠

（大连大学医学院检验系， 大连 116622）

近年流行学调查研究结果表明，下呼吸道感染是呼吸系统常见病之一，其常见病原菌以革兰阴性菌居多，其次是革兰阳性菌，革兰阴性菌主要有铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌，革兰阳性菌主要有金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌[1,2]等。近年来由于抗菌药物广泛使用，细菌耐药性在不断升高，尤其是泛耐药菌株的出现，给临床治疗带来很大困难[3]。如果两种药物存在协同和累加作用，在临床使用过程中，不仅降低了药物的使用剂量，同时可以减缓或减少耐药性的产生，减少药物的毒副作用。

N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysyeine，NAC)作为一种黏液溶解剂多年来应用于治疗各种呼吸系统疾病。磷霉素作为一种较早发现的天然抗生素，虽然抑菌效果不及头孢菌素类抗生素，但与其它抗生素的作用机制不同，且与其他抗菌药无交叉耐药性，同时具有减轻其他抗生素对肝、肾和神经系统的毒性、提高机体免疫机能[4]等作用，正逐渐受到临床的关注。

本研究选用引起下呼吸道感染的常见病原菌为供试菌，NAC和磷霉素为供试材料，从体外药敏试验方面观察NAC与磷霉素联用对常见下呼吸道病原菌的抑制作用，如果两种药物能够联合使用，将为临床上治疗由病原菌引起的下呼吸道感染提供一条有效途径。

1 材料与方法

1.1 材料

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureusATCC29213)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidisATCC12228)、乙型溶血性链球菌(Streptococcus hemolytic-βATCC19615)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniaeATCC49619)、大肠埃希菌(Escherichia coliATCC35218)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniaeATCC700603)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosaATCC27853)由大连大学医学检验技术研究中心提供，鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii多重耐药，购自温州康泰生物科技有限公司)。NAC、磷霉素购自大连天美生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 药液的配制和药敏纸片的制备

参考文献[5]配制药液，NAC储存液浓度为100mg/mL，磷霉素钠储存液浓度为10mg/mL，参考文献[6]制备药敏纸片，4℃保存备用。

1.2.2 NAC、磷霉素单药抑菌效果观察

K-B法测定磷霉素钠和NAC溶液对供试菌的抑菌圈直径，参考文献[6]，重复3次。MIC测定采用试管有限稀释法，参考文献[7]，重复2次。

1.2.3 NAC与磷霉素联合药敏试验结果观察

1.2.3.1 纸片扩散法初步观察两种药物联用抑菌作用

参考CLSI的纸片琼脂扩散法，略有改进。营养要求较低的供试菌用MH平板，营养要求高的供试菌采用MH平板(含5%小牛血清)。两纸片中心距离为两药敏纸片单独药敏实验时的抑菌环半径之和，置37℃恒温培养箱中孵育18～24h后，观察结果，重复2次。结果判定标准：根据两药抑菌圈交界处的夹角，初步判断是否存在累加或协同作用。如果两药抑菌圈交界处的夹角是平直或一种药物抑菌圈向另一种药物扩大，初步判定为两药存在协同作用，如果两种药物抑菌圈交界处的交角为钝角，初步判定为存在累加作用。

1.2.3.2 棋盘法初步观察两种药物联用抑菌作用

采用棋盘微量稀释法[8]观察供试菌的联合用药情况，重复两次。

2 结果

2.1 K-B法抑菌作用实验结果

K-B法测定单药的抑菌圈直径(mm)。结果见表1。

由表1可以看出，NAC对供试菌均具有较好的抑菌效果，磷霉素钠对肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌的抑菌效果较差，但对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌表现较强的抑菌效果。

表1 磷霉素钠及NAC对供试菌的抑菌环直径(X±S)(mm)

2.2 试管有限稀释法测定MIC结果

由表2可以看出，磷霉素钠对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均具有较好的抑菌作用；但对肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌抑菌效果较差，表明磷霉素对不同的呼吸道感染病原菌抑菌效果差异很大。

表2 磷霉素钠及NAC对供试菌的MIC结果(mg/mL)

2.3 K-B法联合药敏试验结果

K-B法结果表明NAC与磷霉素联用对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌可能存在累加或协同作用。部分实验结果见图1。

2.4 棋盘联合药敏试验结果

通过棋盘法联合药敏实验观察，NAC和磷霉素钠联合用药对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌的FIC指数分别为0.19、0.325、0.43 、0.125、0.42、0.33，均小于0.5，表现为协同作用。

3 讨论

近年来,由于抗生素不规范使用和滥用现象日益增多，加速了临床抗生素使用寿命降低和细菌耐药性产生[9]，因此抗菌药物合理使用是解决细菌耐药问题的关键之一。本研究发现作为化痰药的NAC，具有很好的抑菌效果[5]，在探索其与临床抗生素联合应用的过程中，发现NAC与磷霉素可能存在协同作用，体外联合药敏试验结果表明，两药联合使用存在协同作用，为开创多途径治疗呼吸系统疾病提供依据。

在研究NAC与抗生素联用的过程中，我们发现NAC与环丙沙星、磷霉素、头孢曲松具有很好的协同作用，与赵铁梅等[10]做的环丙沙星与NAC的联合作用相一致。NAC与头孢曲松协同作用非常明显，但棋盘稀释法实验过程中，出现了异常现象，进一步研究发现，两药高浓度混合，出现白色混浊的化学反应，因此推断头孢曲松钠与NAC存在配伍禁忌，临床使用过程中，要注意间隔用药。因此本实验先用NAC与磷霉素联合用药，虽然在临床上磷霉素不如头孢菌素类药物抑菌效果好，但其不易与其他药物产生交叉耐药性，且体内作用较体外作用强，我们将NAC和磷霉素联用，初步探究两者存在的协同抑菌作用，因此在治疗深部感染及难治性严重感染方面应具有广阔的应用前景。

在实验过程中，K-B法结果表明NAC对乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌具有较好的抑菌作用，但MIC结果与K-B法结果不一致，考虑原因可能是NAC抑菌效果受有机物干扰，该现象与邹玉明等[5]结果是一致的。

此外，本研究供试菌株为几种能引起呼吸道感染的病原菌的标准菌株，旨在探讨两药联合是否存在协同或相加作用，如拓展其在临床的进一步应用，还需要大量的临床实验来证明，该项工作有待于进一步地研究。

致谢:

感谢迟庆老师在专业知识的分析和创新意识的培养方面的培养，谢谢迟老师在实验过程中给予的悉心指导。感谢这篇论文所涉及的学者，感谢他们研究成果的帮助和启发。

图1 两药联合的抑菌作用