2013至2017年4 542例泌尿生殖系感染者NG、CT和UU感染特点分析

何学虎，梁小燕，董 洁，赵倩颖，赵 玥，郭雅琪，师志云，张玉英，赵志军*

(1.宁夏医科大学总医院 医学实验中心，宁夏 银川 750004；2.宁夏临床病原微生物重点实验室，宁夏 银川 750004)

性传播疾病(sexually transmitted diseases，STD)是指通过性行为传播的一类疾病。淋球菌(Neisseriagonorrhoeae，NG)、沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis，CT)和解脲脲原体(Ureaplasmaurealyticum，UU)是目前引起STD最常见的3种病原体，感染率逐年上升，与泌尿生殖系统感染及不孕不育、流产、早产等密切相关[1-4]，因此，对其感染进行早期诊断及早期治疗具有重要意义。为了解NG、CT、UU在宁夏地区泌尿生殖系统感染者中的感染特点，本研究采用实时荧光PCR法对2013年1月至2017年12月在宁夏医科大学总医院就诊的4 542例泌尿生殖系感染者棉拭子临床样本进行检测及分析，结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验材料 2013年1月至2017年12月在宁夏医科大学总医院就诊的4 542例泌尿生殖系感染无菌棉拭子标本，男性3 561例，平均年龄(33.57±9.47)岁；女性981例，平均年龄(34.14±9.68)岁。

1.1.2 主要试剂 淋球菌核酸检测试剂盒、沙眼衣原体核酸检测试剂盒、解脲脲原体核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)均购自深圳凯杰生物工程有限公司。

1.1.3 仪器与设备 医用冷藏箱(YC-300L，中科美菱)，医用低温箱(MDF-U548D-C，日本Panasonic)，生物安全柜(AS2-4S1，新加坡艺思高科技有限公司)，微量移液器(eppendorf，德国)，涡旋振荡器(VORTEX-5，海门市其林贝尔仪器制造有限公司)，干式恒温器(MK200-4，杭州奥盛仪器有限公司)，高速冷冻离心机(Neofuge1600R，力康生物医疗科技控股有限公司)，荧光定量PCR仪(Rotor-Gene Q，德国Qiagen)。

1.2 方法

1.2.1 标本采集及保存 用无菌棉拭子伸入女性宫颈1～2 cm或男性尿道2～4 cm，停留数秒并旋转2周后取出，立即放入无菌采样管中密闭送检，2～8 ℃保存不超过24 h，-20 ℃保存不超过3个月。

1.2.2 核酸提取 ①待测样本：向含有无菌棉拭子的采样管中加入1.5 mL无菌生理盐水，涡旋震荡充分漂洗，挤干棉拭子，将液体转入1.5 mL无菌离心管，12 000 r/min离心5 min，吸弃上清(尽可能不碰沉淀)，沉淀中加入50 μL DNA提取液，涡旋震荡充分混匀，瞬时离心后100 ℃干浴10 min，12 000 r/min离心5 min，保留上清备用；②质控品：分别取阴性质控品、弱阳性质控品和强阳性质控品各50 μL加入1.5 mL 无菌离心管，再加入50 μL DNA提取液，涡旋震荡充分混匀，瞬时离心后100 ℃干浴10 min，12 000 r/min离心5 min，保留上清备用。

1.2.3 试剂准备及加样 每次实验均设空白对照、阴性、弱阳性和强阳性质控。在试剂准备区中将试剂盒中的PCR反应液、HS-Taqplus酶和UNG酶取出，室温融化，涡旋混匀，瞬时离心，按每人份33.3 μL PCR反应液、0.7 μL HS-Taqplus酶和0.06 μL UNG酶配置反应体系，涡旋混合，瞬时离心，按34 μL/人分装至0.2 mL PCR反应管，转移至标本制备区，加入6 μL核酸(空白对照直接加入6 μL DNA提取液)，盖紧管盖。

1.2.4 PCR扩增 将PCR反应管转移至扩增区PCR仪上，记录样本摆放顺序，运行程序：37 ℃ 5 min，95 ℃ 5 min，95 ℃ 15 s、60 ℃ 40 s(40个循环)，反应体系40 μL，60 ℃收集荧光。

1.2.5 结果分析 所有结果均在质控在控的情况下判读，即空白对照、阴性质控测定结果为阴性(无Ct值或Ct值等于40)，弱阳性质控测定结果为阳性(26≤Ct值≤32)，强阳性质控测定结果为阳性(Ct值≤25)。当样本无Ct值或Ct值等于40，判为阴性；当37<样本Ct值<40，则视灰度区，应进行复检，复检结果Ct值<40，判为阳性，否则判为阴性；当样本Ct值≤37，判定为阳性。再分别统计NG、CT、UU总体感染情况，NG、CT、UU混合感染类型及分布，不同年龄段NG、CT、UU感染情况以及不同年份间NG、CT、UU感染情况。

1.2.6 统计分析 应用SPSS17.0软件，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 NG、CT、UU总体感染情况

检出3种病原体阳性共1 204例，总阳性率为26.51%(1 204/4 542)，NG、CT、UU单一病原体阳性率分别为26.31%(362/1 376)、15.21%(214/1 407)和35.70%(628/1 759)。男性阳性率为23.48%(836/3 561)，女性阳性率为37.51%(368/981)，阳性率有性别差异(P<0.01)。NG、CT阳性率男性显著高于女性(P<0.05)，UU阳性率女性显著高于男性(P<0.01)(表1、图1A)。

表1 NG、CT、UU总体感染情况Table 1 Overall infection of NG，CT and UU

2.2 NG、CT、UU混合感染类型及分布

4 542例患者中共检出NG、CT、UU不同类型的混合感染阳性者151例，阳性率为3.32%(151/4 542)，男、女性混合感染率分别为3.82%(136/3 561)和1.53%(15/981)，混合感染率有性别差异(P<0.01)。混合感染类型中，男性阳性率由高到低依次为CT+UU、NG+UU、NG+CT、NG+CT+UU；女性阳性率由高到低依次为CT+UU、NG+UU、NG+CT+UU、NG+CT。总体上混合感染类型以CT+UU和NG+UU为主，CT+UU与其他混合感染类型比较差异均有统计学意义(P<0.01)(表2、图1B)。

表2 不同性别间NG、CT、UU混合感染情况比较Table 2 Comparison of NG，CT and UU mixed infection among different genders

注：a表示与CT+UU感染率比较；b表示男女性之间总体混合感染率比较

2.3 不同年龄段间感染NG、CT、UU阳性率比较

不考虑性别因素，总阳性率以≤20岁年龄段最高，与其他年龄段比较差异有统计学意义(P<0.01)，NG和CT阳性率随年龄段的增加而减低，UU阳性率呈先降低后增加再降低趋势。考虑性别因素，男性患者总阳性率、NG和CT阳性率随年龄段的增加而减低，UU阳性率呈先降低后增加再降低趋势。女性患者总阳性率以21～30岁年龄段最高，其次为31～40岁年龄段，随年龄段的增加，NG、CT阳性率呈降低趋势，UU阳性率呈先降低后增加再降低趋势 (表3、图2)。

图1 NG、CT、UU单一感染和混合感染情况Fig.1 Single infection and mixed infection of NG，CT and UU*P<0.05；**P<0.01

表3 不同年龄段间NG、CT、UU感染情况比较Table 3 Comparison of NG，CT and UU infection among different age groups

注：*表示与≤20岁年龄段比较，P<0.01

图2 不同年龄段NG、CT、UU感染情况Fig.2 Infection of NG，CT and UU in different age groups

2.4 不同年份间感染NG、CT、UU阳性率比较

2013至2017年，不考虑性别因素，NG、CT、UU及总感染率呈上升趋势。考虑性别因素，男性NG、CT、UU及总感染率均呈上升趋势；女性NG、CT感染率呈下降趋势，UU感染率呈上升趋势，总感染率呈上升趋势(表4、图3)。

表4 不同年份间NG、CT、UU感染情况比较Table 4 Comparison of NG，CT and UU infection among different years

注：*表示与2013年比较，P<0.01

图3 不同年份NG、CT、UU感染情况Fig.3 Infection of NG，CT and UU in different years

3 讨 论

STD指通过性接触而感染的疾病，主要病变发生在生殖器部位。NG、CT、UU是STD中最常见的病原体，感染NG、CT、UU可引起泌尿生殖系感染，严重危害生殖健康[5]。人类是NG惟一的天然宿主，普遍缺乏对NG的自然免疫力，NG可通过性接触侵入泌尿生殖系统繁殖而引起化脓性感染，导致淋菌性尿道炎、盆腔炎、宫颈炎、散播性淋病等相关疾病[6]，此外，胎儿可经产道感染造成新生儿淋病性急性结膜炎[7]。CT专性寄生于活细胞内，可引起男性尿道炎和附睾炎，女性宫颈炎和盆腔炎等疾病，其感染具有无症状携带者多、易传播、流行率高等特点[8-9]。UU是一种条件致病微生物，也是迄今为止能独立生活和繁殖的最小原核细胞型微生物，可寄居于人类泌尿生殖系统引起非淋菌性尿道炎、男女性生殖系统感染，并与不育、早产、流产、低体重胎儿等疾病相关[10-11]。

目前，传统的病原体检测方法主要有涂片镜检、病原体特异性抗原检测、血清学试验、病原体的分离培养和鉴定等，但上述方法具有主观性强、敏感性低、检测周期长、操作繁琐、不易被检出等缺点，给临床诊断带来困难。荧光定量PCR技术(Fluorescence quantitative PCR，FQ-PCR)在闭管状态下进行扩增和分析，能大大减少扩增产物的污染，FQ-PCR检测NG、CT和UU的最低检测限达500 copies/mL，具有灵敏度高、特异性强、操作简便、检验周期短、检出率高等显著优势，能及时准确地提供检测数据辅助临床诊断，因而成为目前临床检验诊断中的常用方法[12]；与此同时，每次检测设定的空白对照、阴性质控、弱阳性和强阳性质控则进一步保证了阳性结果的可靠性。但是，FQ-PCR检测的是病原体核酸，并不能区分活菌和死菌，也无法检测出因病原体基因变异而出现的假阴性。对假阴性而言，理论上应用“金标准”培养法进行验证，但因临床上有对培养基中万古霉素敏感的菌株，加之存在不合理用药现象，“金标准”也可能存在假阴性[13]。因此，建议患者在治疗前或停药治疗两周后再行FQ-PCR法检测NG、CT和UU。

本研究中3种病原体总感染率为26.51%(1 204/4 542)，普遍低于国内报道的62.8%和64.18%[14-15]；据报道，北京和广州地区NG、CT、UU感染率分别为3.11%、7.49%、42.92%和3.0%、8.0%、45.4%[16-17]，本研究NG、CT、UU感染率分别为26.31%、15.21%和35.70%，NG、CT感染率高于北京和广州地区，UU感染率低于上述两地；结果显示，男性感染率(23.48%)低于女性(37.51%)，可能与男性症状明显、主动就医率高、就诊及时，女性症状复杂、主动就医率低、延误治疗有关。此外，本研究发现感染率有性别差异，NG、CT感染率男性显著高于女性，UU感染率女性显著高于男性，与李东等[18]的报道基本一致，但与王敬仁等[19]的报道却不同；证实性传播疾病的流行存在一定的地区差异性，可能与教育程度、医疗条件、当地气候以及民族文化等因素有关。

本调查中3种STD病原体混合感染151例，感染率为3.32%(151/4 542)，男女混合感染率有性别差异，其中3 561例男性中混合感染136例，感染率为3.82%(136/4 542)，981例女性中混合感染15例，感染率为1.53%(15/981)；无论男性还是女性，混合感染类型均以CT+UU为主、NG+UU次之，与文献报道的混合感染类型及分布相符[20]，但本研究混合感染率低于文献报道，其原因除了地区差异之外还可能与并非所有患者都同时检测3种STD病原体而造成一定数量的漏检有关，加之混合感染比单一感染危害更大，提示临床在诊疗过程中应同时检测3种病原体以防漏检而错过最佳治疗时机延误病情。

不同年龄段感染情况显示，不考虑性别因素，≤20岁年龄段感染率最高，21～40岁年龄段次之，随着年龄段的增加，感染率逐渐降低；考虑性别因素，男性≤20岁年龄段感染率最高，21～40岁次之，女性21～40岁年龄段感染率最高，≤20岁年龄段次之；与国外报道的20～45岁年龄段是STD高发人群不同[21]，本研究≤20岁年龄段占比最高，且与其他年龄段比较差异有统计学意义。提示除了将正处于性活跃及生殖高峰期的21～40岁青壮年列为主要传染源和高危人群外，还应重点加强对≤20岁人群的健康教育、性传播防护和体检工作，将其一并作为STD防治工作中的重点对象。

不同年份间感染情况显示，不考虑性别因素，总感染率及NG、CT、UU单一感染率呈上升趋势；考虑性别因素，男性总感染率及NG、CT、UU单一感染率也呈上升趋势，女性总感染率呈上升趋势，NG、CT感染率呈下降趋势，UU感染率呈上升趋势。数据证实，2013至2017年，无论总感染率还是3种STD病原体单一感染率均呈上升趋势，并且2014、2015、2017年感染率与2013年相比，差异均有统计学意义，这与张欠欠等[22]报道的2011至2015年3种STD病原体感染率呈上升趋势结果一致。

综上所述，STD患者中NG、CT、UU及总感染率较高，而且感染呈年轻化、逐年上升趋势，在一定程度上已经造成流行。分析其原因可能有不洁性行为、不了解或不重视STD知识致使个人防护不够、因症状较轻而忽视未及时得到治疗、隐瞒病情造成治疗困难、病原体之间的混合感染、抗生素滥用使病原体产生耐药。因此，首先应加强对人群的健康教育和科学知识的普及，使其正确认识STD和性行为，提倡洁身自爱；其次，对STD患者应同时检测多种病原体以明确诊断，力求早发现、早诊断、早治疗；再次，对不同地区、不同性别以及不同年龄段的高危人群进行定期体检和监测，全方位多角度地从源头上控制传播，减少对健康的危害。

本文回顾性分析研究显示，2013至2017年泌尿生殖系感染者中NG、CT、UU感染情况严重，感染率呈逐年上升趋势、感染年龄呈年轻化趋势；考虑性别因素，男性易感NG和CT，女性易感UU，因此，应提高警惕积极防治；同时，混合感染也较常见，提示泌尿生殖系感染者应同时检测多种STD病原体以防漏检。