高效液相色谱法测定芝麻丸中芝麻素的含量

曹亚兰，罗艳萍，罗锦杰，郑丽美

（广东一方制药有限公司，广东佛山 528244）

0 引言

芝麻丸为广东一方制药有限公司研发的产品，主要原料为黑芝麻，含有优质的蛋白质、丰富的矿物质，以及不饱和脂肪酸、维E和珍贵的芝麻素及黑色素，可延缓衰老、滋补肝肾、润养脾肺[1]。芝麻素是其主要活性成分之一，具有抗氧化、降低胆固醇、保护肝脏等生理活性功能[2-3]。试验采用高效液相色谱法（HPLC）测定芝麻丸中芝麻素的含量，为芝麻丸的品质控制提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

芝麻丸（批号：S20180903，S20180918，S20181021，S20181115，S20181201，S20181225，S20190110）广东一方制药有限公司提供；芝麻素对照品（批号：0836-200002），中国食品药品检定研究院提供。

1.2 仪器与设备

Aglient 1260型高效液相色谱仪，美国安捷伦公司产品；AB265-S/10型电子天平，瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司产品；KQ-500DE型超声波清洗器，昆明市超声仪器有限公司产品；JYL-C022E型九阳料理机，九阳股份有限公司产品；TDL-4000C型台式离心机，上海安亭科学仪器厂产品。

1.3 方法

1.3.1 色谱条件

色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×150 mm，5μm），流动相为80%甲醇，检测波长290 nm，对照品溶液进样量20μL，供试品溶液进样量10μL，流速0.8 mL/min，柱温25℃。

1.3.2 芝麻素对照品储备液

精密称取4.0 mg芝麻素对照品，置于200 mL量瓶中，用适量80%甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得20μg/mL的对照品储备液。

1.3.3 供试品溶液

精密称取粉碎后的芝麻丸约2 g，置于九阳料理机中，加入体积分数80%的甲醇溶液40 mL，均浆30 s，置于具塞离心管中，超声处理30 min，置于离心机中以转速4 000 r/min离心5 min，重复提取2次，合并上清液于100 mL量瓶中，用体积分数80%甲醇溶液定容至刻度，混匀，静置，取上清液用微孔滤膜（0.45μm滤膜）滤过，取续滤液，即得。

2 结果与分析

2.1 专属性考查

取芝麻素对照品储备液与供试品溶液，按上述色谱条件分别注入高效液相色谱仪测定。

芝麻素含量测定HPLC色谱图见图1。

图1 芝麻素含量测定HPLC色谱图

供试品溶液中其他未知成分与芝麻素分离完全，对测定无干扰，芝麻素的保留时间为6.7 min。

2.2 线性关系考查

精密移取芝麻素对照品储备液适量，分别配制质量浓度为1，2，4，10，20μg/mL系列芝麻素对照品溶液，分别进样20μL，按上述色谱条件进行测定，记录峰面积。以芝麻素峰面积积分值（mV×S）为纵坐标（Y）、芝麻素对照品溶液进样量（μg）为横坐标（X），进行线性回归，得回归方程为Y=1 453.7X+2.268 9（R2=0.999 9），结果表明芝麻素在0.02～0.40μg的范围内呈良好线性关系。

2.3 精密度试验

取芝麻素对照品溶液（10μg/mL），按上述色谱条件重复测定6次，每次进样量为20μL，芝麻素峰面积的RSD为0.16%，表明仪器精密度较好。

2.4 稳定性试验

按1.3.3的方法制备芝麻丸供试品溶液（批号：S20180903），按照上述色谱条件分别于0，1，2，4，6，8，12 h进行测定，每次进样量为10μL，测得芝麻素峰面积RSD为0.39%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.5 重复性试验

按1.3.3方法制备6份芝麻丸供试品溶液（批号：S20180903），按照上述色谱条件测定芝麻素的含量。芝麻丸供试品中芝麻素含量测定结果的RSD为2.06%，表明该方法重复性较好。

2.6 加样回收率试验

取已知含量的同一批芝麻丸供试品（批号：S20180903，含量为0.62 mg/g）适量，粉碎，取约1.0 g，精密称定，共9份，分别精密加入适量的芝麻素对照品，按1.3.3方法，制备低、中、高3个质量浓度水平的供试品溶液，在上述色谱条件下测定，计算回收率。

芝麻素的加样回收率试验结果见表1。

表1 芝麻素的加样回收率试验结果（9份样品）

由表1可知，芝麻素平均回收率为99.14%～100.02%，RSD为0.40%～1.45%。表明所制作的芝麻丸中芝麻素含量测定方法准确、可靠。

2.7 样品测定

按照1.3.3方法制备7批芝麻丸供试品溶液，按上述1.3.1色谱条件测定，计算芝麻丸中芝麻素含量。

样品测定结果见表2。

表2 样品测定结果（n=3）

3 结论

考查了超声处理和加热回流不同提取方式对芝麻丸中芝麻素提取的影响[4]，结果表明，2种提取方法对芝麻素的提取均较完全，测定结果可靠，没有显著性差异，最终采用超声处理30 min的提取方式。该方法操作简便、灵敏度高、结果准确，稳定性好，可为芝麻丸的质量控制与评价提供科学依据。