SATB2在卵巢黏液性肿瘤中的表达及意义

杨明月 马红艳 李秀清 孙杰 刘晓云

[摘要] 目的 檢测富AT序列结合蛋白2（SATB2）在原发性卵巢黏液性肿瘤和转移性结直肠黏液腺癌中的表达情况，分析SATB2表达对临床病理诊断工作的意义。 方法 选取2010年1月～2017年6月河北省沧州市人民医院收治的47例原发性卵巢黏液性肿瘤患者和48例转移性结直肠黏液腺癌患者的肿瘤组织及腹水样本的石蜡标本，免疫组织化学法检测石蜡标本中SATB2、细胞角蛋白7（CK7）、细胞角蛋白20（CK20）、尾型同源框转录因子2（CDX2）的蛋白表达水平。对比分析SATB2、CK7、CK20、CDX2在肿瘤组织及腹水样本中的表达情况，同时，分析SATB2联合CK7、CK20、CDX2在判定肿瘤来源方面的敏感性、特异性。 结果 SATB2的表达与患者年龄、肿瘤直径无关（P > 0.05），而与组织分化程度、病理分型、累及卵巢范围与临床分期有关（P < 0.05）。SATB2、CK7、CK20、CDX2的表达与卵巢黏液性肿瘤来源有关（P < 0.05）。SATB2联合CK7在判定原发性卵巢黏液性肿瘤及转移性结直肠黏液腺癌来源的敏感性、特异性方面明显高于CK20、CDX2。 结论 SATB2在鉴别肿瘤来源方面有特异性，对临床病理诊断工作有应用价值。

[关键词] 富AT序列结合蛋白2;卵巢黏液性肿瘤;临床病理诊断;肿瘤标志物

[中图分类号] R737.31          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）07（b）-0129-04

Expression and significance of SATB2 in ovarian mucinous tumors

YANG Mingyue   MA Hongyan   LI Xiuqing   SUN Jie   LIU Xiaoyun

Department of Pathology， Cangzhou People′s Hospital， Hebei Province， Cangzhou   061000， China

[Abstract] Objective To determine the expression of special AT-rich sequence binding protein 2 （SATB2） in primary ovarian mucinous carcinoma and metastatic ovarian mucinous adenocarcinoma from colon and rectum， and analyze its significance for clinicopathological diagnosis. Methods Forty-seven cases of patients with primary ovarian mucinous tumors and 48 cases of patients with metastatic ovarian mucinous adenocarcinoma from colon and rectum treated in Cangzhou People′s Hospital of Hebei Province from January 2010 to June 2017 was selected. The expression of SATB2， cytokeratin 7 （CK7）， cytokeratin 20 （CK20）， caudal-regulated homeobox transcription factor 2 （CDX2） in paraffin specimens of both tumor tissues and ascites was determined by the immunohistochemical method. The expression of SATB2， CK7， CK20 and CDX2 in tumor tissues and ascites was analyzed and compared. The sensitivity and specificity of SATB2 combined with CK7， CK20 and CDX2 for the diagnosis of the origin of ovarian mucinous tumors was analyzed. Results The expression of SATB2 was not related to patient′s age and tumor diameter （P > 0.05）， but related to the degree of tissue differentiation， pathological classification， ovarian involvement and clinical stage （P < 0.05）. The expression of SATB2， CK7， CK20 and CDX2 was related to the origin of ovarian mucinous tumors （P < 0.05）. The sensitivity and specificity of SATB2 combined with CK7 in determining the origin of primary ovarian mucinous tumors and metastatic colorectal mucinous adenocarcinoma were significantly higher than CK20 and CDX2. Conclusion SATB2 is specific in distinguishing tumor origin， it is valuable for clinical pathological diagnosis.

[Key words] Special AT-rich sequence binding protein 2; Ovarian mucinous tumor; Clinicopathological diagnosis; Tumor marker

卵巢黏液性肿瘤是妇科常见的肿瘤，传统认为发病高峰年龄为60周岁以上，但近年来发病年龄呈现年轻化趋势[1]。卵巢黏液性肿瘤包括卵巢黏液性腺瘤、卵巢交界性黏液性肿瘤和卵巢黏液性腺癌，其中黏液性腺瘤与交界性黏液性肿瘤为良性或低度潜在恶性，黏液性腺癌为恶性肿瘤[2]。卵巢黏液性肿瘤来源众多，可由卵巢原发，亦可由其他部位转移而来，转移性的卵巢黏液性肿瘤多为恶性肿瘤、晚期肿瘤，预后较差[3]，因此合理制订临床诊疗方案必须明确诊断卵巢黏液性肿瘤的来源。在诸多辅助诊断手段之中，免疫组化法由于其较高的敏感性和特异性，已成为目前临床病理诊断不可或缺的技术手段之一[4]。本研究选取近期的研究热点之一，富AT序列结合蛋白2（special AT-rich sequence binding protein 2，SATB2）作为主要研究对象，采用免疫组化法检测肿瘤组织与腹水中SATB2、细胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）、细胞角蛋白20（cytokeratin 20，CK20）、尾型同源框转录因子2（caudal-regulated homeobox transcription factor 2，CDX2），以探究患者腹水中SATB2的表达在卵巢黏液性肿瘤临床病理诊断方面的作用与临床应用潜力。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取河北省沧州市人民医院（以下简称“我院”）病理科存档蜡块95例。标本取自2010年1月～2017年6月我院收治的卵巢黏液性肿瘤患者，均经病理科确诊为卵巢黏液性肿瘤。患者年龄31～74岁，平均（57.31±11.09）岁;其中肿瘤最大直径<10 cm者26例，≥10 cm者69例;原发性卵巢黏液性肿瘤47例（双侧黏液性腺瘤10例，交界性黏液性肿瘤22例，黏液性腺癌15例），转移性结直肠黏液腺癌48例（均为黏液性腺癌）;累及单侧卵巢者24例，累及双侧者71例;临床分期Ⅰ～Ⅱ期者33例，Ⅲ～Ⅳ期者62例。纳入标准：①肿瘤组织、腹水样本的石蜡标本保存完整、充分;②临床病历资料完整。排除标准：①合并慢性盆腔炎、子宫内膜异位症等其他影响生物学标志物的疾病;②肿瘤组织中混合有畸胎瘤;③合并其他影响免疫组化结果的疾病;④术前经放、化疗等其他抗肿瘤手段治疗。本研究经我院医学伦理委员会批准，患者及家属知情同意。原发性卵巢黏液性肿瘤和转移性结直肠黏液腺癌患者一般情况比较差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。见表1。

1.2 方法

1.2.1 SP免疫组织化学法  将石蜡标本常规脱蜡、水化。PBS冲洗。加入枸橼酸盐缓冲溶液，高温高压20 min修复抗原。PBS冲洗。室温孵育10 min，滴加一抗，4℃冷藏过夜孵育。取出放置至室温，PBS冲洗，滴加生物素二抗，室温孵育20 min。PBS冲洗，DAB染色，苏木精复染，反蓝。常规制片、封片。本研究一抗分别为兔SATB2多克隆抗体、鼠抗人CK7多克隆抗体、兔抗人CK20多克隆抗体、兔抗人CDX2单克隆抗体，均购自上海煊翎生物科技有限公司。

1.2.2 结果判定  本研究由经验丰富的病理科医师以双盲法在镜下进行观察判定，以PBS代替一抗作为阴性对照。SATB2蛋白染色定位于细胞核，CK7蛋白、CK20蛋白定位于细胞质，CDX2蛋白阳性则可见细胞质/核均染色，出现棕黄色至褐色颗粒视为阳性。随機取400倍光学显微镜下5个视野，每个视野至少含有50个细胞，计算所有观察细胞中阳性染色细胞所占百分比，结果取所有百分比的算术平均数。当阳性细胞率≥5%时，视为阳性（+）表达，<5%时，视为阴性（-）表达。敏感性=真阳性/（真阳性+假阴性）×100%;特异性=真阴性/（真阴性+假阳性）×100%。

1.3 统计学方法

采用软件SPSS 22.0进行统计学处理，计数资料比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 SATB2在卵巢黏液性肿瘤患者腹水、肿瘤组织中的表达

免疫组织化学染色结果显示，来源于同一患者的卵巢黏液性肿瘤组织、腹水样本中SATB2的表达结果判定相同。见图1（封四）。SATB2的表达与患者年龄、肿瘤直径无关（P > 0.05），而与组织分化程度、病理分型、累及卵巢范围与临床分期有关（P < 0.05）。见表2。

2.2 卵巢黏液性肿瘤组织及腹水样本中SATB2、CK7、CK20、CDX2的表达

免疫组织化学染色结果显示，来源于同一患者的卵巢黏液性肿瘤组织、腹水样本中CK7、CK20、CDX2的表达结果判定相同。见图2（封四）。SATB2、CK7、CK20、CDX2的表达与卵巢黏液性肿瘤来源有关（P < 0.05）。见表3。

SATB2联合CK7在判定原发性卵巢黏液性肿瘤及转移性结直肠黏液腺癌来源的敏感性、特异性方面，明显高于CK20、CDX2。见表4。

3 讨论

原发性卵巢黏液性肿瘤与卵巢转移性腺癌组织形态学上十分相似，病理医师甚至在组织学检查后仍将转移瘤误诊为卵巢原发性肿瘤，这为临床的鉴别诊断带来巨大困难[5-6]，已成为妇科病理诊断的难点之一。明确卵巢黏液性肿瘤的来源，对于临床诊疗工作具有多方重要意义：原发性卵巢黏液性肿瘤患者，包括良性黏液性腺瘤、交界性黏液性肿瘤与局限于卵巢的早期黏液性腺癌，经手术治疗后预后良好，不需要辅以放、化疗等其他抗肿瘤手段治疗，术后5年总生存率达90%以上[7-9];与此相反，卵巢转移性腺癌患者预后较差，往往需要联合其他抗肿瘤手段[10]，因而目前对于原发性卵巢黏液性肿瘤与卵巢转移性腺癌患者的治疗方案并不相同。因此为促进临床上合理制订诊疗方案，以改善患者预后，提高患者生活质量，寻找操作简便、特异性高的鉴别诊断手段是当务之急。

免疫组织化学法是一种利用特异性的抗原-抗体结合反应来定位和检测样本中特定物质的一种技术手段，近年来随着技术的不断发展，在临床诊断中被越来越广泛的应用。卵巢黏液性肿瘤的经典免疫组织化学法一般包括CK7、CK20和CDX2[11-12]。尽管这一联合检测方案迄今已得到许多研究[13-14]的支持，但其敏感性与特异性仍未达到理想状态，尤其在鉴别诊断卵巢转移性结直肠腺癌时[15]。同时，肿瘤组织的获取难度较大，费用较高，易给患者造成较大的痛苦，不利于临床推广。

SATB2是一种核基质结合蛋白，作为转录调控因子，其对基因转录的调控可能通过改变染色质构象而实现[16]。近年来的研究显示，SATB2的异常表达可能与肿瘤的发生与发展密切相关。SATB2在口腔鳞癌中高表达[17];而在非小细胞肺癌中则低表达[18]。Seong等[19]发现，SATB2在骨肉瘤中起促进癌细胞侵袭与转移的作用。更为重要的是，SATB2在下消化道的表达呈现高丰度[20]，因此推测SATB2可以作为结直肠原发灶的免疫标志物。

本研究结果显示，SATB2的表达情况与卵巢黏液性肿瘤的组织分化程度、病理分型、累及卵巢范围与临床分期有关，且在原发性卵巢黏液性肿瘤与卵巢转移性结直肠腺癌中的表达差异显著，因此SATB2可能参与了卵巢黏液性肿瘤的发生与恶性发展过程。而SATB2在黏液性癌肿瘤组织与腹水中阳性表达率显著高于其余类型，因此可以推测SATB2在卵巢黏液性肿瘤中的作用与Seong等[19]发现的骨肉瘤类似，即促进肿瘤的恶性进展过程。

通过与经典免疫指标对比，本研究发现将SATB2加入免疫组织化学法检测的对象中，能够显著提高鉴别卵巢黏液性肿瘤来源的敏感性与特异性。SATB2表达阳性，提示肿瘤很可能为结直肠来源，若与其他指标结合检测，则能将敏感性与特异性进一步提升，与Dragomir等[21]和何兴状等[22]的临床前瞻性研究结果相同。因而增加SATB2作为检测卵巢黏液性肿瘤来源的免疫指标很有价值。同时，本研究结果中原发性卵巢黏液性肿瘤中仅有1例呈SATB2蛋白表达阳性，回顾该患者影像学资料发现，该患者肿瘤组织中清晰可见成熟畸胎瘤成分，因此可以推测，当不见成熟畸胎瘤成分时，SATB2蛋白表达阳性的肿瘤不可能来源于卵巢。

更为重要的是，通过对比来源于同一患者的肿瘤组织与腹水的检测结果，本研究发现，肿瘤组织与腹水的免疫组织化学显色类似，结果判定相同，因此可以用腹水的免疫组织化学检测结果替代肿瘤组织的检测结果。相较于肿瘤组织，腹水获取方便，能够有效避免不必要的二次手术，是更易施行的检测手段。

综上所述，本研究发现，SATB2可能参与了卵巢黏液性肿瘤的发生与发展，且在腹水与肿瘤组织中的免疫组化结果判定相同。将检测患者腹水中SATB2的表达情况加入经典免疫组化检测方案，有助于提高卵巢黏液性肿瘤来源鉴别诊断的敏感性与特异性，因此联合检测SATB2有临床应用价值。

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