实验室检测在规模化猪场伪狂犬病免疫程序调整中的应用

艾启青 刘 燕 林 琳

福州科免生物科技有限公司 福州 350022

伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies Virus，PRV）引起的一种高度接触性传染病，在猪群中主要引发母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道综合征等。目前，虽然我国使用PRV基因工程缺失疫苗对该病进行防控，但该病毒隐性感染情况还是十分普遍。在隐性感染情况下，病毒会引起猪免疫抑制、生长速度和繁殖性能下降等，严重危害猪群健康，并造成巨大经济损失。现在对于伪狂犬病实验室检测已经有了比较成熟的方法，通过实验室检测可对猪群伪狂犬病免疫进行指导，最终达到伪狂犬病净化的目的。

1 材料与方法

1.1 血清来源 血清全部来源于福建宁德某存栏2 000头母猪的规模化猪场，被检血清均为随机采集，待配后备母猪（250日龄左右）采血20份、繁殖母猪（怀孕40 d母猪、怀孕70 d母猪、哺乳母猪）采血15份、公猪采血20份。育肥猪为 60日龄、90日龄、120日龄和160日龄，每组采血20份。

1.2 免疫程序 该猪场猪群均免疫过PRV-gE基因缺失疫苗。免疫程序调整前，种猪用某国产C株伪狂犬病疫苗每年免疫4次，每次肌注1头份/头。商品猪出生后喷鼻免疫1头份/头，60日龄和90日龄各肌注1头份/头。待配后备母猪120日龄前按照育肥猪的免疫程序，转为后备栏后分别在160日龄和220日龄各肌注1头份/头。检测后的伪狂犬病疫苗免疫程序调整为：每年免疫4次不变，肌注改为1.5头份/头，商品猪出生后喷鼻1头份/头，60日龄和110日龄各肌注1头份/头。待配后备母猪120日龄前按照商品猪的免疫程序不变，转到后备栏后160日龄和220日龄各肌注1.5头份/头。

1.3 猪伪狂犬病抗体检测试剂盒 PRV-gE抗体检测试剂盒由西班牙海博莱生物大药厂生产，PRV-gB抗体检测试剂盒由Biocheck英国分公司生产。

1.4 主要器材 酶标仪，购自BioTek公司；单道移液器（100～1 000 μL)、多通道移液器(5～10 μL、30～300 μL)等，购自 eppendorf公司；Micro CL 17R 离心机购自Thermo公司。

1.5 检测方法 猪伪狂犬病PRV-gE和PRV-gB抗体检测的具体操作步骤参照试剂盒说明书进行。1.6 结果判定 gE抗体结果判定：如果样品孔的IN%小于40.0，则判为阴性；如果IN%大于或等于40.0，且小于或等于45.0，则判为可疑；如果IN%大于45.0，则判为阳性。gB抗体结果判定：S/P≤0.499，即抗体效价≤1070，判定为阴性；S/P≥0.500，即抗体效价≥1071，判定为阳性。

2 结果与分析

2.1 伪狂犬病免疫程序调整前抗体检测结果

2.1.1 gE抗体检测结果 不同日龄商品猪伪狂犬病gE抗体数据见表1。60日龄、90日龄、120日龄和160日龄商品猪伪狂犬病gE抗体阳性率分别为55%、15%、10%和100%。待配后备母猪、怀孕40d母猪、怀孕70d母猪、哺乳母猪和公猪的阳性率分别为15%、87%、73%、93%和10%。繁殖母猪gE抗体平均阳性率为81%。60～160日龄商品猪的gE抗体阳性率出现先下降后上升的趋势（见图1）。

表1 免疫程序调整前不同阶段猪群gE抗体检测结果

图1 免疫程序调整前不同阶段猪群伪狂犬病gE抗体阳性率

2.1.2 gB抗体检测结果 不同阶段猪群gB抗体检测结果见表2。除60日龄商品猪和待配后备母猪的gB抗体阳性率分别为85%和95%外，其他各组均为100%。商品猪gB抗体阳性率变化不明显（见图2）。

2.2 伪狂犬病免疫程序调整后抗体检测结果

2.2.1 gE抗体检测结果 不同阶段猪群伪狂犬病gE抗体数据见表3。60日龄、90日龄120日龄和160日龄商品猪的伪狂犬病gE抗体阳性率分别为50%、25%、5%和0%；待配后备母猪gE抗体阳性率为0%；怀孕40d母猪、怀孕70d母猪、哺乳母猪和公猪的 gE抗体阳性率分别为 73%、80%、80%和15%。繁殖母猪gE平均阳性率为78%，60～160日龄商品猪gE抗体阳性率随日龄增加逐渐消失（见图3）。

2.2.2 gB抗体检测结果 不同阶段猪群伪狂犬病gE抗体数据见表4。60日龄、90日龄、120日龄和160日龄商品猪伪狂犬病gB抗体阳性率分别为75%、85%、30%和70%。待配后备母猪、繁殖母猪和公猪抗体gB抗体阳性率均为100%。60～160日龄商品猪gB抗体阳性率随着免疫程序的调整而出现了先升高后下降然后再升高的过程（见图4）。

表2 免疫程序调整前不同阶段猪群gB抗体检测结果

图2 免疫程序调整前不同阶段猪群gB抗体阳性率

表3 免疫程序调整后不同阶段猪群gE抗体检测结果

图3 免疫程序调整后不同阶段猪群gE抗体阳性率

表4 免疫程序调整后不同阶段猪群gB抗体检测结果

图4 免疫程序调整后不同阶段猪群gB抗体阳性率

3 结论与讨论

1）目前，我国用于预防PR的疫苗主要是gE基因缺失的疫苗，这种疫苗的使用可以通过血清学方法区分免疫猪和自然感染猪[1]。配套使用PRV gE抗体检测试剂盒能够快速、方便、准确检测PR野毒抗体，从而评估猪群PR野毒感染状况。Biocheck猪伪狂犬病gB抗体检测试剂盒也是一种极其敏感的检测方法，非常微量的抗体水平就能够产生阳性结果。

2）gE抗体检测结果表明，该猪场种猪野毒感染率高，繁殖母猪两次gE抗体检测感染率平均分别为81%和78%，属于PR野毒高阳性场。由于猪群感染PR后终生带毒，所以，免疫程序调整后母猪PR阳性率并无太大变化。但是通过增加免疫剂量，阴性繁殖母猪和公猪的伪狂犬病gB抗体比免疫程序调整前要高。免疫剂量的增加虽然不能清除已经感染的母猪体内的PRV，但是能大大减少感染猪排毒量和排毒时间。通过增加伪狂犬病疫苗的免疫剂量使待配后备母猪保持了PR野毒阴性状态，gB抗体滴度也更高。

3）周绪斌等[2]报道，随着日龄的增长，猪体内母源抗体逐渐消失，120日龄时基本消失，保护力也消失。伪狂犬病免疫程序调整前，60～120日龄商品猪gE抗体是逐渐下降的，分析这些阳性猪中的gE抗体以母源抗体为主；160日龄猪的gE抗体主要为感染PRV后产生的抗体，所以商品猪群感染PRV的节点为120～160日龄。通过对90日龄商品猪gB抗体的检测，可知该阶段gB抗体滴度仍然较高，此时免疫对疫苗的免疫效果会有一定的影响。推迟伪狂犬病疫苗三免时间至110日龄后，160日龄时检测gE抗体，也出现了阴性状态。

4）对于伪狂犬病野毒感染率较高的猪场，合理的疫苗免疫程序和疫苗质量只是改善猪群健康的方法之一。还应做好以下方面：（1）公猪和后备母猪的净化。伪狂犬病病毒可以通过精液进行传播，公猪群的带毒率直接影响整个猪群的伪狂犬病流行，通过监测公猪群的感染与免疫状态，淘汰感染公猪是控制伪狂犬病的有效途径。后备母猪在入群前应进行猪伪狂犬病gE抗体筛查，对抗体阳性者不予入群，保证入群后备母猪质量，进而达到控制、净化种猪群的目的。（2）商品猪后期gE转阴。了解猪场仔猪伪狂犬病母源抗体的消长规律，制定有效、个性化的免疫程序。商品猪后期转阴可以减少猪场内病毒数量，更有利于猪场伪狂犬病的控制。（3）注重饲养管理。为了防止规模场猪感染伪狂犬病，并加强对高致病性蓝耳病、圆环病毒病的预防工作，应该对猪瘟、高致病性蓝耳病进行免疫。规模场猪必须做到“全进全出”，避免在外地购买到带毒猪和患猪，保证猪群的健康与安全。此外，还应将防寒防暑工作做到位，时刻打扫猪舍，保持其清洁，认真进行环境消毒灭源，不能让犬、猫等进入猪场，这对于规模场猪伪狂犬病防控有积极作用。