TIPE2在稽留流产患者血清、绒毛与蜕膜组织中的表达及临床意义

林 娟，关红琼，王洪伟

(海南医学院第二附属医院妇产科，海南东方 570311)

流产是指产妇妊娠后在孕周不超过28周、且胎儿不超过1kg的条件下发生的终止妊娠行为[1]。而流产分为很多种，例如早期流产、晚期流产、自然流产还有人工流产等，而稽留流产是指胚胎或者胎儿已经死亡而仍稽留于宫腔内，正常情况下一般多在症状产生后1～2个月内将会排出的孕产物在停止发育后2个月尚未自然排出的情况，稽留流产又称为过期流产或死胎不下[2-3]。稽留流产是产妇在早期最为常见的并发症之一，其发病机制十分复杂，临床上对此并未有明确的研究进展以及有效的防治方法[4]。但是其近年来发病率不断高涨的同时，也导致产妇再次发生妊娠时增加其流产概率，严重地影响到了产妇以及产妇家属的身心健康[5]。基于以上所述情况，本实验以40例稽留流产产妇与45例健康产妇作为研究对象，探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)在稽留流产患者血清、绒毛与蜕膜组织中的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1一般资料 将2015年9月至2018年4月在本院妇产科就诊并经过临床诊断的40例稽留流产产妇纳入观察组；另外，将同期在本院行产检的45例健康产妇纳入对照组。对照组：年龄20～38岁，体质量48～80 kg，孕次1～4次，孕周9～21周。观察组：年龄19～38岁，体质量46～79 kg，孕次1～4次，孕周39～43周。两组产妇年龄、体质量、产妇类型、孕次、孕周等比较差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性，见表1。纳入标准：(1)符合的稽留流产诊断标准[6]的产妇；(2)知情同意并签署自愿参与本次研究相关文件。排除标准：(1)椎管有畸形、背部皮肤感染或者有外伤史的产妇；(2)有妊娠并发心脏病、药物过敏的产妇；(3)有胎盘早剥、前置胎盘、胎儿窘迫等的产妇；(4)有阴道分娩禁忌证和麻醉禁忌证的产妇。

表1 对照组和观察组产妇一般资料比较

1.2方法

1.2.1血清、绒毛以及蜕膜组织中各临床指标的测定 (1)所有受试者均保证清晨空腹，次日早晨约8:00时抽取肘静脉5 mL血液，采用硝酸还原酶法以及酶联免疫吸附双抗体夹心法测定受试者的超氧化物歧化酶(SOD)、转录因子-κB(NF-κB)、腺苷脱氨酶(ADA)以及诱导型-氧化氢合酶(iNOS)等生化指标。(2)采集受试者的绒毛以及蜕膜组织，装入1.5 mL EP管中，并加入500～1 000 μL 的无液氮型样品RNA保存液(RNAfixer)，做好相应标记，置于-80 ℃保存。立刻用 DEPC水冲洗，迅速投入液氮，然后保存于-80 ℃低温水箱中。采用实时荧光定量 PCR检测两组绒毛、蜕膜组织中SOD、NF-κB、ADA以及iNOS等指标mRNA水平，根据2-ΔΔCT法，得出目的基因的量等于2-ΔΔCT的值[7-8]。

1.2.2血清、绒毛以及蜕膜组织中TIPE2表达量的测定 (1)各抽取两管血清、绒毛及蜕膜组织血置于3.2%枸橼酸钠1:9真空抗凝管中放入离心机，在4 ℃、4 000 r/min下离心15 min后放入空试管中；(2)用TRlzol试剂将miR从血浆中分离；(3)将提取的TIPE2使用miR c DNA第一链合成试剂反转录成单链c DNA；(4)应用SYBR Green实时荧光技术定量检测血清、绒毛及蜕膜组织中TIPE2的表达量[9]。

2 结果

2.1比较两组血清中 TIPE2及各生化指标的表达 两组受试者血清ADA水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，病例组患者血清TIPE2、SOD、NF-κB及iNOS水平明显高于对照组(P<0.05)，病例组患者血清SOD水平明显低于对照组(P<0.05)，见表2。

2.2比较两组绒毛组织中 TIPE2及各指标的mRNA表达 两组受试者绒毛组织中ADA mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，病例组患者绒毛组织中的 TIPE2、NF-κB及iNOS mRNA表达明显高于对照组(P<0.05)，病例组患者绒毛组织中的 SOD mRNA水平明显低于对照组(P<0.05)，见表3。

2.3两组蜕膜组织中TIPE2及各指标mRNA表达水平的比较 两组受试者蜕膜组织中ADA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，病例组患者蜕膜组织中TIPE2、SOD、NF-κB及iNOS的表达水平明显高于对照组(P<0.05)，病例组患者蜕膜组织中SOD的表达水平明显低于对照组，见表4。

2.4病例组TIPE2与各项生化指标的相关性分析 在病例组中，血清、绒毛及蜕膜组织中TIPE2与TIPE2、NF-κB及iNOS表达均呈正相关，血清、绒毛及蜕膜组织中TIPE2与SOD表达呈负相关(P<0.05)，与年龄之间均无统计学意义(P>0.05)，见表5。

表2 两组血清TIPE2及各生化指标水平的比较

表3 两组绒毛组织中 TIPE2及各指标mRNA表达水平比较

表4 两组蜕膜组织中TIPE2及各指标的mRNA表达比较

表5 病例组TIPE2与各项生化指标的相关性分析

3 讨论

临床上导致稽留流产发生的原因有很多种，例如胎儿染色体的异常、产妇生殖器官的感染、产妇内分泌系统的紊乱及解剖异常等各个方面的问题，同时还有许多的机制尚未明确[10]。稽留流产对产妇及家属造成的影响至关重要，尤其是对产妇的身心造成了巨大的伤害，同时也增加了整个家庭在心理及经济等各个方面的负担[11-12]。稽留流产在作为妇产科常见病的同时，其发病机制及病因尚无法阐明，因此在治疗及防治该病方面尚无很好的针对性和有效的措施[13]。

本次实验采用硝酸还原酶法及酶联免疫吸附双抗体夹心法测定受试者血清中的SOD、NF-κB、ADA及iNOS等生化指标，并且采用免疫组化SP法染色并记录绒毛及蜕膜组织的SOD、NF-κB、ADA及iNOS等生化指标水平。应用SYBR Green实时荧光技术定量检测血清、绒毛及蜕膜组织中TIPE2表达量。实验结果显示两组受试者血清、绒毛及蜕膜组织中ADA表达差异无统计学意义(P>0.05)；病例组患者血清、绒毛及蜕膜组织中的TIPE2、NF-κB及iNOS表达明显高于对照组，病例组患者绒毛组织中的 SOD水平明显低于对照组。其原因可能是因为TIPE2在正常的妊娠期产妇的体内均存在着表达，起作用主要在于定位绒毛膜细胞中的滋养细胞及合成滋养细胞，而其表达量随着产妇妊娠周期的增加而不断升高，并且通常在在产妇孕周期的第10周达到最高值，而后急剧下降[14-15]。而稽留流产的产妇由于各个方面的问题导致其TIPE2表达量在不断升高的同时，不增下降，从而导致滋养细胞的侵袭力不断地降低，加速导致了稽留流产的发生[16]。

而在进行比较的同时，采用相关性分析方法探讨病例组 TIPE2与各项生化指标的相关性。结果显示，在病例组中，血清、绒毛及蜕膜组织中TIPE2与TIPE2、NF-κB及iNOS表达均呈正相关，血清、绒毛及蜕膜组织中TIPE2与SOD表达呈负相关，与年龄无相关性。从上述结果中可以推断TIPE2表达量过高极有可能与稽留流产的发生相关，可能是TIPE2介导的某些特殊的细胞发生了黏附或者连接，并且通过一系列的作用机制或者调节机制使得滋养细胞的侵袭浸润能力不断地下降[17]。而上述效应使得胎盘在形成过程中动脉形态不良及血管重塑受阻，导致产妇无法形成有效的胎盘血管网、胎盘着床浅，致使胚胎停止了生长发育等进而导致了各种妊娠失败的结局[18-19]。

综上所述，稽留流产可能与产妇血清、绒毛与蜕膜组织中TIPE2表达水平的升高相关，与TIPE2、NF-κB及iNOS表达均呈正相关，与SOD表达呈负相关。