葶苈生脉方对慢性充血性心力衰竭大鼠NT-proBNP、cTnl及心功能的影响※

张晓雪郭秋红李文瑾张纳博田小超

（1 河北中医学院药学院，河北 石家庄 050200；2 河北医科大学第二医院心内科，河北 石家庄 050000）

充血性心力衰竭（congestive heart failure，CHF） 是由于冠心病、肺心病、高心病等长期病变诱发心肌受损出现收缩或舒张功能异常的一种疾病，常伴随神经内分泌过度激活和心室重构，是心血管疾病患者的主要死亡原因。N末端B型利钠肽前体（NT-proBNP） 和心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）是目前诊断CHF重要标志物，并在疗效评价和预后评估中具有重要意义［1］。国家级名老中医邢月朋根据多年临床经验总结出治疗气虚血瘀、阳虚水停型CHF的有效方剂葶苈生脉方，能有效改善患者症状，提高生活质量，减少再住院率。本研究拟通过葶苈生脉方对CHF大鼠血清NT-proBNP、cTnl及心功能的影响，探讨其作用机制并评估其治疗效应。

1 材料与方法

1.1 实验动物 清洁级SD雄性大鼠50只，体重（180±20）g，由河北医科大学实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK（冀） 2013-1-003。

1.2 药物及试剂 葶苈生脉方由葶苈子、桂枝、白术、茯苓、猪苓、泽泻、红参、麦冬、五味子、枳实、川芎、丹参、车前子、郁李仁等组成，饮片由石家庄乐仁堂提供，学校制剂实验室水煎浓缩至所需浓度；卡托普利片购自中美上海施贵宝制药有限公司；小动物超声成像系统Vevo®2100购自富士VisualSonics公司；酶联免疫试剂盒（ELISA）均购自美国ADL公司；电化学发光法试剂盒购自德国罗氏诊断有限公司。

1.3 造模与分组 将50只大鼠随机分为5组（假手术组、模型组、葶苈生脉方低、高剂量组及对照组），每组10只。参照Anversea文献［2］行腹主动脉缩窄术制备CHF大鼠模型。5组大鼠分别腹腔注射1%戊巴比妥钠（40 mg/kg）进行麻醉，选取仰卧体位，定位剑突后向下沿腹正中线逐层剖开，分离腹主动脉，除假手术组只挂线不结扎外其余各组行动脉缩窄术，将7号注射器针头与腹主动脉平行放置，0号手术线结扎后将针头抽出，使腹主动脉直径缩窄到60%～70%。

造模4周后开始给药（水）干预，假手术组、模型组分别给予蒸馏水灌胃，对照组给予卡托普利（4 mg/kg），葶苈生脉方低、高剂量组分别给与20 g/kg、40 g/kg浓缩水煎液。每次给药剂量为1 mL/100 g，日1剂，持续8周。

1.4 指标检测

1.4.1 心功能检测 给药（水）8周末，大鼠腹腔注射麻醉后仰卧位置于电极板固定，胸前区脱毛，应用小动物超声成像系统选择大鼠心脏探头记录左室舒张末期内径（LVIDd） 和左室收缩末期内径（LVIDs） 连续3个心动周期，计算左室射血分数（LVEF）。

1.4.2 血清指标检测 给药（水）8周末夜间停水、停食12 h，次日20%乌拉坦 6.5 mg/kg腹腔注射麻醉，股动脉取血，离心，提取血清。采用ELISA法检测血清NT-proBNP含量，电化学发光法检测血清cTnI含量，均严格参照试剂盒说明书进行。

1.5 统计学方法 使用SPSS 13.0统计软件进行分析，计量资料以表示，各组间均数比较采用单因素方差分析 （one-way ANOVEA），以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠心功能比较 与假手术组比较，模型组大鼠心功能LVIDs、LVIDd均显著增加，LVEF显著降低，且LVEF≤50% 表明造模成功（P＜0.01）；与模型组比较，各治疗组LVIDs/mm、LVIDd/mm均显著降低，LVEF显著增加 （P＜0.01）。见表 1。

表1 各组大鼠心功能比较

表1 各组大鼠心功能比较

注：与假手术组比较，*P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.01

组别 鼠数 LVIDs（mm）假手术组模型组高剂量组低剂量组对照组10 10 10 10 10 2.78±0.34 5.97±0.41*4.11±0.47#4.56±0.52#4.77±0.53#LVIDd（mm） LVEF（%）4.49±0.56 6.47±0.59*5.06±0.44#5.32±0.53#5.59±0.39#57.20±4.89 36.30±4.62*45.98±5.01#44.99±3.70#43.05±4.01#

2.2 各组大鼠血清NT-proBNP、cTnI含量比较 与假手术组比较，模型组大鼠血清NT-proBNP、cTnI含量显著增加（P＜0.01）；与模型组比较，各治疗组大鼠NT-proBNP、cTnI含量均显著降低（P＜0.01）。见表2。

表2 各组大鼠血清NT-proBNP和cTnI含量比较，pg/mL）

表2 各组大鼠血清NT-proBNP和cTnI含量比较，pg/mL）

注：与假手术组比较，*P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.01

组别 鼠数 NT-proBNP假手术组模型组高剂量组低剂量组对照组10 10 10 10 10 0.33±0.06 1.27±0.16*0.88±0.10#1.01±0.19#0.90±0.18#cTnI 133.88±17.22 305.60±33.52*240.26±30.29#260.18±29.87#251.11±33.98#

3 讨论

CHF在中医学属“喘证”“心悸”“痰饮”等范畴。临床表现虽然复杂，但主要集中在水肿、心悸、喘满这三大症状上，病机多概括为本虚标实，以心之阳气（或兼心阴）亏虚为本，瘀血水停为标。葶苈生脉方由黄芪生脉饮、五苓散、葶苈大枣泻肺汤、桃红四物汤、枳术丸几个经典方剂组合而来。黄芪生脉饮益气固本强心，为主方；配以五苓散助阳化气利水；桃红四物汤活血化瘀；枳术丸行气散结，燥湿健脾；葶苈子苦寒泻肺，开泄肺气，清降逐痰。诸药合用，攻补兼施，扶正不碍邪，驱邪不伤正，开上启下，共奏补气强心，涤饮祛瘀之功。以往研究表明，葶苈生脉方可有效改善CHF大鼠血流动力学，调控肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS） 激活，抑制心肌细胞凋亡，有效逆转心肌重构［3-4］。

神经内分泌系统的过度激活是CHF发生、发展的重要因素，激活后释放的大量活性物质可导致心肌细胞能量代谢障碍、心肌细胞凋亡，心室重塑，进而促进心衰的发展。脑钠肽（brain natriuretic peptide，BNP）是心肌细胞在容量负荷和压力负荷增高时由心室肌细胞分泌的一种多肽类心脏神经激素，具有扩张血管、利钠、利尿等作用，可有效抑制RAAS过度激活，血管内皮细胞、心肌细胞、血管平滑肌细胞过度增生，延缓心肌细胞重构［5］。BNP是目前较为公认的室壁张力及心室负荷变化的重要观察指标，在CHF鉴别诊断及预后评估中具有重要参考价值。NT-proBNP为BNP分裂后的N-末端片段，因其与BNP功能相似，且具有生物半衰期长，稳定性好，不易受外界环境影响等优点，多用于临床检测［6］。cTnI为心肌组织特有肌钙蛋白，对横纹肌收缩起到重要调节作用，以复合物和游离态两种方式分别存在于心肌细胞细肌丝和胞浆中。健康人血清中含量微少，CHF时心脏负荷过重，神经内分泌系统异常激活，心肌细胞受损，cTnI复合物分解成游离态，胞浆中游离态cTnI穿过细胞膜大量进入血液，致使血清cTnI浓度增加。临床研究证实，CHF患者血清cTnI浓度显著高于健康体检者，且升高幅度与心功能分级密切相关［7-8］。

本实验研究结果显示，通过腹主动脉缩窄术可显著增加大鼠血清 NT-proBNP、cTnI含量，增加 LVIDs、LVIDd，降低LVEF，且LVEF≤50%，表明腹主动脉缩窄可有效导致大鼠压力超负荷性慢性心力衰竭。葶苈生脉方可有效降低CHF大鼠血清NT-proBNP、cTnI含量，降低LVIDs、LVIDd，升高LVEF，表明该方能减轻心室压力和容量负荷，降低室壁张力，有效调节神经内分泌系统的过度激活。