高效液相色谱-串联质谱法检测鸡肉中四环素类抗生素残留

刘培勇 张惠

鸡肉是人们日常优质蛋白摄入的重要来源，对于人体健康有重要意义。但在鸡养殖过程中，部分养殖人员因为缺乏专业知识，对于兽药的使用不太规范，兽药滥用，误用及不遵守休药期等现象普遍存在，导致鸡肉中兽药残留过多，带来较大的健康威胁。四环素类抗生素对于新生儿骨骼、牙齿的生长有很大影响。因此，采用高效液相色谱-串联质谱法对鸡肉中四环素类抗生素的检测具有重要意义。

试验材料与方法

仪器设备。高相液相色谱-质谱联用仪（安捷伦6410A），色谱柱Acquity Uplc Beh C18（1.7 μm，2.1 mm x100 mm），冷冻离心机，旋涡振荡器，氮吹仪、纯水净化机。

材料与试剂。标准品：四环素、土霉素、金霉素（美国Sigma公司）；乙腈和甲醇，色谱纯（德国Merck公司）；EDTA- 2Na、柠檬酸、Na2HPO4，分析纯（成都市科隆化学有限公司）；去离子水（实验室一级用水）；固相萃取小柱，Oasis HLB，60 mg/3mL。

试验方法。标准溶液的配制：称取三种抗生素51.0mg放到50mL容量瓶，用甲醇溶液溶解定容，配制成1.0mg/mL的标准溶液。

仪器条件控制：流动相：A- 0.1%甲酸水；B- 0.1%甲酸乙腈。在0- 7 min，90% A线性变化至70%A；7- 8min，70%A线性变化至90%A；8- 10 min，90%A；流速：0.3 mL/ min，柱温：30 ℃，进样量：5 μL。质谱条件：ESI离子源，正离子扫描；离子源温度：150 ℃；脱溶剂气温度：350 ℃；脱溶剂气流速：10 L/min；碰撞气：高纯氮气。

样品提取：称取鸡肉样品2g（1000 r/min均质1min）到50 mL容量瓶中，加入EDCAMcllvainc缓冲溶液8 mL，旋涡振荡2min，4000 r/min离心10 min（温度在10 ℃以下）。取出上清液，将剩余溶液重复提取一次并取出上清液，最后合并两次提取的上清液。

样品净化：取固相萃取柱，依次使用3mL甲醇、3 mL去离子水活化，加入8 mL提取液过柱，先后使用3mL去离子水和3 mL 5%甲醇淋洗，减压抽干。用5 mL甲醇洗脱，洗脱液于40℃下氮吹至近干，用甲醇定容至1 mL，过0.22μm滤膜上机测定。

实验结果与讨论

检出限。配制浓度为20、50、100、200、400 μg/L的混合空白基质加标溶液进行上机检测，通过线性分析，得出回归方程。使用空白样品进行对照，得出三种抗生素的检出限：四环素20 μg/kg，土霉素为30μg/kg，金霉素为10μg/kg。

精密度与回收率。在2.0g鸡肉样品中添加50、100、200μg/L三个浓度水平的抗生素标准溶液，同时进行6次平行试验，计算平均回收率和相對标准偏差。其结果见表1。

讨论

高效液相色谱-串联质谱法检测鸡肉中四环素类抗生素的方法操作简单，灵敏度高，对仪器设备的污染较小、基质干扰少、适用性强，是一种有效检测手段。