HPLC法测定香菇中维生素E的含量

刁全平，郭 华，李铁纯，回瑞华，侯冬岩

(鞍山师范学院 化学与生命科学学院，辽宁 鞍山 114007)

香菇(Lentinus edodes,Shiitake)为担子菌纲伞菌目口蘑科香菇属，又称香蕈、冬菇、花菇等，富有营养，香味浓郁，具有药用及滋补养生作用，是著名的药食两用真菌[1-3]。研究表明，香菇中含有多种活性生物成分，具有增强免疫力、抗肿瘤、抗菌抗病毒、抗氧化、降血糖等生理功能[4]。维生素E又名生育酚，具有促使血管扩张、抗凝血、抗氧化、清除自由基的功能，人体不能自行合成，只能必须从食物中摄取[5-7]。目前，关于香菇中维生素E的测定尚未见文献报道，本文建立HPLC法测定香菇中维生素E的含量，为香菇的综合利用及开发提供一定的技术支持。

1 实验部分

1.1 仪器和试剂

1525型HPLC仪，配2996型二极管阵列检测器(美国Waters公司)，AL-204 电子天平(梅特勒-托利多)，KQ-250E超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

甲醇为色谱纯，乙腈、二氯甲烷、正己烷为分析纯，维生素E对照品(中国食品药品检定研究院)。干香菇购自鞍山云丰菇业食品有限公司。

将甲醇、乙腈、二氯甲烷按照体积比1∶1∶1配成混合溶剂。

1.2 色谱条件[8]

色谱柱为 Kromasil C18柱(5 μm，250 mm×4.6 mm i.d.大连化学物理研究所)；流动相为甲醇；流速为1.0 mL/min；柱温30 ℃；流速：1 mL/min；检测波长：275nm；进样量为10 μL。

1.3 供试液的制备

干香菇粉碎，过40目筛，作为样品。精确称取2 g置于锥形瓶中，加入正己烷40 mL浸泡4 h，超声提取10 min，气浴恒温振荡器震荡30 min后，过滤，重复提取3次。回收溶剂，残渣用混合溶剂溶解后定容，作为供试液。

1.4 对照品溶液的制备及标准曲线的绘制

精密称取维生素E对照品40.2 mg于10 mL容量瓶中，用混合溶剂溶解并定容，作为维生素E储备液。精密移取0.1、0.4、0.7、1.0、1.2、1.4 mL储备液于10 mL容量瓶中，加入溶剂并定容。按照步骤1.2色谱条件分别进行测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，在4.02～56.28 μg/mL范围内线性关系良好，回归方程为A=179546c+380.22，线性相关系数r=0.9983。

2 结果与讨论

2.1 样品色谱图

见图1、2。

图1 维生素E对照品色谱图

图2 样品色谱图

2.2 样品测定结果

步骤1.3制备的供试液经HPLC测定，样品中维生素E的含量为0.0495 mg/g。

2.3 精密度实验

对仪器精密度进行测定。测定浓度为40.20 μg/mL的对照品溶液，重复6次，测定结果计算RSD，见表1。

表1 精密度实验

由表1可知，相对标准偏差为0.508%，说明精密度良好。

2.4 回收率实验

精密称取香菇2 g三份，分别加入一定量的维生素E对照品，按照步骤1.3制备供试品溶液，HPLC测定其含量，计算实验回收率，结果如表2所示。

表2 回收率实验

由表2可知，实验回收率在96.66%～102.8%范围内，平均回收率为98.88%，说明实验回收率较高。

2.5 稳定性试验

将制备的样品供试液，每小时进样一次，连续6 h，HPLC测定维生素E的含量，结果如表3所示。

由表3可知，维生素E在6 h内稳定。

表3 稳定性实验

3 讨论

本文采用超声辅助有机溶剂提取法对香菇中维生素E进行提取，并建立了HPLC测定香菇中维生素E含量的方法。该方法结果准确，操作简单，可用于香菇的质量监测，同时又可以对香菇的深加工提供一定的技术支持。