高效液相色谱法测定食品中的抗氧化剂

胡玉霞

(浙江经贸职业技术学院，浙江 杭州 310018)

食品中存在易氧化的油脂、脂溶性维生素、磷脂和胡萝卜素等物质[1]，在贮存过程中易导致食品感官发生变化。油脂中的不饱和脂肪酸被水解、氧化，导致油脂的酸价、过氧化值升高，破坏营养，产生异味，对人体健康有影响，严重时还会引起食物中毒[2]。抗氧化剂能阻止或延缓油脂的自动氧化，防止食品贮藏过程中的褐变、褪色和营养损失[3]，提高食品稳定性，延长贮存期。正确使用抗氧化剂，不仅可以给生产者、消费者带来良好的经济效益，而且能提高食品安全，防止食品安全事故发生。

特丁基对苯二酚(TBHQ)、丁基羟基茴香醚(BHA)、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)是常用的油脂类抗氧化剂，限量标准已有规定[4]。已有研究发现，长期大量使用抗氧化剂有致癌作用[5-6]，快速检测食品中抗氧化剂的含量，具有重要的意义。目前，我国检测油脂类抗氧化剂常采用乙腈-正己烷液液萃取，C18固相萃取柱净化的方法[6]，该方法前处理复杂、毒性大、成本高，不利于批量样品的检测分析。质谱法虽灵敏度高、检出限低，但设备昂贵，难以推广普及。本研究基于现有检测方法，采用甲醇作为提取溶剂，重复提取后，直接过膜上机检测。与标准方法相比，该方法简单快捷、定量准确，检测成本低，适于批量检测，对提高检测分析的效率和灵敏度具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 试剂与材料

TBHQ、BHA、BHT标准品(TMstandard，含量≥99%，扩展不确定度0.5%)，北京坛墨质检；0.22 μm有机滤膜，上海安谱实验科技股份有限公司；甲酸、甲醇均为色谱纯；饼干、食用油样品采集于超市。

1.2 仪器与设备

超纯水净化器，美国Millipore公司；戴安p680液相色谱仪，二极管阵列检测器，德国AUPOS公司；旋涡震荡器，合肥艾本森科学仪器有限公司；电子天平，瑞士Mettler-Toledo公司。

1.3 色谱条件

色谱柱：Eclipse C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：A为0.5%甲酸水，B为甲醇；流动相梯度洗脱程序为：0～5 min，50% A；5～15 min，50%～20% A；15～20 min，20% A；20～25 min，20%～10% A；25～27 min，10%～50% A；27～30 min，50% A。流速1.0 mL·min-1，进样量 10.0 μL，柱温35 ℃，紫外检测波长280 nm。

1.4 样品前处理

准确称量0.2～2.0 g样品(精确到0.01 g)，加入甲醇5 mL，旋涡震荡2 min，5 000 r·min-1离心5 min，取上清液，重复提取3次，合并提取液，55 ℃氮气吹至近干，甲醇定容至2.0 mL，过膜上机分析。

1.5 标准曲线绘制

准确称取BHA、BHT、TBHQ各0.05 g(精确至0.000 01 g)，用乙腈定容到50 mL，混匀，制成标准溶液储备液(1 mg·mL-1)。将标准溶液储备液用甲醇稀释至2、5、10、20、50 μg·mL-1标准工作液，HPLC-DAD检测。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

2 结果与分析

2.1 线性范围

以峰面积对应于各标准物质的质量浓度(μg·mL-1)进行线性回归，实验结果表明呈现良好的线性关系(表1)。

表1 方法的线性范围

2.2 准确度、精密度及检出限

选择饼干作为样品，检测其中BHA、BHT、TBHQ含量。结果表明，饼干中未检出BHA、BHT，TBHQ含量为14.52 mg·kg-1，相对标准偏差(RSD)2.60%。以饼干为空白样品基质，进行低、中、高3个浓度水平的添加实验，进行回收测定，平均测定6次，结果见表2。

表2 方法的精密度和回收率(n=10)

由表2可见，抗氧化剂回收率90.4%～101.1%，相对标准偏差0.32%～2.46%，能够较好地满足GB/T 27404—2008《实验室质量控制规范 食品理化检测》的要求。以样品中目标物响应和基线噪音比计算本方法的检出限，TBHQ、BHA、BHT的检出限分别为0.6、0.2、0.6 mg·kg-1。

2.3 实际样品含量的检测

在上述试验条件下，分别对市场上购买的食用油(未检出BHA、BHT，TBHQ含量为24.20 mg·kg-1)和糕点(未检出BHA、BHT，TBHQ含量为8.90 mg·kg-1)进行加标回收测定(每个样品3个重复)，测定结果见表3。加标检测结果表明，回收率97.0%～103.0%，RSD为0.95%～2.34%，可以满足日常检验需求。

表3 实际样品的加标回收检测

3 小结

本实验建立了用甲醇作为提取溶剂的高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)测定食品中TBHQ、BHA、BHT 3种抗氧化剂残留的方法，相比现行标准中液液萃取-过柱净化的液相色谱分析技术，实现了简化前处理操作、提高样品提取效率、减少有机溶剂的使用和降低检测成本等目的。精密度、准确度和检出限结果表明，该方法满足检测标准要求，对政府部门或第三方检测公司开展相关产品的检验检测有重要的参考意义。