紫外分光光度法测定氯霉素滴眼液的含量

韦林洪, 张 军, 刘 俊

(扬州职业大学, 江苏 扬州 225009)

氯霉素滴眼液主要用来治疗由大肠杆菌、流感嗜血杆菌、克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌等敏感细菌引起沙眼、结膜炎、眼睑缘炎、角膜炎等。其主要成分为氯霉素,辅料为硼酸、硼砂、醋酸苯汞、注射用水等,其含量测定的主要方法有微生物检定法[1]、紫外分光光度法[2]、高效液相色谱法[3-4]等。微生物检定法的测定原理与临床应用的要求一致,利用氯霉素能够抑制细菌生长的特点来进行含量测定,具有灵敏度高、样品用量少、测定结果直观等优点,但存在操作繁琐、测定时间长、对实验操作人员的操作技能要求较高、实验误差大等缺点，限制了其应用[5]。2010版和2015版《中国药典》均采用高效液相色谱法测定其含量,在系统适用性试验符合要求后,采用梯度洗脱法测定样品中氯霉素的含量,该法分离效果好、准确度高,但实验操作繁琐,需要熟练的操作人员,且难以满足医院和药厂快速测定其含量的需要。文献报道的紫外分光光度法未进行方法学考察,本文采用紫外分光光度法测定氯霉素滴眼液的含量,并对分析方法的准确度、精密度和专属性等质量指标进行考察。

1 仪器、试剂和溶液的制备

1.1 主要仪器

T6紫外分光光度计,北京普析通用仪器有限责任公司;AR2140电子天平,上海梅特勒公司。

1.2 主要试剂

氯霉素对照品(批号17010720,纯度≥98.0%),江苏绿叶生物科技有限公司;氯霉素滴眼液(8mL∶20mg,批号20171101、20171104、20171108),长春迪瑞制药有限公司;95%乙醇、硼酸、硼砂、醋酸苯汞、庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾、三乙胺、磷酸(以上均为分析纯),国药集团化学试剂有限公司;纯化水,Milli-Q净化系统(美国Millipore公司)。

1.3 溶液的制备

1.3.1 对照品溶液的制备

用分析天平精确称取于105℃干燥至恒重的氯霉素对照品0.2502g,置于100mL容量瓶中,加入95%乙醇10mL,振摇使其完全溶解,然后用纯化水稀释至刻度线,摇匀,得到浓度为2.502mg·mL-1的氯霉素对照品溶液,备用。

1.3.2 供试品溶液的制备

准确吸取氯霉素滴眼液0.5mL于100mL的容量瓶中,用纯化水稀释至刻度线,摇匀,得到供试品溶液,备用。

1.3.3 空白辅料溶液的制备

根据氯霉素滴眼液处方规定,分别称取7.5g硼酸、1.5g硼砂和0.01g醋酸苯汞于1000mL容量瓶中,用纯化水稀释至刻度线,摇匀。精密量取0.5mL置于100mL的容量瓶中,用纯化水定容,摇匀,得到空白辅料溶液,备用。

2 方法与结果

2.1 测定波长的选择

精密量取0.6mL浓度为2.502mg·mL-1的氯霉素对照品溶液和0.5mL氯霉素滴眼液分别置于100mL的容量瓶中,用纯化水稀释至刻度线,摇匀。以纯化水为空白,分别将氯霉素对照品溶液、供试品溶液和空白辅料溶液在200～400nm波长范围内扫描,氯霉素对照品溶液和供试品溶液在278nm处有最大吸收,而空白辅料溶液在该波长处的吸光度趋于零,因此,选择278nm作为测定波长。

2.2 标准曲线的测绘

精密量取浓度为2.502mg·mL-1的氯霉素对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL分别置于100mL容量瓶中,用纯化水稀释至刻度线,摇匀,得到浓度分别为2.5、5、10、15、20μg·mL-1的系列对照品溶液。以纯化水为空白,在278nm波长处测定吸光度,以氯霉素对照品溶液浓度C(μg·mL-1)为横坐标,以吸光度A为纵坐标绘制标准曲线,见图1。

图1 氯霉素的标准曲线

氯霉素浓度在2.5～20μg·mL-1与吸光度线性关系良好,符合朗伯-比尔定律。其线性回归方程为A=0.03108C+0.05051,相关系数为0.9996。

2.3 供试品的含量测定

取3批供试品,分别按1.3.2的方法制备供试品溶液。以纯化水为空白,在278nm处分别测定供试品溶液的吸光度,重复3次。根据标准曲线计算样品中氯霉素的含量,按下列公式计算氯霉素滴眼液标示量的百分含量,测定结果见表1。

式中：C供为供试品溶液的浓度,μg·mL-1;100为供试品定容体积,mL;S为标示量,8mL∶20mg;0.5为供试品取样量,mL;1000为浓度换算系数。

2.4 加样回收率测定

在200mL容量瓶中分别加入0.5mL氯霉素滴眼液,然后分别加入浓度为2.502mg·mL-1的氯霉素对照品溶液0.4、0.5、0.6mL(每个添加水平重复3次),用纯化水稀释至刻度线,摇匀。以纯化水为空白,在278nm波长处测定吸光度,计算加样回收率。试验结果见表2。

表1 氯霉素滴眼液的含量测定结果(n=3)

表2 加样回收率(n=3)

由表2可知:加样回收率在98.0%～101.0%范围内,表明该方法的准确度好。

2.5 重复性试验

在100mL容量瓶中分别加入0.4、0.5、0.6mL氯霉素滴眼液,用纯化水稀释至刻度线,摇匀,得到浓度分别为10、12.5、15μg·mL-1的样品溶液。以纯化水为空白,分别在278nm的波长处测定吸光度,考察方法的精密度。每个浓度重复3次,试验结果见表3。

由表3可知:该方法的重复性在可接受范围内,精密度符合要求。

2.6 稳定性试验

精密量取0.6mL氯霉素滴眼液置于100mL容量瓶中,用纯化水稀释至刻度线,摇匀,在室温下放置0、1、2、3、4、5、6h后,以纯化水为空白,分别在278nm波长处测定其吸光度,吸光度为0.526±0.05,该结果表明供试品溶液在6h内稳定性好。

表3 重复性试验结果(n=3)

3 结论

本文采用紫外分光光度法测定氯霉素滴眼液的含量并考察了分析方法的准确度、精密度、专属性和稳定性等质量指标。试验结果表明:采用紫外分光光度法测定氯霉素滴眼液的含量具有较高的准确度和精密度,该法操作简单、快速、专属性强、分析成本低。