茄根多糖的提取分离及含量测定*

邓欣鑫 张瑶瑶 虞丽娜 朱霞琳 赵 莹

药学院，山东第一医科大学(山东省医学科学院)，山东 泰安 271016

1 仪器与试剂

1.1 仪器

旋转蒸发仪(型号：N-1300V型，生产厂家：东京理化器械株式会社)；循环水式多用真空泵(型号：SHZ-DⅢ，生产厂家：上海科兴仪器有限公司)；电子分析天平(型号：XS205DU型，生产厂家：上海梅特勒-托利多有限公司)；紫外可见分光光度计(型号：Gold S54，生产厂家：上海棱光技术有限公司)；数控超声波清洗器(型号：KQ5200DE型，生产厂家：昆山市超声仪器有限公司)；台式电热干燥箱(型号：202-2AB型，生产厂家：天津市泰斯特仪器有限公司)；水浴锅(型号：HH.S11-Ni2型，生产厂家：北京三二八科学仪器有限公司)；台式低速离心机(型号：TD4型，生产厂家：常州金胜仪器制造有限公司)；纯水仪(生产厂家：MILLIPORE)。

1.2 试剂

茄根采自山东省泰安市泰山区上高街道办事处上高村，由山东省泰安市食品药品检验检测中心中药科的刁兴斌老师鉴定为茄科(Solanaceae)茄属植物(SolanumL.)茄的干燥根茎部位；水：超纯水(自制)；石油醚、无水乙醇、浓硫酸、正丁醇、葡萄糖、苯酚、氯仿、丙酮等均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 方法

2.1.1茄根多糖的提取与精制工艺

样品处理→脱脂→浸提→抽滤除渣→减压浓缩→离心→乙醇沉淀多糖→静止离心→粗多糖→复溶→脱蛋白→醇沉→干燥→精制多糖。

2.1.2工艺要点说明

样品处理：将茄根除去杂质，置于恒温干燥箱中烘干，粉碎备用。

基于草原丝路文物资源的乡村旅游产业开发缺乏统一部署，具有文物资源地区各行其是，未用系统眼光看待问题，解决问题，开发模式分散。无论是从横向上看还是从纵向上看，乡村旅游产业与相关产业融合度都比较低，导致相关产品附加值低，宣传力度不够。产品部门间协作不强，产业链条较短，产业关联效果不显著。产业处于起步阶段，发展机制仍需完善。

脱脂：称取药材5.0 g，置于250 mL具塞锥形瓶中，加入50 mL石油醚，密塞后，振摇，超声(40℃，频率40 kHz)提取30 min，脱去其表面脂类物质，抽滤，晾干，重复脱脂1次。

浸提：脱脂晾干后试样，以1∶20的料液比加入蒸馏水，在40℃水浴中超声浸提30 min，过滤后，在相同条件下重复提取1次。

抽滤除渣：将2次提取液合并，减压抽滤。

减压浓缩：利用旋转蒸发仪浓缩滤液，约至20 mL，冷却至室温。

离心和醇沉：将浓缩液离心5 min(5000 r/min),弃去沉淀后，缓慢加入无水乙醇(约3倍量)，不断用玻璃棒搅拌，使多糖充分析出。

静置离心：将上述溶液静置1 d后，在离心机上离心得粗多糖沉淀。

复溶和脱蛋白：粗多糖复溶，利用Sevage试剂除蛋白，连续操作到脱除蛋白质完全。

醇沉：在除去蛋白后的溶液中加入无水乙醇(3倍量)沉淀，依次用石油醚、丙酮、乙醇反复洗涤，离心，干燥，得精制多糖。

2.1.3标准曲线的绘制

葡萄糖标准溶液的配制：取一定量的葡萄糖对照品于105℃干燥至恒重，精密称取10 mg，置于250 mL容量瓶中，加超纯水溶解，稀释至刻度，摇匀，配制成40 μg/mL的葡萄糖标准溶液备用。

苯酚溶液的配制[9]：称取苯酚30 g，常压蒸馏收集182℃的馏分，取馏出液6.0 g，加入超纯水100 mL，配制6%的苯酚溶液，置棕色瓶中备用。

标准曲线的绘制:分别精密吸取0.0、0.8、1.2、1.6、3.2 mL的40 μg/mL的葡萄糖标准溶液，置于10 mL具塞刻度试管中，分别在各试管中加入超纯水至体积为2.0 mL，空白试管中加入2.0 mL超纯水作对照，各管分别加入6%苯酚溶液1.0 mL，摇匀，滴加浓硫酸5.0 mL，振摇，放置5 min，置沸水浴中加热25 min，迅速冷却，至室温，在490 nm波长处测量吸光度，绘制标准曲线。

2.1.4样品中多糖的含量测定[10]

精密称取茄根粉末5.0 g，利用石油醚于超声条件下脱脂2次，抽滤，将滤渣风干后加超纯水超声提取2次后，抽滤，合并2次滤液，浓缩后加3倍量无水乙醇，静置过夜，离心，沉淀复溶，定容至100 mL，摇匀，作为样品溶液。吸取1.0 mL，按照上述标准曲线操作步骤，测其吸光度。多糖含量(%)=样品液中葡萄糖的浓度(mg/mL)×样品液的稀释倍数×测定液总体积(mL)/样品的重量(mg)。

2.2 实验结果

2.2.1标准曲线回归方程建立

根据标准曲线的绘制方法，在波长490 nm处测定溶液吸光度，参比为空白试剂，实验结果见表1。以浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标，得到线性回归方程：A=0.0572C+0.0030，r2=0.9993，相关系数r=0.9986，表明葡萄糖在4.0～16.0 μg/mL浓度范围内呈现良好的线性关系。

表1 葡萄糖标准溶液浓度与吸光度值

2.2.2稳定性实验

取试样2.0 mL，按标准曲线测定的方法配制，室温放置120 min，每隔30 min测1次吸光度，考察溶液的稳定性，实验结果表明，在显色后90 min内的稳定性最好，结果见表2。

表2 稳定性实验结果

2.2.3精密度实验

吸取标准溶液1.0 mL，按标准曲线测定的方法进行精密度实验，连续进行6次测定其吸光度，得RSD(%)=2.35，表明精密度良好。

2.2.4重现性实验

精确吸取来自于同一批原料的试样，按标准曲线测定的方法，分别测定其吸光度，检验该测定方法的重现性，得RSD(%)=1.50，表明重复性较好。

2.2.5加标回收率实验

精密吸取已配制的35 μg/mL 粗多糖溶液1.0 mL，分别加入0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL的40 μg/mL标准葡萄糖溶液，稀释后按标准曲线测定的方法分别测定其吸光度值，并计算加标回收率，见表2，结果表明样品加标回收率均在95%～105%之间，说明本法可行。

表2 加标回收率实验结果

2.2.6样品中多糖含量测定结果

按上述测定方法，同时做3个重复，经测定吸光度值分别为0.237、0.235、0.234，由公式计算的茄根多糖平均含量为4.5%。

3 结 论

本实验采用超声波辅助法对茄根中的多糖进行提取，用苯酚-硫酸法测其含量。在苯酚-硫酸法的条件下，测得茄根多糖含量平均为4.5%。该实验的标准曲线线性关系良好，多糖含量测定结果稳定，重现性好，回收率高，说明苯酚-硫酸法可以用于测定茄根中多糖含量，具有一定的推广和参考价值，同时也为茄根药材的质量控制提供了参考依据。