蛋种鸡育雏阶段法氏囊抗体检测不同试剂盒数据对比分析

李明珠 薛晓阳 李佳佳 王雪敏

蛋种鸡育雏阶段法氏囊抗体检测不同试剂盒数据对比分析

李明珠 薛晓阳 李佳佳 王雪敏

（华裕农业科技有限公司 河北省蛋鸡产业研究院 河北 邯郸 056000）

采集同一育雏场不同日龄段的血清样品，同样的血清样品分别用全病毒包被试剂盒与VP2蛋白包被试剂盒，通过ELISA抗体检测进行筛选，从而筛选出不同抗体滴度的血清，将筛选出来不同抗体滴度的血清与法氏囊病毒进行中和，结合以上两种实验分析，用VP2蛋白包被试剂盒筛选出育雏阶段不同日龄的血清样品抗体滴度与病毒中和试验保护力相吻合，更能有效的评判育雏阶段鸡群免疫效果，为生产提供指导意义。

育雏场 血清 IBD试剂盒 IBD病毒 SPF鸡胚 解析

蛋鸡传染性法氏囊病是一种急性、高度接触性传染病，是由于感染传染性法氏囊病毒而导致，传染性法氏囊病毒属于双RNA病毒科，包括两个血清型[1]。以法氏囊发炎、坏死、萎缩和法氏囊内淋巴细胞严重受损为特征[2]。从而引起鸡的免疫机能障碍，干扰各种疫苗的免疫效果，给养鸡业造成重大危害的一种疾病[3]。该病全年任何季节都能够发生，其中20-40日龄雏鸡非常容易感染。该病具有2~3d的潜伏期，通常在易感鸡群中突然出现发病，病鸡主要特征是发生腹泻，精神萎靡，法氏囊明显肿大且伴有出血，肾脏肿大，以及肌肉出血等，典型发病鸡群会出现尖峰式的死亡曲线，通常经过1~2d死亡率明显升高，呈直线上升，在3-4d达到死亡高峰，之后快速降低[4]。病毒主要随病鸡粪便排出，污染饲料、饮水和环境，使同群鸡经消化道、呼吸道和眼结膜等感染；各种用具、人员及昆虫也可以携带病毒，扩散传播；本病还可经蛋传递，给养鸡业造成一定危害[5]。应加以防控和适时检测，目前市场上法氏囊血清抗体检测试剂盒应用最为广泛地有两种，一种为全病毒包被试剂盒，另一种为VP2蛋白包被试剂盒，同一血清样品用两种试剂盒同时进行检测，对比数据相对较少，因此，本次试验对育雏阶段同一血清分别用两种试剂盒同时进行检测，看哪种试剂盒检测对育雏阶段免疫VP2蛋白疫苗更有指导意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 IBD试剂盒 某一试剂盒：全病毒包被试剂盒；某二试剂盒： VP2蛋白包被试剂盒

1.1.2 试验鸡群 A鸡场，89日龄，海兰褐鸡，7日龄免疫法氏囊VP2蛋白油苗(剂量0.35ml/只，疫苗名称，新法流油苗，厂家，青岛易邦)。B场，34日龄，海兰褐鸡，未免疫法氏囊VP2蛋白油苗。C场，28日龄，海兰褐鸡，7日龄免疫法氏囊VP2蛋白油苗(剂量0.35ml/只，疫苗名称，新法流油苗，厂家，青岛易邦)。

1.2 方法

1.2.1 采样方法 28、34、89d采集血清，进行ELISA抗体检测。数量，血清每栋10份样品，随即采样，待血清清洗出后标明信息。样品，11日龄SPF鸡胚，数量，5枚。

1.2.2 血清检测方法 参照试剂盒产品说明书进行操作，严格注意操作细节。

1.2.3 血清病毒中和实验检测方法 根据两种试剂盒筛选出不同的抗体滴度，将筛选出不同滴度的血清样品分为3组，分别为A组(1-10号，89日龄)某一试剂盒和某二试剂盒两种试剂盒检测抗体滴度都在5000以上、B组(1-10号，34日龄)某一试剂盒和某二试剂盒两种试剂盒检测都为阴性和C组(1-10，28日龄)某一试剂盒检测为阴性，某二试剂盒检测为阳性；并设立D组为PBS对照组。将上述各组分别与0.01羽份IBDV(103.68ELD50/羽)按照1:1混合，37℃孵育1h，通过CAM途径接种5枚11日龄SPF鸡胚。将上述各组置于37℃恒温箱中培养，记录每天死亡情况。

2 结果

2.1 血清ELISA抗体检测结果 见表1。

2.2 血清病毒中和试验结果 见表2。

3 讨论

3.1 血清ELISA抗体

（1）A场区在7日龄免疫法氏囊VP2蛋白油苗，84日龄检测全病毒包被试剂盒抗体滴度在5241~8815Log10之间，VP2蛋白包被试剂盒抗体滴度在12800~12715Log10之间。（2）B场区未免疫法氏囊VP2蛋白油苗，34日龄检测全病毒包被试剂盒抗体滴度在0~97Log10之间，VP2蛋白包被试剂盒抗体滴度都为0。（3）C场区在7日龄免疫法氏囊VP2蛋白油苗，28日龄检测全病毒包被试剂盒抗体滴度在136~288Log10之间，VP2蛋白包被试剂盒抗体滴度在3957~12534Log10之间。

表1 血清ELISA抗体检测结果

注：检测采用法氏囊试剂盒产品，所出数据为软件自动生成，全病毒包被试剂盒阴阳性临界值滴度397。

表2 鸡胚死亡记录表

3.2 血清病毒中和试验

（1）A组89日龄用两种试剂盒检测抗体滴度都在5000以上的血清样本，与0.01羽份IBDV (103.68ELD50/羽)按照1:1混合，接种SPF鸡胚，没有出现鸡胚死亡现象，证明该血清对IBD病毒具有中和能力，可以增强保护力。（2）B组34日龄用两种试剂盒检测都为阴性的血清样本，与0.01羽份IBDV(103.68ELD50/羽)按照1:1混合，接种SPF鸡胚，鸡胚分别在第2、4、5、6天出现死亡现象，证明该血清对IBD病毒不具有中和能力，没有保护力。（3）C组28日龄用全病毒包被试剂盒检测为阴性，VP2蛋白包被试剂盒检测为阳性的血清样本，与0.01羽份IBDV(103.68ELD50/羽)按照1:1混合，接种SPF鸡胚，鸡胚无死亡现象，证明该血清对IBD病毒具有中和能力，可以增强保护力。（4）D组为阳性对照组，因PBS本身不具备中和能力，与0.01羽份IBDV(103.68ELD50/羽)按照1:1混合，接种SPF鸡胚，鸡胚分别在第3、4、5天出现死亡现象，证明对IBD病毒不具有中和能力，没有保护力。

3.3 结果分析

（1）场区在育雏期间免疫法氏囊VP2蛋白油苗，鸡群89日龄进行检测，全病毒包被试剂盒与VP2蛋白包被试剂盒检测抗体滴度达到5000以上的血清，与0.01羽份IBDV(103.68ELD50/羽)按照1:1混合，通过CAM途径接种5枚11日龄SPF鸡胚，37℃恒温箱中培养，7d之内，未出现鸡胚死亡现象，证明血清抗体滴度达到5000以上对法氏囊病毒都具有保护力，同样的血清，通过两种试剂盒检测，用VP2蛋白包被试剂盒检测血清抗体滴度明显高于全病毒包被试剂盒，说明VP2蛋白包被试剂盒针对法氏囊VP2蛋白油苗检测更为灵敏。（2）场区在育雏期间如果未免疫法氏囊VP2蛋白油苗，鸡群34日龄进行检测，全病毒包被试剂盒与VP2蛋白包被试剂盒检测抗体都为阴性的血清，与0.01羽份IBDV(103.68ELD50/羽)按照1:1混合，通过CAM途径接种5枚11日龄SPF鸡胚，37℃恒温箱中培养，7d之内5枚鸡胚全部出现死亡现象，证明没有进行法氏囊免疫的鸡群对病毒入侵，不具有保护力，另外同样的血清，通过两种试剂盒检测，用VP2蛋白包被试剂盒检测血清抗体滴度都为0，用全病毒包被试剂盒检测的血清抗体滴度阳性判定值397以下，虽然为阴性，但仍有抗体滴度检出，说明VP2蛋白包被试剂盒针对法氏囊VP2蛋白油苗检测更为精确，更为灵敏。（3）场区在育雏期间免疫法氏囊VP2蛋白油苗，鸡群28日龄进行检测，全病毒包被试剂盒检测抗体滴度为阳性临界值397以下，都为阴性鸡只，同样的血清，用VP2蛋白包被试剂盒检测血清抗体滴度都在3937~12534之间，全部为阳性，用该血清与0.01羽份IBDV(103.68ELD50/羽)按照1:1混合，通过CAM途径接种5枚11日龄SPF鸡胚，37℃恒温箱中培养，7d之内，未出现鸡胚死亡现象，说明该检测的28日龄血清鸡群已对法氏囊病毒具有保护力，说明VP2蛋白包被试剂盒针对法氏囊VP2蛋白油苗检测更为精确，更为灵敏。

4 结论

（1）用VP2蛋白包被试剂盒筛选出育雏阶段不同日龄的血清样品抗体滴度与病毒中和试验保护力相吻合。（2）用VP2蛋白包被试剂盒更能有效的评判育雏阶段鸡群免疫效果，更能够有效为生产提供指导意义。

[1] 王丽梅. 鸡法氏囊病的诊治[J]. 中国畜牧兽医文摘, 2018, 4, 34.

[2] 刘志安, 王冰, 刘雨佳. 浅析鸡法氏囊病的防控措施[J]. 中国畜禽种业, 2012(5).

[3] 刘淑侠. 鸡法氏囊病继发新城疫的病因分析与治疗思路[J]. 畜牧兽医科技信息, 2017(9).

[4] 王平权, 刘一鸣. 鸡法氏囊病的综合防治[J]. 畜牧兽医科技信息, 2014(8): 110-111.

[5] 张志琴. 鸡法氏囊病的诊治与预防[J]. 中国畜牧业, 2013(12).

（2019–06–23）

蛋种鸡杂交笼养生态健康养殖关键技术研究(编号1812106036)

S818.9

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1007-1733(2019)09-0009-03