HPV检测技术的研究进展

林平

摘要：宫颈癌是常见的女性生殖系统恶性肿瘤。严重危害女性的生命健康。据不完全统计，我国每年死于宫颈癌的人数近5万之多。宫颈癌及宫颈癌前病变（宫颈CIN）的发展需要很长的时间。所以，宫颈癌及癌前病变筛查是预防宫颈癌的有效措施。高危型人乳头瘤病毒感染及持续性人乳头瘤病毒感染是导致宫颈癌的主要原因，因此，HPV檢测是临床上筛查宫颈癌及癌前病变的主要手段之一。现就，近些年HPV检测方法及研究情况进行整理概括作一综述。

人乳头瘤病毒（HPV）是一种嗜上皮性病毒，在人类皮肤角质形成细胞粘膜鳞状上皮细胞是其天然宿主，主要通过性传播感染，长期以来，已知HPV感染可引起人类良性肿瘤和疣。目前已发现超过200种不同的HPV亚型，根据其致病性分为高危型和低危型。与宫颈癌有关的高危型HPV有16，18，31，33，35，39，45，52，56，58，59，68。低危型有6，11，42，43，44。还有HPV6，11，42型与生殖道疣有关。

近些年来，我国对宫颈癌越来越重视，其防治方法也在不断更新发展，HPV疫苗迅速崛起，只是我国还没有广泛普及。目前，宫颈癌的筛查仍是主要预防，控制宫颈癌的手段，根据美国妇产科医师学会（American College of Obstetricians and Gynecologisists，ACOG）最新的宫颈癌筛查和预防实践指南，强调以下几点：

1、宫颈癌筛查应从 21 岁开始。HIV 感染女性除外。年轻女性感染 HPV 后几乎均可通过免疫系统在 1-2 年内清除病毒而不发生病变。过早的筛查可能会增添患者的焦虑及花费，导致过度随诊。

2、21-29 岁女应单独行细胞学检查，每 3 年筛查 1 次。30-65 岁女性建议每 5 年行细胞学和 HPV 联合筛查。

3、以前筛查结果阴性且无 HSIL 及更高级别病变的女性，65 岁以后停止宫颈癌前筛查。

4、已行子宫全切且以前没有 HSIL 及更高级别病变的女性应停止宫颈癌筛查。

5、有 HIV 感染、免疫缺陷、子宫内己烯雌酚暴露及既往 HSIL或更高级别病变的女性，可能比常规筛查指南推荐的需要更频繁的筛查。

6、对于细胞学 ASCUS、HPV 阴性的女性，建议 3 年内复查 TCT检查及 HPV 筛查。

7、30 岁及以上的细胞学阴性，HPV 阳性的女性，12 个月内复查 TCT 检查及 HPV 检测。如果复查的细胞学结果为 ASCUS 及更高级别病变，或 HPV 检测结果仍阳性，建议行阴道镜检查。或者直接进行 HPV 基因分型，若 16 型或 18 型阳性，应直接进行阴道镜检查，若 16 型或者 18 型阴性，应在 12 个月后再次进行联合筛查。

目前HPV的主要检测方法有：病理学检测，分子生物学检测，免疫组化法，血清学检测，其中病理学检测为确诊宫颈癌的金标准。现就HPV检测的发展情况作以综述。

1.人乳头瘤病毒感染宫颈的病理学改变。

鳞状细胞浸润癌：占宫颈癌的75%-80%。

微小浸润癌肉眼观察无明显异常，或类似子宫颈柱状上皮异位，随病变发展，可形成4种类型，即外生型（最常见，常累及阴道），内生型，溃疡型，颈管型。通过显微镜检测根据病灶大小又分为微小浸润癌和浸润癌（根据癌细胞的分化程度又分为I级II级III级）。

腺癌：占宫颈癌的20%-25%。巨检发现腺癌通常来自子宫颈管内，浸润管壁，或自子宫颈管内向子宫颈外口突出生长，常可侵犯宫旁组织，病灶向子宫颈管内生长时子宫颈外观正常，但因子宫颈管膨大，形如桶状。显微镜观察主要有2种组织学类型。黏液腺癌和恶性腺瘤。

腺鳞癌：占宫颈癌的3%-5%。癌组织中含有腺癌和鳞癌两种成分。

2.分子生物学技术检测人乳头瘤病毒技术。

2.1 检测样本及检测项目

一般为宫颈上皮组织，如用于细胞学检测的宫颈刮片或者刷取宫颈上皮细胞的拭子。还有在阴道镜下取的活检组织。近些年来有研究证实，宫颈口处的上皮细胞会进入尿液，因此，尿液也可用作检测生殖道HPV感染的样本。检测前处理工作繁杂，样本的量必须足够多。目前的分子生物学技术可以检测（1）HPV的不同亚型，不同亚型致病性不同，而且高危型HPV病毒感染需要进行阴道镜进一步诊断，低危型则不需要，HPV分型检测是很有必要的可以避免医疗资源的过度浪费。（2） HPV DNA检测，目前还没有普及应用，可能原因是其检测的特异性相对较低，假阳性相对较高，另外有些患者感染HPV后，病毒活性没有引起恶变，而是一段时间后自行消失了。（3）HPV的mRNA检测，主要是指检测HPV病毒中E6和E7蛋白的表达，HPV E6/E7蛋白是恶化的宫颈上皮细胞的主要分子，有研究显示E6、E7mRNA的水平越高，疾病的恶化程度也越高。因此HPV mRNA的检测结果是早期诊断宫颈癌的有力参考。（4）HPV病毒含量检测，即检测出HPV病毒的含量，这项检测在清除病毒的治疗起着重要作用，可以帮助我们直观的观察治疗预后效果。

2.2临床上常用的检测方法。

2.2.1分子杂交技术，包括原位核酸杂交法和杂交捕获法。其中原位核酸杂交法有定位准确的优点，可以在细胞水平上探讨HPV感染。但该方法敏感度低，需要大量纯化样本。区分不了HPV的型别。捕获杂交法利用化学发光放大抗体捕获的信号，可以检测高危型HPV病毒和低危型HPV病毒。但是无法区分单独的HPV亚型。

2.2.2 PCR检测方法，这种方法特异性，敏感性较好。包括实时定量PCR法，特异性PCR法，通用引物PCR法，DNA基因芯片技术，导流杂交基因芯片技术等。PCR检测方法是目前最好的HPV检测方法，简单易行，样本来源不受限，还可有效的进行HPV分型。但会发生样品间的交叉反应，导致假阳性。

3.免疫组化法检测人乳头瘤病毒

免疫组化方法，通过病变部位的病毒抗原与抗HPV病毒的抗体结合。此方法特异性很高，还可以明确病变部分，在筛查宫颈癌及癌前病变中有一定的参考价值。但是检出率低，不能区分HPV的型别，敏感度较差。

4.血清抗体法检测人乳头瘤病毒

HPV血清抗体检测法，虽然感染HPV后血清中会有反映，但这种检测方法发展缓慢，因此准确性不高，无法知道具体感染时间，也无法区分HPV型别。随着不断研究，发现HPV血清检测在宫颈癌的治疗和预后随访中有一定的参考价值。

近些年，关于HPV检测研究迅速，在筛查宫颈癌及宫颈癌前病变中占有越来越重要的位置，但其也存在一定的弊端，高危型HPV感染及持续性HPV感染是宫颈癌及癌前病变的诱因，但并不是绝对条件，并且还有很多人对HPV感染和宫颈癌的关系了解不深，没有定期筛查的意识，使得HPV检测无法大规模开展，此外，HPV检测技术的改进方向应该是提高灵敏度和特异性，可以分型检测，成为宫颈癌筛查中不可缺少的手段。

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