微生物学的检验方法都有哪些?

舒小桃

随着现代科技的飞速发展，各个学科之间存在着相互交叉和渗透，比如微生物学检验技术被广泛地应用到医学检验当中。微生物学检验技术的研究水平如今已经上升到细胞、分子、甚至基因，各种各样的新技术推动着医学技术的发展。微生物学检验在医学研究、治疗、诊断当中都扮演着重要的角色，接下来的内容就将向您介绍微生物学的检验方法有哪些？

对微生物做形态学检查是微生物检验的重要方法之一，可以有效地对细菌进行分类和鉴定。其主要是根据细菌的形态、结构、染色反应等特性来判断细菌的状态，从而为接下来的鉴定提供有力的参考依据。

一、显微镜检查

我们都知道，细菌的体积是很小，仅通过肉眼是没有办法看到的，必须借助其它放大倍数比较大的设备（比如显微镜）才可以观察到。在显微镜下可以观察到细胞的一般形态和结构，如果想要观察细菌的内部结构，则需要借助电子显微镜。显微镜有很多种类，以下为常用的显微镜：

1.普通光学显微镜

普通的光学显微镜采用自然光或灯光作为光源，光源的波长在0.4微米左右，显微镜的分辨率是波长的一般，也就是0.2微米。但是人体肉眼能见的最小物质为0.2毫米，和显微镜的分辨率相差了很多，所以需要用油（浸）镜将目标物放大1 000倍，这样才能比较清晰地进行观察。

普通的光学显微镜一般可用作观察细菌、真菌、放线菌等。

2.暗视野显微镜

暗视野显微镜，顾名思义就是在视野呈现暗色的显微镜，其原理是在普通光学显微镜中安一个暗视野聚光器，这样就使光线不能从中间直接透过。目标物接收到从聚光器边缘射出的光之后可以发生散射，就能在视野较暗的情况下观察光亮的微生物，形成一个明显的反差，观察结果会更清晰。

暗视野显微镜一般用作观察不染色微生物形态和运动，比如细菌、螺旋体等。

3.相差显微镜

相差显微镜主要是利用相差板的光栅作用，最光的相位和振幅进行改变。这样一来，当光线透过不染色标本时，密度不同的部位就会呈现不一样的结果。

相差显微镜一般可用于微生物形态、运动和内部结构的观察。

4.荧光显微镜

荧光显微镜和普通光学显微镜的原理和结构没有太大的区别，主要在光源、滤光片和聚光器上有所不同。

荧光显微镜主要用于检测或鉴定对荧光色素染色、與荧光抗体结合的细菌。

5.电子显微镜

电子显微镜是以电子流为光源，波长与可见光相比差几万倍，所以电子显微镜的分辨率非常高。除此之外，电子显微镜还用磁性电圈作为光学放大系统。这两者的共同作用使得电子显微镜的放大倍数远远优于其它任何显微镜。

电子显微镜一般用于观察病毒、细菌的内部结构等。

二、不染色标本检查

不染色标本主要用于细菌形态、运动情况的观察。细菌在未染色状态下，主要是利用光的折射以及细菌和周围环境的明暗对比来进行观察。有鞭毛的细菌运动相较于无鞭毛的细菌更活泼，无鞭毛的细菌则做不规则的布朗运动。还有一些螺旋体（比如梅毒苍白密螺旋体等）有着自身特别的运动方式。通过观察细胞的运动形态可以进一步对种类进行鉴定，有很重要的临床意义。常用的不染色标本检查方法有压滴法、悬滴法和毛细管法等。

1.悬滴法

在凹玻片凹孔周围涂凡士林，用接种环取液放在盖玻片中央，凹玻片凹孔与液滴中央对准，盖上，翻转，轻压盖玻片，观察其与凹玻片粘紧封闭后，就可以进行观察，一般选择高倍镜或暗视野。

2.压滴法

压滴法的操作方法和悬滴法基本相同，只是将凹玻片换成了玻片，也没有使用凡士林。在盖玻片的时候需要注意不要让液滴外溢，防止产生气泡。

三、染色标本检查

细菌在染色状态下，颜色会和周围环境形成很明显的对比。一般可用于观察细菌的形态、特殊结构比如如荚膜、鞭毛、芽孢等，还可以对细菌进行鉴别。

对细菌进行染色的一般步骤是：涂片—固定—染色—（脱色）—（复染）。

1.涂片制备

血液、分泌物、排泄物、穿刺液和液体培养物，可以直接将目标物放在载玻片上作薄膜涂片。尸检或感染动物组织，一般用病变局部涂抹采样的棉拭子直接涂片。

2.固定

固定的主要目的是将细菌杀死，凝固细菌蛋白及结构，这样可以让染色剂快速地进入细胞内，便于染色;而且细菌可以粘附在载玻片上，防止在水洗这一步骤被水冲掉。

3.染色

不同的细菌会选择不同地染色剂以及染色方法。

4.脱色

脱色这一步的目的是检查脱色剂可以查出细菌与染料结合的稳定程度，作为鉴别染色之用。

5.复染

进行了脱色处理的细菌需要用复染液作复染来观察。需要注意的是复染不宜过度，防止掩盖初染的颜色。