蒙药饮片煨诃子的质量标准研究

敖格日乐图，孙丽君，肖志彬，王玉华，那生桑

作者单位：1内蒙古自治区国际蒙医医院药学部，内蒙古自治区 呼和浩特 010065；2内蒙古医科大学药学院，内蒙古自治区 呼和浩特 010110

诃子为使君子科植物诃子（Terminalia chebula Retz.）或绒毛诃子（Terminalia chebula Retz.var.tomentella Kurt.）的干燥成熟果实，分布在我国云南、广西等地［1］，主要含三萜类、鞣质类、番泻苷A、诃子素等化学成分，具有涩肠止泻、敛肺止咳、降火利咽的功效。据《中国药典》（2015版）及各地方炮制规范（内蒙古、四川、广西、甘肃等）［2-5］，诃子主要的炮制方法有净制、切制、煨制、炒制、蒸制、砂烫制、炒炭等。其中，煨制后鞣质含量显著增高，收涩作用增强［6］。前期实验中，在传统工艺的基础上，通过正交试验已优选出诃子面煨制的工艺条件［7-8］，得到不同批次的煨诃子。因此，本实验自2017年5月至2018年5月对煨诃子质量标准进行系统研究，为蒙药材诃子煨制工艺的规范化提供了理论依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器硅胶G薄层板（青岛海洋化工有限公司），DV215CD型十万分之一电子分析天平（奥豪斯仪器上海有限公司），Dionex Ultimate3000型高效液相色谱仪（赛默飞世尔科技有限公司），KQ-500E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），AR224CZ电子天平（奥豪斯仪器上海有限公司）。

1.2 试药诃子药材按《中国药典》进行检验符合诃子项下的有关规定；没食子酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110831-201605）、诃子对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121206-201508）；甲醇、乙腈、磷酸均为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 制法在传统工艺的基础上［5］，通过正交试验已优选出诃子面煨制的工艺条件，得煨诃子制法。即取诃子，照煨法（本附录Ⅱ［4］），用面皮包裹约2～3 mm厚，晾至半干，在烫砂中埋煨（410±10）℃，7 min，面皮呈焦黄色时取出（每100 kg诃子，用面粉300 kg）。

2.2 性状本品形状如诃子，质地较酥脆。具焦香气，味酸、极涩。

2.3 显微鉴别本品粉末黄褐色，显微特征同诃子。粉末中以纤维束、石细胞、木化厚壁细胞、靴状厚壁细胞以及草酸钙簇晶为主要显微特征。见图1。

图1 煨诃子粉末显微特征（×400）：A为纤维束；B为厚壁细胞；C为石细胞；D为为簇晶

2.4 薄层色谱鉴别

2.4.1对照药材的薄层色谱鉴别 取煨诃子粉末，照《中国药典》（2015年版）诃子项下进行薄层色谱鉴别。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图2。

2.4.2没食子酸的薄层色谱鉴别 取煨诃子（去核）粉末0.5 g，加50%无水乙醇30 mL，加热回流30 min，滤过，滤液，蒸干，残渣用甲醇3 mL溶解，作为供试品溶液。另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-冰醋酸-水（12∶10∶0.4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图3。

图2 煨诃子薄层鉴别图：1为煨诃子1（批号：150801；产地：广西）；2为煨诃子2：（批号：151002313；产地：云南）；3为煨诃子3（批号：1508001；产地：广东）；4为没食子酸对照品；5为诃子对照药材

图3 煨诃子薄层鉴别图：1为煨诃子1（批号：150801；产地：广西）；2为煨诃子2（批号：151002313；产地：云南）；3为煨诃子3（批号：1508001；产地：广东）；4为没食子酸对照品

2.5 检查［3］

2.5.1水分 分别称取3批次煨诃子粉末约2.0 g，每批2份，照水分测定法（通则0832第二法）进行测定。结果见表1。

表1 煨诃子的水分测定结果

结果表明，3批次供试品的水分为7.03%～7.40%，结合诃子该项下的规定，故拟定水分为13.0%。

2.5.2总灰分 分别称取3批次煨诃子粉末约2.0g，每批2份，照灰分测定法（通则2302）进行测定。结果见表2。

表2 煨诃子的灰分测定结果

结果表明，3批次供试品的灰分为1.94%～2.88%，结合诃子该项下的规定，故拟定灰分为5.0%。

2.5.3浸出物 分别称取3批次煨诃子（批号见表1）粉末约2.0 g，每批2份，照水溶性浸出物测定法（通则2201）项下的冷浸法测定。结果见表3。

表3 煨诃子浸出物测定结果

结果表明，3批次供试品的水溶性浸出物为42.21%～61.34%，结合诃子该项下的规定，故规定水溶性浸出物不得少于30.0%。

2.6 含量测定

2.6.1色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为Apollo C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以甲醇-0.2%磷酸水溶液（8∶92）为流动相；检测波长为270 nm；流速为1.0 mL/min；柱温25℃。理论塔板数按没食子酸峰计算应不低于3 000。

2.6.2对照品储备溶液的制备 取没食子酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度为0.40 mg/mL的溶液，即得。

2.6.3供试品溶液的制备 称取本品粉末（过四号筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液25 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.6.4线性关系考察 精密吸取对照品储备液4mL，置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度。精密吸取2、5、10、12、15、17、20 –L，分别注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定，记录各图谱的没食子酸峰面积积分值（Y）。以进样量（X：μg）对峰面积积分值（Y）进行回归分析，回归方程为Y＝35.107X–0.015 7，r＝1。结果见表4和图4。

结果显示，没食子酸在0.32～3.2 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

表4 标准曲线测定数据（n＝7）

图4 没食子酸标准曲线图

2.6.5精密度试验 取供试品约0.5 g，精密称定，按“2.6.3”项下方法操作，制备供试品溶液，进样5 μL，按上述色谱条件测定，连续进样6针。结果见表5。

表5 精密度试验结果（n＝6）

结果显示，RSD＝0.28%（n＝6），表明该方法精密度良好。

2.6.6重复性试验 取同一批次的供试品粉末约0.5 g，精密称定，共6份。分别按“2.6.3”项下方法操作，制备供试品溶液，进样5 μL，按上述色谱条件测定。结果见表6。

表6 重复性试验结果（n＝6）

结果显示，RSD＝1.59%（n＝6），表明该方法重复性良好。

2.6.7稳定性试验 取同一份供试品溶液，分别在0、1、2、4、6、8、12 h测定。结果见表7。

表7 稳定性试验结果

结果显示，RSD＝0.31%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.6.8加样回收率试验 取已知含量供试品（批号：1508001）约0.25 g，精密称定，共6份。精密加入没食子酸对照品约3.496 mg，照“2.6.3”项下方法操作，测定没食子酸含量，并计算加样回收率。结果见表8。

表8 加样回收试验结果（n＝6）

结果显示，该方法平均回收试验为99.44%，RSD＝1.03%（n＝6），表明方法准确度良好。

2.6.9样品含量测定 分别称取上述3批次煨诃子粉末约0.5 g，精密称定，按“供试品溶液的制备”方法操作，制备供试品溶液，进样5 μL，按上述色谱条件测定。结果见表9。

3 讨论

3.1 薄层色谱鉴别煨诃子炮制后药性缓和，涩敛之性增强，主要源于鞣质类成分、番泻苷A等化学成分的变化，对三萜酸类成分影响较小，故本文以生品诃子对照药材为对照对其进行TLC鉴别，此为方法一。但该法没有检出没食子酸，而没食子酸为煨诃子主要有效成分，故本文又以没食子酸对照品为对照对其进行TLC鉴别，即方法二。

表9 不同批次煨诃子中没食子酸含量测定结果

结果显示，3批次供试品中没食子酸平均含量为0.74%～1.39%，均比诃子原药材的没食子酸含量有所提高，考虑到药材的采收时间、地点不同等因素，拟定为本品按干燥品计算，含没食子酸（C7H6O5）不得少于0.74%。

3.2 含量测定本研究对煨诃子的提取方法（超声提取、加热回流提取）、提取时间（20 min、30 min、40min）及提取溶剂（甲醇、70%甲醇、50%甲醇）进行了选择。结果显示，以甲醇为提取溶剂，超声提取30 min时效果最佳。

本研究对煨诃子的水分、总灰分、浸出物、显微鉴别、薄层鉴别、及含量测定等项目进行较为系统和全面地研究。其测定方法简便准确，方法学考察表明精密度、重复性、稳定性、加样回收率的范围均符合要求，故为蒙药饮片煨诃子的质量控制提供了有力的实验依据。