针刺不同腧穴对急性尿潴留大鼠膀胱功能的影响＊

何 婷，杨 硕，莫 倩

（贵州中医药大学针灸骨伤学院 贵阳 550001）

尿潴留（Urinary Retention，UR）是膀胱内充满尿液而不能正常排出的一种临床表现[1]，分急性尿潴留（Acute Urinary Retention，AUR）和慢性尿潴留（Chronic Urinary Retention,CUR）,其中，AUR是临床常见急症之一，尤以老年男性多见，若不及时处理，易继发尿路感染和反流性肾病，甚至导致肾衰竭、膀胱破裂等一系列严重并发症[2,3]。AUR 最常见的病因为尿道机械性梗阻和药物相关性尿潴留[4]。目前临床上多采用引流尿液的方法被动等待膀胱功能的恢复，但这种治疗方法对减轻膀胱损害、促使膀胱功能恢复作用甚微，甚至容易发生尿路感染[5,6]。既往临床研究表明针刺可以促进患者膀胱自主运动,对于改善患者排尿障碍症状疗效较好[7-10]，本实验从穴位特异性入手，考虑针刺治疗本病的疗效与所选腧穴神经节段可能相关，观察针刺不同腧穴对AUR大鼠的尿动力学指标的影响，从而探讨针刺治疗AUR的穴位特异性，进一步为临床实践选穴提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

2 月龄SPF 级雄性Sprague-Dawley 大鼠40 只，体重180-220 g，由第三军医大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（渝）2017-0002。

饲养条件：室内温度20-25℃，相对湿度（45±5）%，标准颗粒饲料饲养，自由饮水，适应性喂养72 h。本项研究的动物实验过程均遵守美国国立卫生院倡导的实验动物关怀和使用指导原则（Guide of Care and Use of Laboratory Animals，NIH）和以“减少（Reduction）、替代（Replacement）和优化（Refinement）为核心的动物实验3R”原则。

1.2 伦理审查

实验经过贵州中医药大学第二附属医院伦理委员会审查，编号2016097。

1.3 主要试剂和仪器

1.3.1 试剂

10%氨基甲酸乙酯（Ethyl carbonate，C3H7NO2，批号：30191228，国药集团化学试剂有限公司），0.9%氯化钠注射液（normal saline,NS，批号：国药准字H32025237，江苏恒瑞医药股份有限公司）。

1.3.2 仪器

ML866 型Powerlab4/30 数据采集系统（埃德仪器国际贸易上海有限公司），ML221型Bridge Amp桥式放大器（埃德仪器国际贸易上海有限公司），MLT0380 型压力传感器（埃德仪器国际贸易上海有限公司），微量注射泵（浙江史密斯医学仪器有限公司），69001 型恒温控制板（深圳市瑞沃得生命科技有限公司），便携式电子天平（长沙湘平科技发展有限公司），硬膜外导管、50 mL 一次性使用无菌溶药注射器（山东威高集团医用高分子制品股份公司），一次性无菌针灸针（Φ0.20×25 mm，苏州医疗用品厂有限公司）。

2 方法

2.1 实验前准备

2.1.1 仪器设置

Chart记录系统的参数设置：采样频率：20 kHz；桥式放大通道低通滤波：10 kHz；数字滤波低通：1Hz。将压力感应器通过医用T 形三通管与硬膜外导管连接。将医用T 形三通管、压力感应器和硬膜外导管中充满0.9%氯化钠溶液，在医用T 形三通管通过硬膜外导管开到通大气状态时，将系统压力调零。

2.1.2 动物麻醉

大鼠以10%氨基甲酸乙酯溶液（5 mL·kg-1）腹腔注射进行麻醉，将其置于恒温控制板上以维持其体温在38℃左右。以有齿镊子给予大鼠下肢疼痛刺激时，若大鼠无疼痛反射，角膜反射存在，视为麻醉成功。实验过程中，若大鼠出现下肢收缩，可用10%氨基甲酸乙酯溶液1 mL·kg-1腹腔注射进行补充麻醉一次。

2.2 急性尿潴留大鼠模型制备

参照文献[11]所建立膀胱过度充盈模型进行，利用Chart 7软件以实时记录大鼠基础膀胱内压，造模后大鼠基础膀胱内压远高于正常状态，说明尿潴留现象存在，造模成功。

2.3 尿动力学评价

大鼠腹部备皮，以75%酒精局部消毒腹部，在下腹部沿正中线作约1 cm 纵向切口，逐层打开腹腔，暴露膀胱。膀胱顶部插入静脉留置针留置。打开Chart7软件以实时记录膀胱灌注期间大鼠基础膀胱内压、排尿时膀胱最大压力、排尿间隔时间、排尿时膀胱收缩时间等尿动力学指标。

2.4 实验分组及干预方法

将大鼠按随机数字表法随机分为4组：模型组、三阴交组、合谷组、中髎（次髎）组，每组各10只。造模成功后各组进行相应的干预：①模型组：不给予干预；②三阴交组：垂直进针3-4 mm；③合谷组：垂直进针1-1.5 mm；④中髎（次髎）组：垂直刺入第2 骶后孔，深度约15 mm。

各针刺组均采用手法运针5 min，提插（频率80-120次·min-1），捻转（频率80-120次·min-1，每隔10 min进行上述的手法操作，共计3 次。同时打开Chart7 软件以实时记录尿动力学数据。

2.5 取穴

①三阴交：于后肢内踝尖直上10 mm左右[12]；②合谷：于前肢第一、二掌骨之间[12]；③中髎（次髎）：因大鼠只有三对骶后孔[13]，并以第2 骶神经对膀胱功能的调控为主[14]，所以大鼠第2 骶后孔相当于人类的中髎和次髎穴，其中髎（次髎）在第2、3 骶骨棘突间隙正中旁开约5 mm[15]。

2.6 统计学方法

本研究采用Chart 7 软件记录排尿时膀胱收缩时间、最大逼尿肌收缩压、排尿间隔时间、排尿阈值压、收缩后膀胱内压等图形转化为数据。采用SPSS23.0 软件进行统计分析。实验数据均为正态分布的计量资料，以均数±标准差（xˉ±s）表示。各组数据自身前后比较采用配对t 检验，多组间比较采用单因素方差分析，继以SNK 检验做两两比较。以P ＜0.05 作为差异具有统计学意义。

3 实验结果

3.1 大鼠正常生理状态与AUR状态尿动力学比较

AUR 状态下，模型组大鼠基础膀胱内压远高于正常基线（P ＜0.01），说明尿潴留现象存在，造模成功；与正常基线相比，模型组最大逼尿肌收缩压下降（P ＜0.01），说明尿潴留后逼尿肌收缩能力下降；收缩后膀胱内压高于正常基线（P ＜0.01），说明膀胱收缩后膀胱内仍存大量残余尿；排尿阈值压亦上升（P ＜0.05）；排尿间隔时间远长于正常基线，但其膀胱收缩时间未见显著差异（P ＞0.05）（表1）。

3.2 针刺对各组AUR大鼠最大逼尿肌收缩压、排尿阈值压、收缩后膀胱内压的影响

AUR 状态下，针刺前各组大鼠最大逼尿肌收缩压、排尿阈值压、收缩后膀胱内压与模型组相比差异无统计学意义（P ＞0.05），说明各组具有可比性。针刺治疗后，三阴交组、中髎（次髎）组最大逼尿肌收缩压较针刺前明显升高（均P ＜0.01），收缩后膀胱内压较针刺前明显减少（均P ＜0.01），排尿阈值压未见明显变化（P ＞0.05）；两组组间比较，最大逼尿肌收缩压、排尿阈值压、收缩后膀胱内压未见显著差异（P ＞0.05）；合谷组最大逼尿肌收缩压、排尿阈值压、收缩后膀胱内压未见明显变化（P ＞0.05）（表2）。

表1 大鼠正常生理状态与AUR状态尿动力学比较（xˉ±s，n=10）

3.3 针刺对各组AUR大鼠排尿时膀胱收缩时间、排尿间隔时间的影响

AUR 状态下，针刺前各组大鼠排尿时膀胱收缩时间、排尿间隔时间与模型组相比差异无统计学意义（P ＞0.05），说明各组具有可比性。针刺治疗后，三阴交组、中髎（次髎）组排尿时膀胱收缩时间较针刺前增加（均P ＜0.05），排尿间隔时间缩短（均P ＜0.01）；两组组间比较，排尿时膀胱收缩时间、排尿间隔时间未见显著差异（P ＞0.05）；合谷组排尿时膀胱收缩时间、排尿间隔时间未见显著差异（P ＞0.05）（表2）。

4 讨论

目前，国际上普遍认为AUR多由于下尿路机械性梗阻突然加重，尿液不能排出，膀胱过度充盈导致盆神经和阴部神经电活动减低以及逼尿肌收缩力下降而引起[16,17]。因此，本实验中急性尿潴留模型参照文献[11]所建立膀胱过度充盈模型进行，采用结扎大鼠外尿道造成梗阻，同时予生理盐水进行膀胱灌注导致膀胱过度充盈进行制备。造模后模型组大鼠基础膀胱内压远高于正常基线，与文献报导[11]一致，说明尿潴留现象存在，造模成功。

表2 针刺对AUR大鼠尿动力学指标的影响（xˉ±s；n=10）

本实验研究结果显示，与正常基线相比，模型组最大逼尿肌收缩压下降，收缩后膀胱内压、排尿阈值压升高，排尿间隔时间延长，与以往文献报道[16]一致，这可能与AUR大鼠膀胱过度充盈导致膀胱炎症渗出、上皮调亡细胞增多,盆神经和阴部神经电活动减低、逼尿肌收缩能力下降有关[17-20]。

既往实验研究表明[22,23]AUR 损害最严重集中在尿潴留及排空后的l-4 h，故本实验在设计上主要观察其AUR 造模后膀胱功能受损最严重的时间段,以排尿时膀胱收缩时间、最大逼尿肌收缩压、排尿间隔时间、排尿阈值压、收缩后膀胱内压为观察指标，目的在于试图证实针刺在AUR 受损最严重时段对其膀胱功能的调节作用。从实验结果看，针刺干预后，三阴交组、中髎（次髎）组与针刺前相比，最大逼尿肌收缩压明显升高，收缩后膀胱内压明显减少，排尿时膀胱收缩时间增加，排尿间隔时间缩短；合谷组最大逼尿肌收缩压、排尿阈值压、收缩后膀胱内压、排尿时膀胱收缩时间、排尿间隔时间均未见显著差异。说明针刺在AUR 受损最严重时段对其膀胱功能有一定的调节作用，且这种调节作用可能与所选穴位的位置有关。

在本实验中，我们选取的中髎/次髎穴位于腰骶部,适对S3/S2骶后孔,从神经节段位置看，其深处有S3/S2 神经根前支。相关研究[24]表明,当大鼠逼尿肌处于相对静止状态时，针刺上述腧穴可起到兴奋作用，但其深度必须达到骶神经根前支位置（因大鼠只有3 对骶后孔,我们刺激到的骶神经根前支为S2,相当于人类的S2/S3）才能达到良好的调节膀胱功能的效应。三阴交穴位于胫骨的内侧面，从神经节段位置看其感觉神经由L4的隐神经分布，而其运动神经由L5及S1支配，深处有胫后神经[25]。针刺与膀胱同神经节段但远离病变部位穴位三阴交及同神经节段且相邻病变部位的穴位中髎（次髎）都使AUR大鼠最大逼尿肌收缩压升高，收缩后膀胱内压减少，排尿时膀胱收缩时间延长，排尿间隔时间缩短，这可能与三阴交、中髎（次髎）与低位的骶髓排尿中枢多有重叠有关。而合谷穴在手背第一、二掌骨之间，略近于第二掌骨中点处，其下有桡神经浅支、尺神经深支分布[26]，其神经分布与排尿中枢及膀胱神经节段无重叠，对膀胱调节效应不大。

在本研究中，三阴交组与中髎（次髎）组针刺后排尿时膀胱收缩时间、最大逼尿肌收缩压、排尿间隔时间、排尿阈值压、收缩后膀胱内压未见显著差异，这可能与三阴交、中髎（次髎）的神经节段均与骶髓排尿中枢多有重叠有关。由于本实验尚未对针刺后神经电活动进一步探查，故深刺三阴交、中髎（次髎）后逼尿肌的肌电活动、盆神经传入电活动是否有显著差异有待于进一步研究。

综上所述，针刺治疗AUR大鼠效应具有穴位特异性，主要是通过刺激相关神经节段腧穴从而使AUR大鼠最大逼尿肌收缩压升高、收缩后膀胱内压减少、排尿时膀胱收缩时间增加、排尿间隔时间缩短，这也提示我们今后临床选择治疗与膀胱相关的疾病时，可以选择与膀胱神经节段相关的腧穴来提高临床疗效。