三种麻醉剂对小鼠免疫功能的影响研究

杜俊勇 曲宇霆 苏比努尔 沙达尔丁

【摘要】探究水合氯醛、乌拉坦、戊巴比妥对小鼠免疫功能的影响。方法：通过给小鼠短期注射水合氯醛、乌拉坦、戊巴比妥测定小鼠免疫器官生长指数测定、适应性免疫和固有性免疫功能等，检测水合氯醛、乌拉坦、戊巴比妥对小鼠外周免疫器官脾脏和胸腺生长指数、B细胞生成抗体及巨噬细胞吞噬功能的影响。结果：注射水合氯醛，乌拉坦和戊巴比妥的小鼠在免疫器官的重量，固有性免疫和适应性免疫功能均显著低于对照组（P<0.05）。结论：水合氯醛，乌拉坦，戊巴比妥均可使小鼠免疫功能下降。

【关键词】水合氯醛;乌拉坦;戊巴比妥;免疫功能

【中图分类号】R821.4+2      【文献标识码】A     【文章编号】2095-6851（2019）08-034-02

水合氯醛在医学上常用作麻醉药和抗惊厥药，用于失眠烦躁不安及惊厥，对胃肠道有很强的刺激性;乌拉坦常用于试验动物麻醉，癌症模型建立;戊巴比妥用于动物麻醉实验，仅供科研使用，为作用的巴比妥类催眠药，用作催眠和麻醉前给药，亦可用于治疗癫痫和破伤风的痉挛。

1 动物与试剂

1.1 动物

健康雄性昆明小鼠，体重（35

SymbolqB@ 2）g，由武汉科技大学校医院提供。

1.2 试剂

水合氯醛，乌拉坦，戊巴比妥，根据查阅文献结果将其加水配成分别为350mg/kg、750mg/kg、40mg/kg的溶液，该剂量均为最适剂量。

2 方法

2.1 实验动物分组 将小白鼠随机分为3个大组，每组数量分别为35只、20只、20只，分别用于免疫器官生长指数的测定、特异性免疫功能测定、非特异性免疫功能测定。小鼠的生理状况大致一致，每一大组又均分为4个小组。

2.2 免疫器官生长指数测定 试验第一天，将第一大组的35只小鼠分为4组，一组为空白组5只小鼠;其它三组分别10只小鼠，分别用三种麻醉剂进行腹腔注射，之后将其放置饲养箱中。麻醉后第七天，再次对小鼠分别进行腹腔注射，麻醉后放入饲养箱。麻醉后第八天，三个小组随机抽取5只小鼠劲椎脱臼处死后剖杀;麻醉后第十五天，将三个小组的剩余老鼠处死后剖杀。每次剖杀时，剖杀前空腹称重，剖杀后立即取出脾脏、胸腺称重，并计算生长指数。生长指数=免疫器官重量（mg）/小鼠重量（g）。

2.3 适应性免疫功能测定 试验第一天，将20只小鼠等分成4组，一组为空白组，其他3组分别用三种麻醉剂进行腹腔注射，之后将其放置饲养箱中;麻醉后第7天，再次对小鼠分别进行腹腔注射麻醉剂，麻醉后放入饲养箱。麻醉后第8天，取无脂载玻片，用双面胶带在载玻片两端和中间各粘一条，然后再覆盖上同样的载玻片，即形成两个小室。将此双层玻片的一侧长边浸入融化的石腊池中以封闭小室的一边。将5%绵羊红细胞 0.4 mL注射入小白鼠腹腔。麻醉后第13天后拉脱颈椎处死，取出脾脏称重后放在已加入6 mL Hanks液的平皿中，用不锈钢网研磨后，经尼龙布过滤放入试管，1000r/min离心5min，洗2次。将沉淀的脾细胞重悬Hanks液中，细胞计数配成1×107/mL。将上述脾细胞 Hanks液50μL、15% SRBC 50μL、1∶6 ～ 1∶8补体50μL、Hanks液250 μL混匀，用微量加样器将混合液注入事先制备好的小室中，然后以石蜡封口，放37℃温箱1h，取出。借助放大镜，进行空斑计数，计算1×106个脾细胞所含空斑数。

2.4 固有性免疫功能测定 试验第一天，将20只小鼠等分成4组，一组为空白组，其它3组分别用三种麻醉剂进行腹腔注射，以后将其放置饲养箱中。麻醉后第7天再次对小鼠分别进行腹腔注射麻醉剂，麻醉后放入饲养箱。麻醉后第8天，经小白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤1mL，刺激小白鼠产生无菌性炎症，诱导巨噬细胞在腹腔的聚集、活化。麻醉后第12天腹腔注射1%鸡红细胞1mL，30分钟后注射2mL Hanks液，颈椎脱臼法处死小白鼠，解剖小白鼠暴露腹腔，用尖吸管尽可能多地冲洗出小白鼠腹腔的巨噬细胞，并取脾脏称重。收集腹腔液，置于洁净试管内，加1-2滴1%碱性美兰染色，涂片于载玻片上， 37℃溫箱干燥，油镜镜检。

3 结果

3.1 免疫器官重量和生长指数测定 水合氯醛、乌拉坦、戊巴比妥这三组小鼠的脾脏和胸腺的生长指数均显著低于对照组。

3.2 适应性免疫（B细胞）功能测定 由于B细胞所分泌的抗体和绵羊红细胞结合形成抗原抗体复合物，在补体作用下可使红细胞溶解于特制的小室内，形成肉眼可见的溶血空斑，1个空斑即代表1个PFC。对照组、水合氯醛组、乌拉坦组、戊巴比妥组小鼠1×106个B细胞所含PFC个数。三个实验组的PFC个数显著低于对照组。

4 讨论

研究表明正常剂量的水合氯醛，乌拉坦和戊巴比妥均对人体有毒性，对免疫系统也有较大损伤。本实验进行了免疫器官生长指数的测定、吞噬细胞功能的测定、B细胞功能的测定，其结果表明了机体免疫功能的强弱。研究结果表明，三种麻醉剂对小鼠的免疫功能均有影响。

参考文献：

[1] 熊平源，王强.医学免疫学实验教程[M].武汉：武汉大学出版社. 2011.8-9.（2014-）4-30 收稿 2014-）7-）7 修回）

[2] 郑杰蔚，陆丰荣，李国樑，谢植伟，钟怡洲，曾丽海，黄曼琪，张雅婷，殷霄，曾玉梨，高晨，张海燕，吴洁娇，江亮，黄振烈.不同麻醉剂及采血方式对SD大鼠和昆明小鼠血常规影响[J].中国职业医学，2018，45（01）：51-54