桑叶粉混合发酵饲料对草鱼健康性及鱼肉风味品质影响

黄传书 赵 珮 黄先智 唐小平 刘 艳 雷 霆 罗 莉

(1. 重庆市蚕业科学技术研究院，重庆 400700；2.西南大学蚕学与系统生物学研究所，重庆400716；3.西南大学动物科技学院，重庆 400716)

桑叶蛋白质含量高，并具降糖、降脂、消炎抗菌等作用，能提高畜禽水产动物的免疫力，在健康养殖方面具有巨大的发展潜力。研究发现：桑叶除含有丰富的矿物质及维生素外，还含有许多特殊功效的天然活性物质成分。100g干物质含甾醇46mg(比绿茶高3～4倍)，还含有异槲皮苷200～500mg、槲皮苷30mg、槲皮苦素100mg等能抑制脂质氧化作用的黄酮类物质。在饲料中添加10%的桑叶不会影响罗非鱼的生长性能,同时可有效调节罗非鱼的脂质代谢,改善其肌肉品质[1]，发酵桑叶能剂量依赖性地降低高脂血症罗非鱼的血脂、血糖水平，提高机体的抗氧化能力[2]，饲料中添加MLM和FMLM对胡须鸡有降低血脂含量、增强免疫力、提高抗氧化能力等作用[3]，发酵桑叶粉替代50%的鱼粉时，巴塔野鲮的增重率、特定生长率明显高于对照组[4]，在草鱼饲料中添加5%桑叶粉对其生长性能无显著影响，当桑叶粉含量达到10%时，其生长性能受到抑制[5]。

草鱼是中国重要的淡水养殖经济鱼类，产量位居全国淡水养殖之首，在集约化水产养殖过程中，普遍采用提高饲料脂肪水平以节约蛋白质的策略，以达到促进鱼类生长，减少氮磷排放，保护养殖水体环境的目的。由于草鱼摄食量大、对能量的需求低以及对高脂饲料利用能力低，饲料中脂肪水平过高时容易导致鱼体脂肪沉积过多、机体抗氧化能力下降，脂质过氧化程度加重，甚至导致高脂血症和营养性脂肪肝的发生，危害鱼类的生长。本研究以草鱼幼鱼为试验对象，研究桑叶发酵饲料对投喂高脂饲料的草鱼生长、肌肉营养组成、血液指标、肝脏脂肪含量、抗氧化能力的影响，旨在为探索解决高脂饲料导致草鱼脂肪沉积增多、抗氧化能力降低及脂质代谢紊乱等问题，为草鱼的健康养殖提供数据参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验饲料

桑叶粉(桐乡青高温杀青烘干)、进口鱼粉、菜籽粕、棉籽粕、豆渣(豆粕)、面粉、维生素和矿物质混合料、发酵剂。

1.1.2 试验鱼苗

从渔场购0.55kg左右大小草鱼苗，配0.52kg左右白鲢，整理前鱼池内鲫鱼、鲤鱼留大小比较均匀若干尾(共9.10kg)。

1.2 养殖鱼塘

实验鱼塘为重庆市蚕业科学研究院果桑品种比较试验园100m2水面鱼池。于2017年9月12日清塘，用鲜石灰全池均匀撒布消毒，用铁丝网将鱼池均分为2等分，保证两边鱼苗(草鱼、鲫鱼、白鲢等)不能混，只有水可以两边流动，两边鱼池分别放置长、宽1.2m×0.8m的活动饲料台，便于每日饲料食下情况观察记录，鱼池准备完毕关水15d左右投放鱼苗。

1.3 鱼苗投放

2017年9月26日，从市场购买0.55kg左右大小的草鱼苗50尾、0.52kg左右大小的白鲢12尾及原池中鲫鱼(鲤鱼)共9.10kg，分别放在铁丝网分隔的两边鱼池，2d后开始按比较试验设计投放饲料。

1.4 精饲料配制

(1)处理组(CL)：桑叶粉混合发酵饲料,按干物重量比，鱼粉4.9%～5.3%、豆渣19.0%～22.0%、豆粕38.0%～42.0%、棉籽粕26.0%～28.0%、维生素与矿物质预混料0.8%～1.2%、桑叶粉3.0%～5.0%、发酵剂0.2%。

(2)对照组(CK)：无桑叶粉发酵饲料，按干物重量比，鱼粉4.9%～5.3%、豆渣19.0%～22.0%、豆粕38.0%～42.0%、棉籽粕26.0%～28.0%、维生素与矿物质预混料0.8%～1.2%、面粉3.0%～5.0%、发酵剂0.2%。

按食用草鱼饲料国家标准(GB/T36205-2018)粗蛋白≥20.0%、粗脂肪≥2.0%、灰分≤13.0%，达到所配混合饲料粗蛋白36.0%～37.5%、粗脂肪3.7%～3.9%、灰分7.0%～10.0%、总能量11.5～12.0MJ/kg。

将上述饲料混合均匀，在25℃～28℃下，发酵48h干燥备用。

1.5 饲养

对照组(CK)用青草+无桑叶混合发酵饲料饲养，处理组(CL)用青草+桑叶粉混合发酵饲料，每天早上8:30和下午5:00各投放两次饲料，每次投放饲料前，将上次投放饲料剩余量进行测量记录，便于计算食下量。

1.6 记录与抽样调查方法

1.6.1 记录

记录投放鱼苗重量、每日天气情况、饲料食下量、鱼儿生长情况等内容。每次投放饲料前，将上次投放饲料全部清除并称重，计算食下量，再根据上次食下量，确定下次饲料投放量。

1.6.2 抽样调查

将鱼塘所有鱼全部清塘，并分类称重，将未受伤草鱼按CK和CL两组分别放在充氧水箱，并在水箱放入适量MS-222 麻醉剂进行麻醉减少草鱼活动，直接送到实验室检测肝脏组成、肉质、风味物质、血清脂质、肝脏抗氧化能力等指标。

1.7 样品的制备与分析

将取回样品，禁食24h后称重，每个重复随机取4 尾鱼，用MS-222进行麻醉，剥离出内脏、肝胰脏，用于肝体指数(HSI)和肝脂含量的测定; 每个重复另随机取3尾鱼于尾静脉取血，于4000×g4℃条件下离心10min，收集血清，-20℃保存备用。

血脂指标均采用全自动生化分析仪(日立7100)测定，包括血清总胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量。血清超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)含量采用试剂盒(南京建成生物工程研究所生产)进行测定。蛋白质含量采用考马斯亮蓝法测定。

1.8 数据处理与分析

部分数据采用SPSS22.0 对所得数据进行方差分析，差异较大数据直接用平均数比较。

2 结果与分析

2.1 桑叶粉混合发酵饲料能有效改善草鱼肝脏健康

由表1可知，CL组草鱼生长速度、尾均重显著高于对照。同时，CL组草鱼肝体比和脏体比较CK组草鱼比较，都有所下降，肝体比下降了71.7%，脏体比下降了30.1%，肥满度CL组低于CK组，草鱼体型优美、鳞片紧实，形体接近于野生草鱼形态，可能与添加桑叶量偏多有一定的关系，还需要进一步优化其添加量。

表1 桑叶发酵饲料对草鱼形体指标与尾增重影响比较

由表2可知，CK组草鱼肝脏颜色偏淡，脂肪附着面积、脂肪厚度显著高于CL组，CL组鱼肝脏水分、肝脏脂肪、肠脂肪含量分别为73.80%、21.30%、8.86%，鱼肝脏水分较CK组增加了6.26%；肝脏脂肪、肠脂肪分别较CK组下降了36.73%、54.38%，大幅改善了草鱼脂肪肝的状态，提高了草鱼肝脏健康。

表2 桑叶发酵饲料对草鱼肝脏脂肪的影响

2.2 桑叶粉混合发酵饲料能提高草鱼肝脏抗氧化能力

机体中自由基清除酶主要包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等。SOD可清除机体内的超氧自由基，CAT和GSH-Px可清除机体内的过氧化氢。丙二醛(MDA)是多不饱和脂肪酸过氧化的主要分解产物，是反映草鱼氧化应激的重要指标。

由表3可知，CL组草鱼与CK组草鱼比较，肝脏总抗氧化能力(T-AOC)和T-SOD均有明显增加， MDA明显降低。饲料中添加发酵桑叶粉能极显著提高草鱼抗氧化能力，对草鱼抗应激、耐缺氧能力有较大的作用，从而促进草鱼生长。

2.3 桑叶粉混合发酵饲料能有效调节血清脂肪代谢，促进草鱼健康

由表4可知，适量添加发酵桑叶粉饲养草鱼，能有效调节其脂质代谢，显著降低草鱼血清指标中的总胆固醇、甘油三酯、葡萄糖含量(P<0.05)，能有效改善高能高脂饲料对草鱼生长的不利影响，促进草鱼健康。

表3 桑叶饲料对草鱼抗氧化能力的影响

表4 桑叶饲料对草鱼血清指标的影响

2.4 桑叶粉混合发酵饲料能显著提高肉质及草鱼风味物质

由表5和表6可知，CL组与CK组草鱼比较，全鱼水分、全鱼灰分、全鱼蛋白含量差异不显著，但天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、酪氨酸等风味氨基酸含量均有显著的提高，风味物质肌苷酸含量提高19.78%、苷氨酸提高21.74%，CL组全鱼脂肪含量显著低于CK组，但肌肉脂肪含量差异不显著，说明桑叶主要是降低内脏脂肪，CL组草鱼肌肉中的不饱和脂肪酸总量高于CK组108.00%，影响肉质的油酸提高190.63%、亚油酸提高144.40%、亚麻酸提高14.29%,显著提高了草鱼的肉质和风味。

表5 桑叶饲料对草鱼全鱼和组织常规组成的影响

备注：水分外的其他成分(粗蛋白、粗脂肪和粗灰分)为干样基础。

表6 桑叶饲料对草鱼肌肉风味物质含量比较

表7 桑叶饲料对草鱼肉质脂肪酸含量比较

3 讨论

研究发现，鲜桑叶中含有一些防御蛋白、植物凝集素和丹宁等抗营养因子，对水产动物消化吸收造成负面影响，另外桑叶表面覆盖蜡质层，单胃动物难以消化利用[4]。本次试验过程中发现，在用青草饲养草鱼时，过多添加鲜桑叶对草鱼生长有一定影响，草鱼消化不完全，同时草鱼排泄物直接造成水面大量绿藻生长，直接污染水质，对草鱼生长有一定影响。饲料中添加75%的发酵桑叶养殖淡水鲶鱼(Heteropneu-stesfossilis)不影响其生长和饲料利用，用发酵桑叶粉替代50%的鱼粉饲养巴塔野鳞增重率、特定生长率显著高于对照组，而且还展现出良好的饲料利用率[4]。本试验研究发现，将适量桑叶粉与其他饲料成分混合共同发酵饲养草鱼,草鱼的健康性和生长率明显高于对照，且饲养过程中草鱼耐缺氧能力明显提高。因此，在用桑叶养殖草鱼最好不用鲜桑叶直接饲养。

SOD主要清除氧自由基，减轻或避免自由基和脂质过氧化物对动物机体造成的损伤。而CAT将SOD清除活性氧时产生的过氧化氢(H2O2)转化为水(H2O)，保护机体免受损伤，预防性给予发酵桑叶能够增加高脂血症罗非鱼血清SOD和CAT活性以及CAT/SOD，降低血清MDA含量[2]。本试验结果也进一步证实这种推断，即饲料中添加发酵桑叶能显著降低试验草鱼血清指标中的总胆固醇、甘油三酯、葡萄糖含量(P<0.05)，极显著提高了草鱼抗氧化能力，通过提高机体抗氧化能力及抑制脂质过氧化反应，改善脂质代谢功能，对改善草鱼肝脏健康，提高草鱼抗应激、耐缺氧能力有较大的作用，从而达到提高草鱼健康养殖。

用桑叶粉混合发酵饲料与常规饲料饲养草鱼比较，影响鱼肉风味物质天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、酪氨酸等含量显著高于对照(P<0.05)，全鱼脂肪含量显著低于对照(P<0.05)，但肌肉脂肪不显著，说明桑叶主要是降低内脏脂肪，桑叶草鱼肌肉中的不饱和脂肪酸总量高于对照组108.00%，影响肉质的油酸高于对照190.63%、亚油酸高于对照144.40%、亚麻酸高于对照14.29%，说明桑叶发酵饲料饲养草鱼不仅可以提高草鱼养殖健康性，还可以提高草鱼肉质和风味。

4 结论

适量添加桑叶粉混合发酵饲料，可以有效改善草鱼肝脏健康，提高草鱼抗氧化能力、抗体应激能力，从而促进草鱼健康生长。同时，还可以提高营养价值和风味物质。