刘宁芳 乐瑰琦
(1江西科技师范大学化学化工学院,江西南昌330013;2南昌市教育科学研究所,江西南昌330006)
食用菌工厂化生产过程中,时常遭受杂菌的污染,特别是链孢霉感染,轻则减产,重则几乎绝收。笔者采取对比试验的方法,查找链孢霉感染的原因,提出了应对一般感染和严重污染的对策,以供参考。
接好种的料包在培养房中培养2 d后,若发现有的料包上部、中部、底部(图1)或瓶盖处出现大量灰白色绒毛状的菌丝,表明这些料包已经被链孢霉感染了。若不及时处理,再过3~5 d,料包就会出现类似猴头菇子实体一样的分生孢子团,在气生菌丝上悬挂着成串的橘红色的分生孢子。
接种后的料包在培养房中培养2 d后,若发现培养房中5%以上的料包出现大量疏松菌丝,并呈绒毛状时,需高度重视,很有可能这间培养房中的所有料包均被链孢霉感染。此时,应密切关注链孢霉蔓延态势,当10%以上的料包出现感染症状时,必须立即清空培养房的料包;否则整个培养房的料包料面会迅速形成橘红色的分生孢子堆,并扩散到整个厂区,后果将非常严重。
链孢霉亦叫脉孢霉、粗糙脉孢霉(N.crassa)、红面包霉,俗称红霉菌。在分类学上属子囊菌亚门,粪壳霉目,粪壳霉科。链孢霉生长初期菌丝为有隔膜,分枝白色或灰色,质地疏松呈绒毛状。菌丝上的分生孢子梗,悬挂着成串橘红色的分生孢子。大量分生孢子再堆聚成团,类似猴头菇的子实体(图2)。
链孢霉广泛分布于自然界的土壤中与禾本科的植物上,在玉米秆、棉籽壳上发生的概率更高,主要是以分生孢子的方式传播为害。链孢霉污染多发生于高温季节,但在冬季也时有发生。链孢霉的孢子萌发、菌丝生长都较食用菌菌丝生长迅速,并能穿透料包封口材料,挤破料包袋,形成大量分生孢子团。在实验室中,将斜面培养基置于20~30℃的环境中,一昼夜链孢霉可长满整个试管斜面,再过数小时,便能看到橘红色的分生孢子[1]。
链孢霉孢子萌发、菌丝生长的速度均快于食用菌,而食用菌料包中的养分和含水量,以及培养房的温度等都符合链孢霉孢子迅速萌发、菌丝生长及蔓延的要求。特别是料包的封口材料受潮时,十分利于链孢霉的侵入,并在袋口形成一道橘红色的厚厚霉层。
仔细观察被感染的料包,不难发现其链孢霉感染处,要么有料包(袋)的破损,要么是料包袋口的海绵或棉花太湿,这便是链孢霉侵入点,也是造成料包被污染的根本原因。少部分感染的料包(一般低于3%),只要及时发现,妥善处理,则不会影响其他料包。
图1 一般感染症状
图2 链孢霉
一个培养房中有10%以上的料包感染了链孢霉,则为严重污染,产生严重污染的原因较为复杂,不像一般感染那样容易判断。如料包配料中糖分和淀粉的含量较高、料包灭菌不到位、料包冷却时被污染、接种未执行无菌操作规程、培养房消毒不彻底等,只要以上任何一个生产环节出现了问题,都有可能导致整个培养房中的料包被链孢霉感染。因此,需要进行对比试验,才能找到产生严重污染的真正原因。
3.2.1 栽培料的排查
主要是检查料包配料的配方,看其是否糖分和淀粉的含量过高,同时用替代配方料装袋进行对比试验,在相同的环境下培养,若替代配方的料包未被感染,则说明料包生产料配方中的糖分和淀粉含量过高,是造成料包严重污染的原因。
3.2.2 生产环境排查
一是消毒锅与冷却室是否无缝衔接,此处是否存在料包被污染的风险;二是培养房消毒是否彻底,尤其是曾被杂菌污染过的培养房一定要全面、彻底地进行消毒,检测达标后方能使用。采用同批生产料,在实验室中,保证温度、压力和时间都符合要求的情况下,完成灭菌的料包置于冷却室和培养房中培养,3~5 d后观察,如料包未被感染,则说明冷却室与培养房达到了生产标准,反之,生产环境受到了污染,是造成料包严重污染的原因。
3.2.3 无菌操作环节排查
即排查料包的灭菌与无菌室的接种操作是否规范到位。料包灭菌时,若未按操作规程排放冷空气等,会导致灭菌锅的温度、压力均未达到灭菌要求(出现假压的现象),灭菌后的料包内链孢霉的孢子依然存活,一旦放入培养房,在适宜的温度、湿度条件下,链孢霉的孢子便迅速萌发生长。取数包灭菌后的料包,放置培养房中培养,若未出现链孢霉感染,则表明此批料包已达到灭菌要求。接种时无菌操作不到位,给了链孢霉可乘之机,也能造成链孢霉严重污染。
料包既适宜食用菌生长,也非常适合链孢霉的孢子萌发与菌丝生长,而且链孢霉孢子萌发、菌丝生长的速度快于食用菌。若食用菌生产前期没有按要求把好关,料包一旦被链孢霉侵染,其营养促使链孢霉快速生长,且抑制食用菌菌丝生长,损失难以挽回。因此,食用菌生产企业要树立“预防为主,治疗为辅”的意识,各个生产环节应严格遵守操作规程,将污染的概率降到最低,方能有效地控制链孢霉的滋生[2]。
食用菌生产过程中出现的一般感染,基本上是因料包袋破裂、袋口材料受潮、操作不当擦坏料包袋等原因造成的。对此,应选择质量优良的品牌料包袋,注重保持料包袋袋口的密封材料干燥,并尽量避免人为地擦坏料包袋,不给链孢霉侵染的机会,就能有效地预防链孢霉的感染。翻堆检查时,若发现了少数链孢霉感染的料包,不要随便触碰它,应用40%克霉灵液浸湿的双层纱布包裹污染了的料包,并移至生产区外销毁。
4.3.1 培养料的选择与处理
培养料应选择无虫、无霉变的新鲜原料,陈年老料一定要暴晒后方能使用。玉米芯、甘蔗渣在使用前一定要添加2%的生石灰和0.1%的多菌灵粉剂将其充分浸透。夏季配料尽量减少玉米粉的用量,适当提高培养料pH[3]。
4.3.2 生产环境的卫生要求
食用菌生产对环境卫生的要求比较高,生产环境干燥、整洁能够大大地减少有害杂菌的滋生,为食用菌发菌、生长创造良好的条件。菌种室、冷却室、接种室、培养房、出菇房都应定期进行清扫、消毒。对于已受污染的培养房、出菇房,应用70%甲基托布津粉剂或50%多菌灵粉剂800倍液喷洒消毒。
4.3.3 严格规范灭菌与接种操作
料包灭菌时,保温升压前一定要将灭菌锅的冷空气彻底排放干净,使灭菌锅内有足够的压力温度灭菌。灭菌锅内的料包不能摆放过密,以免出现灭菌死角。灭菌锅与冷却室未做到无缝衔接,料包出锅时需点燃气雾消毒剂或链孢一熏净,趁冷热空气交换之机,在料包表面形成一个保护层。接种应在万级洁净度无菌操作室的工作台上,并严格执行无菌操作规程,接种人员尽量少在无菌操作室内走动,发现破损料包应及时贴补[4]。
链孢霉的污染严重损害了食用菌生产企业的效益,有的企业发生了链孢霉的污染,不仅一个生产周期的料包全部报废,而且很长一段时间都难以彻底清除厂区内的杂菌,给企业带来了巨大的经济损失。但链孢霉是可防可控的,只要在生产过程中,严格遵守各项工作规程,不给杂菌入侵料包的机会,是可以实现高产、稳产的目标。