四川省大豆品种花叶病毒病抗性鉴定技术规程

曾华兰，何 炼，叶鹏盛，蒋秋平，华丽霞，张 敏，王明娟，何晓敏

(四川省农业科学院经济作物育种栽培研究所，成都 青白江 610300)

大豆是四川省的主要农作物，常年种植面积在27万hm2以上，居国内第6位。大豆花叶病毒病是影响大豆产量和品质的重要病害，造成的产量损失在15%～20%，严重影响大豆产量和品质。培育和应用抗病品种是防治大豆病毒病最为经济有效的方法之一，品种的抗病性评价是选育抗病品种不可缺少的手段，育种者可根据抗性鉴定评价结果，有针对性地开展大豆抗病性筛选，以达到育出抗病品种的目的。因此，研制大豆花叶病毒病抗性鉴定技术规程，将对指导和促进四川省大豆抗病品种选育和大豆生产发展，保障大豆产量质量和安全性均具有重要意义。

1 规程的适用范围

研制的四川省大豆花叶病毒病抗性鉴定技术规程，规定了大豆抗病毒病鉴定方法和抗病性评价标准，适用于大豆育种、生产和植保单位对大豆品种、材料的抗病毒病抗性鉴定和抗病评价。

2 规范性引用文件

包括《GB 1352-2009 大豆》《GB 5084-2005 农田灌溉水质标准》《GB/T 8321农药合理使用准则》《NY/T 496 肥料合理使用准则通则》《NY/T 1276 农药安全使用规范总则》《NY/T 5335-2006 无公害食品 产地环境质量调查规范》等。

3 鉴定田块及鉴定网室

大豆品种病毒病抗性鉴定评价在人工接种鉴定网室中进行。人工接种鉴定网室建立在有利于病毒病发生的地区，正常年份感病对照品种的病情指数能达到50以上；地块要求地势平坦，土壤以沙壤土为宜。试验地土壤应符合NY/T 5335要求。

4 前期准备

4.1 供试毒源

供鉴定试验的病毒病毒源，选择我国大豆生产的主要流行株系。供试毒源应来自于四川大面积大豆生产品种上花叶病毒病典型病样，在感病寄主上繁殖鉴定，筛选出呈明显花叶症状的病样，采用摩擦接种法接种到感病品种上进行单斑分离，获得纯化分离物，将纯化的大豆花叶病毒阳性分离物分别在感病品种上繁殖后，冷冻干燥保存备用。

4.2 毒源扩繁

在防虫网室中，将大豆病毒株系分别在感病品种上进行扩繁。定期喷药杀灭蚜虫，以保证试验毒源的纯度。病叶装入无菌塑料袋置低温冰箱保存，或隔3个月接种繁殖1次。

4.3 接种毒源制备

从发病植株取新鲜的病叶，将新鲜病叶与磷酸缓冲液(0.1M，pH 7.0)按质量比1∶5的比例置于研钵中，加金刚砂(600目)少许，将病叶研磨成匀浆备用。

4.4 对照品种

鉴定评价试验设置一个感病对照品种。感病对照品种要求高度感病，即正常年份的病毒病病情指数能达到50.0左右，且感病性稳定。

5 鉴定评价方法

5.1 供试品种的种植要求

供试品种按正常播种季节播种，大豆种子应符合GB1352-2009要求。每个品种采取随机区组排列，重复3次，2行区，行长2.0m，每小区种植30株以上。

5.2 接种时间

大豆播种出苗后，在植株第一对真叶完全展开时进行第1次接种，在第1片复叶展开时重复接种1次。

5.3 接种方法

病毒株系需要分别独立接种，且不同病毒株系接种的植株需要采用防虫网分隔。

采用摩擦接种法。用接种刷蘸取毒液，采用人工摩擦接种方法接种，接种后用清水冲洗叶片表面，将残留物冲净。

5.4 田间管理

在人工鉴定防虫网室中，试验采取净作方式，肥水管理按照常规进行，试验地肥料使用应符合NY/T 496、DB 51/ 338的要求，灌溉水应符合GB 5084要求。在大豆苗期和成株期不防治病毒病，可用选择性除草剂防除田间杂草，但需要施用杀虫剂、杀螨剂防治蚜虫、叶螨等害虫。病虫防控药剂应符合GB/T 8321、DB51/337的要求。

表1 花叶型病情级别划分标准

表2 坏死型病情级别划分标准

5.5 调查时间及方法

在第2次接种后20～30d，病毒病症状稳定时调查发病情况，逐株记载供试品种植株的病毒病症状类型、病级。每品种每重复至少调查25株。

5.6 病级划分标准

如果在同一植株上同时出现花叶、坏死2种症状，病级则取级别高者。

5.7 抗性型划分标准

5.7.1 计算方法 根据各品种的发病程度级别，计算发病株率、病情指数。

发病株率=(发病株数/调查总株数)×100%

病情指数(DI)=Σ(各级病株数×相应病级)/(调查总株数×最高病级)×100

5.7.2 抗病性评价 根据各品种的相对病情指数，按照下表标准评价各品种的抗病性。

表3 抗病性评价标准