不同干燥方法的当归药材中指标成分含量测定△

李旭，李成义，强正泽，何军刚，祝健鸿，李波，李硕，王燕，郑贵森

甘肃中医药大学 药学院，甘肃 兰州 730000

当归为伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根，味甘、辛，性温，归肝、心、脾经，具有补血活血、调经止痛、润肠通便的功效[1]。当归所含化学成分复杂，主要有苯酞类、有机酸、多糖等[2-3]。其药理作用广泛，表现在对呼吸、循环、免疫、神经等多个系统的作用，如当归中的成分阿魏酸具有抗血小板凝集、抗血栓形成、保护心肌等作用，苯酞类成分具有抗肿瘤活性、镇痛、解痉、降压、抗炎等作用[4-8]。因此，本研究通过HPLC同时测定当归中有机酸(绿原酸、阿魏酸)和苯酞类物质(洋川芎内酯A、正丁基苯酞、Z-藁本内酯)的含量，对不同干燥处理后的当归药材进行分析比较，以期为现代干燥方法的应用提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

101型电热鼓风干燥箱(北京科伟永兴仪器有限公司)；热泵干燥设备(天士力中天药业)；CEM SAM-255微波干燥箱(美国CEM公司)；DAF-6020型真空干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)；Agilent 1100高效液相色谱仪(G13158 DAD检测器，美国Agilent公司)；KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；FW177型中草药粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)；CAV214C型电子天平(美国奥豪斯公司)；BT25S型1/100 000电子天平(北京赛多利斯仪器有限公司)；Milli-Q Century超纯水机(德国默克公司)。

1.2 材料

阿魏酸(批号：110753-201718，纯度≥99.6%)、绿原酸(批号：110773-201012，纯度≥99.3%)均购自中国食品药品检定研究院；洋川芎内酯A(批号：62006-39-7，纯度≥98%)、正丁基苯酞(批号：6066-49-5，纯度≥98%)、Z-藁本内酯(批号：4431-01-0，纯度≥98%)均购自北京北纳创联生物技术研究院；乙酸(分析纯，烟台市双双化工有限公司，批号：20140103)；甲醇(分析纯，批号：20171101)、甲醇(色谱纯，批号：20171215)、乙腈(色谱纯，批号：20180118)均购自天津市大茂化学试剂厂。

当归新鲜样品采自甘肃岷县同一样地，经甘肃中医药大学药学院李成义教授鉴定，为伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels的根。将采集的新鲜当归根随机分为14份，做不同的干燥处理，得到的干燥药材粉碎后过50目筛，样品信息见表1。

表1 当归样品信息

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为TC-C18(2)色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈(A)-1%乙酸水溶液(B)，梯度洗脱(0～25 min，5%～25%A；25～40 min，25%～55%A；40～60 min，55%～80%A)，流速0.6 mL·min-1，检测波长280 nm，柱温30 ℃，进样量10 μL[9]。

2.2 对照品溶液的制备

精密称定适量的阿魏酸、绿原酸、洋川芎内酯A、正丁基苯酞于10 mL容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成质量浓度为0.21、0.25、0.14、0.06 mg·mL-1的混合对照品溶液；取Z-藁本内酯对照品适量，精密称定，甲醇溶解并定容，配制成质量浓度为3.05 mg·mL-1的Z-藁本内酯对照品溶液。对照品溶液色谱图见图1。

2.3 供试品溶液的制备

取当归药材粉末1.0 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入20 mL 50%甲醇，精密称定。超声提取40 min后冷却，再以50%甲醇补足减失的质量，摇匀，静置。取上清液过0.45 μm微孔滤膜，即为供试品溶液。供试品溶液色谱图见图1。

注：A.混合对照品溶液；B.Z-藁本内酯对照品溶液；C.供试品溶液；1.绿原酸；2.阿魏酸；3.洋川芎内酯A；4.正丁基苯酞；5.Z-藁本内酯。图1 对照品和供试品溶液色谱图

2.4 方法学考察

2.4.1 线性范围考察 精密吸取混合对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0、2.0、3.0 mL于5 mL容量瓶中，甲醇定容，摇匀。精密吸取Z-藁本内酯对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0 mL于5 mL容量瓶中，甲醇定容，摇匀。按2.1项下色谱条件测定。以5个成分的质量浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，得回归方程，见表2。

表2 5个成分的回归方程、相关系数及线性范围

2.4.2 精密度试验 取S4号样品约1.0 g，精密称定，按2.1、2.3项下方法测定，连续进样6次，计算得5个成分含量的RSD为0.14%～1.65%，表明仪器精密度良好。

2.4.3 稳定性试验 取S4号样品约1.0 g，精密称定，按2.1、2.3项下方法测定，分别在0、2、4、8、12、24 h进样检测，计算得5个成分含量的RSD为0.37%～2.83%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.4.4 重复性试验 取S4号样品6份，每份约1.0 g，精密称定，按2.1、2.3项下方法测定，计算得绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯A、正丁基苯酞、Z-藁本内酯的平均质量分数分别为1.06、1.03、0.47、0.25、16.62 mg·g-1，RSD为1.26%～2.53%，表明方法重复性良好。

2.4.5 加样回收率试验 取S4号样品6份，每份约0.5 g，精密称定，对照品加入量与供试品中待测定成分量之比为1∶1，按2.1、2.3项下方法测定，加样回收率试验结果见表3。由表中各成分回收率及RSD可以看出，该方法准确度良好。

2.5 样品含量测定

取14批不同方法干燥的当归药材，每批样品3份，每份约1.0 g，精密称定，按2.3项下方法制备供试品溶液，2.1项下色谱条件测定，以干燥品计算，测定结果见表4。

表3 5个成分的加样回收率试验结果(n=6)

表4 当归不同干燥品成分测定结果 mg·g-1

注：—表示含量很低。

3 讨论

本研究采用HPLC同时测定不同干燥方法处理后当归药材的指标成分，发现当归不同干燥品的指标成分含量存在差异性，同一成分的含量相差数倍。阿魏酸质量分数为0.749 1～1.486 9 mg·g-1，变幅较小，均符合2015年版《中华人民共和国药典》规定(含阿魏酸不得少于0.050%)，其中，60 ℃热泵干燥品阿魏酸质量分数最高，为1.486 9 mg·g-1。绿原酸以80 ℃微波干燥的药材质量分数最高，为2.788 5 mg·g-1。洋川芎内酯A以50 ℃热泵干燥的药材质量分数最高，为1.068 2 mg·g-1。正丁基苯酞以40 ℃减压干燥的药材质量分数最高，为0.848 1 mg·g-1。Z-藁本内酯以60 ℃热泵干燥的药材质量分数最高，为22.270 4 mg·g-1。

干燥方式对当归药材外观性状的影响集中在表面、断面颜色和气味3个方面。熏干当归表面颜色为棕褐色，其余为浅棕色。低温干燥(如：阴干、40 ℃烘干、40 ℃热泵干燥)当归断面色多黄白，较高温干燥则为黄棕色，偶有焦斑，熏干当归为黄褐色。阴干、低温干燥、微波干燥、熏干当归气味较浓郁，微波干燥、较高温干燥当归有焦香味，熏干当归则为烟熏味。与传统阴干当归相比，热泵干燥和低温烘干当归性状与之最为接近，基于“辨状论质”观点，可将此两种干燥方法作为当归适宜产地加工干燥方法。

以经济可行性的角度评价不同干燥方法，阴干、晒干、熏干为自然干燥，无电能消耗，设备干燥总能耗因干燥设备参数及干燥周期的不同而不同。本研究中，烘干、微波干燥、减压干燥在实验室小设备中进行，设备输出功率低，耗电量低。热泵干燥在产地大型干燥设备中进行，设备输出功率高，耗电量高。干燥设备规格不一致，上述分析结果存在一定的局限性。从规模化、规范化加工生产的角度分析，自然干燥难以形成规范，微波干燥、减压干燥仍处在实验室研究阶段，烘干、热泵干燥具有明显优势。

目前市场上流通的当归以阴干、晒干为主要的加工方式，干燥时间长，易受自然环境因素影响。本研究将热泵干燥应用于当归药材的产地加工，同传统阴干、晒干相比，具有一定的优势，耗时短，对指标成分的保留有一定的作用，适用于大规模干燥；同相同温度热风干燥(烘干)相比，指标成分阿魏酸、洋川芎内酯A和Z-藁本内酯的含量较高。因此，可将热泵干燥作为当归药材产地加工干燥处理的新方法。